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文档简介

第五节免疫标记技术免疫标记技术是将某一特定的易于检测的分子或原子联结在抗体或抗原上，从而检测相应抗体或抗原的存在及所在部位的一种技术，主要有荧光抗体、酶标记抗体、放射免疫（同位素技术）、免疫电镜及核酸探针等技术。

一、荧光抗体直接法和间接法两种。1.定义：用荧光物标记抗体来检测细胞或组织中相应抗原或抗体的技术，又称荧光抗体技术。2.荧光物种类：异硫氰酸荧光素、罗丹明荧光素、二氯三嗪基氨基荧光素等3.种类：包括直接法和间接法

免疫荧光例：直接法：将待测标本固定于玻片表面，滴加已知荧光抗体后再以缓冲液冲洗，干燥后于荧光显微镜下观察。

(1)过程：

+待测抗原

荧光素+抗体

荧光抗体(一段时间后冲洗)荧光镜检测结果：

(2)结果：阳性

—可见带荧光的抗原抗体复合物；

阴性

—无荧光(因为带荧光的抗体不能与抗原结合，被冲洗掉)

(3)用途：用以检测病毒感染细胞、细菌和沉积于组织中的免疫复合物等。

(4)特点：简单、特异性高；敏感性低、同时检测多种抗原时较复杂。

二、酶标记抗体（一）酶标记抗体的原理：

通过化学方法将酶与抗体结合起来，标记后的抗体仍具备与相应抗原结合的免疫学活性以及酶的催化活性。酶标记抗原抗体复合物上的酶在遇到相应底物时，能催化底物分解，并使底物中的供氢体呈现颜色反应。标记酶：辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶；它们与抗原或抗体结合后活性不受影响。底物：过氧化氢、邻苯二胺、对硝基苯磷酸酯。特点：敏感性高、特异性强，既可定性又可定量。

（二）酶标记抗体的分类

1、组化法

用于检测组织细胞中抗原、抗体及其它成分。（1）直接法（2）间接法

2、测定法

用于抗原或抗体的定量测定。常用的是酶联免疫吸附试验法（ELISA)。（1）双抗夹心法：用于测定抗原（2）间接法(动画演示)：常用于测定抗体。将已知抗原吸附于固相载体上，加待检标本（可能含相应抗体）与之结合（3）竞争法（动画演示）：常用于

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