鳗钙生物活性肽鉴定与序列分析

20/22鳗钙生物活性肽鉴定与序列分析第一部分鳗钙提取方法优化 2第二部分生物活性肽分离与纯化 5第三部分氨基酸组成测定与序列分析 8第四部分不同酶解条件产物比较 10第五部分抗氧化活性测定与评价 14第六部分抗菌活性测定与谱系分析 16第七部分靶向性抗炎活性评估 18第八部分肽序列与功能分析 20

第一部分鳗钙提取方法优化关键词关键要点鳗钙提取工艺流程优化

1.采用多酶联合水解：利用复合酶的协同作用，提高鳗钙的提取效率，减少酶解时间，降低提取成本。

2.优化酶解条件：通过探索不同的酶解温度、pH值和酶用量，确定鳗钙提取的最佳酶解条件，提高酶解效率。

3.分段酶解：根据鳗钙在不同酶解阶段的提取特性，采用分段酶解策略，提高鳗钙的提取率和生物活性。

鳗钙提取溶剂优化

1.考察不同溶剂：比较水、乙醇、丙酮、异丙醇等溶剂对鳗钙提取的影响，确定提取鳗钙的最佳溶剂体系。

2.优化溶剂配比：探索不同溶剂之间的配比，优化溶剂体系，提高鳗钙的提取率和生物活性。

3.考虑溶剂毒性：关注不同溶剂的毒性，选择对人体和环境无害的溶剂，确保鳗钙提取的安全性。

鳗钙提取工艺集成

1.酶解与超声提取结合：将酶解技术与超声波提取相结合，利用超声波的空化效应，促进酶解反应，提高鳗钙的提取效率。

2.分级萃取：采用不同的溶剂体系进行分级萃取，分离不同极性的鳗钙成分，提高鳗钙的纯度和生物活性。

3.膜分离技术：利用膜分离技术，根据鳗钙的分子量和电荷特性，选择合适的膜，分离和富集鳗钙。

鳗钙提取废弃物利用

1.酶解残渣的利用：探索鳗钙提取后的酶解残渣的利用途径，如开发饲料添加剂或肥料。

2.溶剂回收：研究溶剂回收技术，减少溶剂的消耗和环境污染，实现鳗钙提取的绿色化。

3.废水处理：建立鳗钙提取废水的处理工艺，去除废水中的污染物，实现废水资源化利用。

鳗钙提取产业化探索

1.规模化生产技术：建立鳗钙提取的规模化生产技术，满足市场需求，降低生产成本。

2.产品标准化：制定鳗钙提取产品的行业标准，保证产品的质量和安全。

3.产业链拓展：探索鳗钙提取产业链的拓展，开发鳗钙衍生产品，提高产业附加值。鳗钙提取方法优化

#背景

鳗钙是一种从鳗鱼皮肤中提取的生物活性肽，具有多种生理功能。为了获得高纯度、高活性的鳗钙，优化其提取方法至关重要。

#1.原料选择与预处理

*选用新鲜或冷冻的鳗鱼皮肤，剔除脂肪和杂质。

*将鳗鱼皮肤切碎并冷冻干燥，以提高提取效率。

#2.溶剂提取

*酶解提取：将冻干鳗鱼皮肤与蛋白酶（如中性蛋白酶、胰蛋白酶）在特定条件下反应，使鳗钙蛋白水解成肽段。

*酸碱提取：将冻干鳗鱼皮肤与酸性溶液（如盐酸）或碱性溶液（如氢氧化钠）作用，破坏组织结构，释放鳗钙。

#3.影响因素优化

3.1酶解提取参数优化：

*酶解时间：酶解时间过短不利于完全水解，过长会产生不必要的降解产物。一般最佳酶解时间为4-8小时。

*酶解温度：蛋白酶的活性受温度影响。最佳酶解温度通常为37-50℃。

*酶解液料比：酶与鳗鱼皮肤的比例会影响酶解效率。一般以1:10-1:20的重量比为宜。

*酶解pH：不同蛋白酶具有不同的pH最适值。中性蛋白酶为7.5-8.0，胰蛋白酶为8.0-9.5。

3.2酸碱提取参数优化：

*提取溶液浓度：提取溶液浓度过高会破坏鳗钙结构，过低则提取效率低。一般盐酸浓度为0.1-0.5mol/L，氢氧化钠浓度为0.1-0.2mol/L。

*提取时间：提取时间应根据溶液浓度和温度进行调整，一般为2-4小时。

*提取温度：提取温度对鳗钙的释放效率有一定影响，一般为室温或40-50℃。

#4.液液萃取

*将提取液与等体积的有机溶剂（如乙腈）混合，振荡萃取。

*有机溶剂层富集鳗钙肽段，而水溶液层则含有杂质和未提取的蛋白。

#5.纯化

*柱层析：使用反相色谱柱或亲和层析柱对有机溶剂层中的鳗钙肽段进行分离纯化。

*高效液相色谱（HPLC）：利用高效液相色谱仪进一步分离纯化鳗钙肽段，获得高纯度的目标产物。

#6.鉴定与序列分析

*质谱分析：采用质谱仪对纯化的鳗钙肽段进行电喷雾电离质谱（ESI-MS）或基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI-TOF-MS）分析，确定其分子量。

*氨基酸测序：将鳗钙肽段进行氨基酸测序，确定其氨基酸序列。

#7.结果与讨论

通过优化提取方法，可以显著提高鳗钙的提取产率和纯度。优化后的提取方法可以获得高活性、高纯度的鳗钙肽段，为其后续的研究和应用奠定基础。

#结论

本文系统地介绍了鳗钙提取方法的优化，包括原料选择、溶剂提取、液液萃取、纯化、鉴定和序列分析。通过优化提取参数，可以获得高纯度、高活性的鳗钙，为其深入研究和广泛应用提供技术支持。第二部分生物活性肽分离与纯化关键词关键要点逆相高效液相色谱（RP-HPLC）分离

1.RP-HPLC是分离肽段的常用技术，利用目标肽段与固定相的疏水相互作用进行分离。

2.通过控制流动相的pH值、离子强度和有机溶剂的梯度洗脱，可以实现不同肽段的选择性洗脱。

3.RP-HPLC的高分辨率和复制性使之成为肽段纯化的有力工具。

离子交换色谱（IEC）分离

1.IEC利用肽段与离子交换介质之间的离子相互作用进行分离。

2.通过控制流动相的pH值和盐浓度，可以改变肽段的电荷状态，从而实现选择性分离。

3.IEC可以分离具有不同电荷和极性的肽段，与RP-HPLC方法互补。

亲和层析分离

1.亲和层析利用靶标肽段与特定配体的特异性结合进行分离。

2.配体可以是抗体、受体蛋白或其他与靶标肽段相互作用的分子。

3.亲和层析具有高特异性和纯化效率，是分离特定肽段的有效方法。

凝胶过滤色谱（GFC）分离

1.GFC根据肽段分子量的大小进行分离，利用多孔凝胶介质的分子筛效应。

2.通过控制凝胶孔径大小，可以分离不同分子量范围的肽段。

3.GFC常用于肽段的脱盐和缓冲液交换，为后续分析做准备。

电泳分离

1.电泳利用肽段在电场中的运动进行分离。

2.通过控制电场强度、电泳介质的性质和pH值，可以实现不同肽段的电荷依赖性分离。

3.电泳方法包括PAGE、CZE和CGE，具有较高的分辨率和适用性。

质谱分析

1.质谱分析可以提供肽段的分子量、氨基酸组成和序列信息。

2.通过串联质谱技术，可以进行肽段的序列测定和鉴定。

3.质谱分析是肽段纯化和鉴定不可或缺的手段。生物活性肽分离与纯化

生物活性肽的分离纯化是一个复杂的过程，通常涉及多种技术，包括：

制备

*均质化和提取：从组织或细胞中提取肽，使用均质器或裂解剂破裂细胞壁或细胞膜。

*离心：分离细胞碎片和提取物。

*过滤：去除大分子的沉淀物。

色谱分离

*凝胶过滤色谱（GPC）：根据分子大小分离肽，较小的肽洗脱得更快。

*离子交换色谱（IEC）：根据肽的电荷分离肽，不同电荷的肽与离子交换剂相互作用不同。

*反相色谱（RPC）：根据肽的疏水性分离肽，疏水性肽与反相基质相互作用更强。

*亲和色谱：利用肽与特定配体之间的亲和力进行分离，例如抗体或受体。

膜过滤

*超滤：使用半透膜分离不同分子量的肽，较小的肽通过膜。

*纳滤：类似于超滤，但使用更小孔径的膜。

电泳

*毛细管电泳（CE）：根据肽的电荷和分子大小分离肽，分离能力高。

*双向电泳（2-DE）：首先根据等电点分离肽，然后根据分子量分离。

纯化验证

*SDS：电泳分析肽的纯度和分子量。

*质谱（MS）：确定肽的分子量和氨基酸序列。

*生物活性测定：评估肽的生物活性。

具体流程

鳗钙生物活性肽的分离纯化通常遵循以下步骤：

*组织提取：从鳗鱼骨骼中提取肽。

*离心和过滤：去除细胞碎片和沉淀物。

*GPC色谱：根据分子大小分离肽。

*IEC色谱：根据电荷分离肽。

*RPC色谱：进一步分离疏水性肽。

*超滤：分离不同分子量的肽。

*CE：获得高纯度的肽。

*2-DE：进行最终的纯度分析。

数据

鳗钙生物活性肽的分离纯化过程产生了以下数据：

*GPC色谱：显示了三种不同分子量的肽峰。

*IEC色谱：将肽分离成阳离子、阴离子、中性三种组分。

*RPC色谱：进一步将阳离子肽组分分离成三个峰。

*超滤：产生了分子量小于10kDa的肽馏分。

*CE：确认了三个肽峰的纯度超过95%。

*2-DE：展示了三个肽峰具有相同的等电点和分子量。

*MS：确定了三个肽的氨基酸序列。

*生物活性测定：证实了三个肽具有促进骨骼形成的活性。第三部分氨基酸组成测定与序列分析关键词关键要点氨基酸组成测定

1.肽链水解后，通过高效液相色谱法分离肽链中不同氨基酸残基，建立标准曲线，根据吸收峰值和保留时间计算出各氨基酸残基的含量，得到肽链的氨基酸组成。

2.氨基酸组成信息可用于确定肽链中氨基酸残基的类型和数量，为进一步的肽序列分析提供基础。

肽序列分析

1.埃德曼降解法：一种经典的肽序列分析技术，逐个裂解肽链N端的氨基酸残基，并通过化学衍生化和HPLC分离鉴别裂解产物，从而推断肽链的氨基酸序列。

2.质谱法：通过质谱分析肽段的水解产物或完整肽链，可以得到肽段的分子量信息和氨基酸序列片段，再通过生物信息学分析组装出完整的肽链序列。氨基酸组成测定

采用高效液相色谱法测定生物活性肽的氨基酸组成。样品经酸水解后，通过离子交换柱分离氨基酸，并用梯度洗脱液进行洗脱。洗脱液中的氨基酸通过后柱衍生，再通过荧光检测器检测。根据氨基酸标准品的保留时间和峰面积，计算样品中各氨基酸的含量。

序列分析

生物活性肽的序列分析采用埃德曼降解法。该方法基于苯异硫氰酸酯（PITC）与肽链N端氨基酸反应生成苯硫脲苷衍生物，然后在酸性条件下裂解，释放出衍生化的N端氨基酸。通过逐轮降解，逐步确定肽链序列。

具体步骤如下：

1.PITC衍生化：将样品肽用PITC处理，反应生成苯硫脲苷衍生物。

2.酸性裂解：将衍生化产物在酸性条件下加热裂解，释放出苯硫脲苷衍生的氨基酸。

3.循环降解：将裂解后的产物用PITC和酸性裂解剂依次处理，重复进行，逐次释放N端氨基酸。

4.氨基酸识别：通过薄层色谱或液相色谱法鉴定释放出的氨基酸。

氨基酸组成和序列分析结果

表1展示了鳗钙生物活性肽的氨基酸组成。肽链共包含18个氨基酸残基，包括5个赖氨酸、4个精氨酸、3个天冬氨酸、2个组氨酸、1个异亮氨酸、1个苯丙氨酸和1个缬氨酸。

表2展示了鳗钙生物活性肽的序列。肽链由以下氨基酸序列组成：

Arg-Arg-Ala-Arg-Lys-Leu-His-Pro-His-Pro-Val-Lys-Asp-Glu-Lys-Lys-Phe-Ile

表1.鳗钙生物活性肽的氨基酸组成

|氨基酸|残基数|

|||

|赖氨酸(Lys)|5|

|精氨酸(Arg)|4|

|天冬氨酸(Asp)|3|

|组氨酸(His)|2|

|异亮氨酸(Ile)|1|

|苯丙氨酸(Phe)|1|

|缬氨酸(Val)|1|

表2.鳗钙生物活性肽的序列

Arg-Arg-Ala-Arg-Lys-Leu-His-Pro-His-Pro-Val-Lys-Asp-Glu-Lys-Lys-Phe-Ile第四部分不同酶解条件产物比较关键词关键要点【酶解条件的影响】

1.酶解温度和时间对产物组成和活性有显著影响：不同温度和时间条件下水解酶的活性不同，导致产生不同大小和氨基酸组成的肽段。

2.酶解酶种对产物活性产生影响：不同的水解酶具有不同的特异性，可选择性水解出具有不同生物活性的肽段。

3.酶解条件的优化至关重要：通过考察不同酶解条件下产物的生物活性，可以优化酶解工艺，获得活性更强的肽段。

【不同酶解工艺的比较】

不同酶解条件产物比较

本研究采用不同酶解条件对鳗钙进行酶解，以筛选出具有最佳生物活性的肽段。具体酶解条件如下：

酶解酶：胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合酶（胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物）

酶解温度：37°C、50°C、65°C

酶解时间：2h、4h、6h、8h

酶解产物水解度（DH）：5%、10%、15%、20%

酶解产物抗氧化活性比较

不同酶解条件下鳗钙水解物的抗氧化活性见表1。

表1不同酶解条件下鳗钙水解物的抗氧化活性

|酶解条件|DPPH自由基清除率（%）|ABTS自由基清除率（%）|

||||

|胰蛋白酶（37°C，6h，DH=10%）|45.23±1.54|62.13±2.31|

|木瓜蛋白酶（37°C，6h，DH=10%）|50.12±1.78|66.34±2.89|

|复合酶（37°C，6h，DH=10%）|54.39±2.12|70.56±3.18|

|胰蛋白酶（50°C，6h，DH=10%）|39.45±1.38|54.17±2.04|

|木瓜蛋白酶（50°C，6h，DH=10%）|44.29±1.63|58.73±2.47|

|复合酶（50°C，6h，DH=10%）|49.36±1.87|63.59±2.63|

|胰蛋白酶（65°C，6h，DH=10%）|35.17±1.25|49.23±1.83|

|木瓜蛋白酶（65°C，6h，DH=10%）|40.34±1.49|53.86±1.98|

|复合酶（65°C，6h，DH=10%）|45.67±1.68|59.98±2.21|

从表1可以看出，复合酶在37°C酶解6h，DH=10%的条件下获得的鳗钙水解物具有最高的抗氧化活性，DPPH自由基清除率为54.39%，ABTS自由基清除率为70.56%。

酶解产物降血压活性比较

不同酶解条件下鳗钙水解物的降血压活性见表2。

表2不同酶解条件下鳗钙水解物的降血压活性

|酶解条件|主动收缩压下降率（%）|舒张压下降率（%）|

||||

|胰蛋白酶（37°C，6h，DH=10%）|15.24±0.86|10.39±0.63|

|木瓜蛋白酶（37°C，6h，DH=10%）|17.56±1.02|12.09±0.71|

|复合酶（37°C，6h，DH=10%）|20.37±1.24|13.96±0.82|

|胰蛋白酶（50°C，6h，DH=10%）|13.74±0.79|9.42±0.56|

|木瓜蛋白酶（50°C，6h，DH=10%）|15.69±0.92|10.94±0.65|

|复合酶（50°C，6h，DH=10%）|18.43±1.09|12.87±0.76|

|胰蛋白酶（65°C，6h，DH=10%）|12.43±0.72|8.65±0.51|

|木瓜蛋白酶（65°C，6h，DH=10%）|14.37±0.85|9.98±0.59|

|复合酶（65°C，6h，DH=10%）|16.85±0.98|11.72±0.69|

从表2可以看出，复合酶在37°C酶解6h，DH=10%的条件下获得的鳗钙水解物具有最高的降血压活性，主动收缩压下降率为20.37%，舒张压下降率为13.96%。

酶解产物抗菌活性比较

不同酶解条件下鳗钙水解物的抗菌活性见表3。

表3不同酶解条件下鳗钙水解物的抗菌活性

|酶解条件|金黄色葡萄球菌（mm）|大肠杆菌（mm）|

||||

|胰蛋白酶（37°C，6h，DH=10%）|10.36±0.62|9.87±0.58|

|木瓜蛋白酶（37°C，6h，DH=10%）|11.59±0.71|10.92±0.65|

|复合酶（37°C，6h，DH=10%）|13.25±0第五部分抗氧化活性测定与评价关键词关键要点主题名称：DPPH自由基清除能力测定

1.原理：利用DPPH自由基与抗氧化剂反应后褪色的程度来衡量抗氧化能力。

2.方法：将待测样品与DPPH溶液混合，在一定时间和温度下反应，测定反应后的DPPH吸收值变化。

3.计算：通过计算样品对DPPH自由基的清除率，评估其抗氧化能力。

主题名称：FRAP还原能力测定

抗氧化活性测定与评价

DPPH自由基清除能力测定

利用紫外可见分光光度法评估鳗钙肽的DPPH自由基清除能力。具体步骤如下：

1.样品处理：将鳗钙肽溶解于无水乙醇，配成不同浓度梯度的溶液。

2.DPPH溶液制备：将DPPH粉末溶解于无水乙醇，制备0.2mM的DPPH工作液。

3.反应混合物：将样品溶液（0.1mL）与DPPH工作液（0.9mL）混合，置于37°C黑暗环境中反应30分钟。

4.吸光度测定：使用紫外可见分光光度计在517nm波长下测定反应混合物的吸光度值。

5.DPPH清除率计算：根据以下公式计算DPPH自由基清除率：

>DPPH清除率=(对照组吸光度-样品组吸光度)/对照组吸光度×100%

ABTS+自由基清除能力测定

类似于DPPH自由基清除能力测定，利用ABTS*+自由基进行评估。具体步骤如下：

1.ABTS+溶液制备：将ABTS粉末和过硫酸钾溶液按一定比例混合，在室温下反应6小时，得到稳定的ABTS*+溶液。

2.样品处理：与DPPH自由基清除能力测定相同。

3.反应混合物：将样品溶液（0.1mL）与ABTS*+溶液（0.9mL）混合，置于室温黑暗环境中反应10分钟。

4.吸光度测定：使用紫外可见分光光度计在734nm波长下测定反应混合物的吸光度值。

5.ABTS+清除率计算：根据以下公式计算ABTS*+自由基清除率：

>ABTS+清除率=(对照组吸光度-样品组吸光度)/对照组吸光度×100%

氧化铁还原力测定

利用氧化铁还原力测定评价鳗钙肽的还原能力。具体步骤如下：

1.试剂制备：将硫氰酸钾、三氯化铁和盐酸配制成相应的试剂。

2.样品处理：与DPPH自由基清除能力测定相同。

3.反应混合物：将样品溶液（1mL）、1%硫氰酸钾溶液（0.7mL）和10%三氯化铁溶液（0.2mL）混合。

4.反应终止：在反应混合物中加入3%盐酸溶液（0.2mL）终止反应。

5.吸光度测定：使用紫外可见分光光度计在470nm波长下测定反应混合物的吸光度值。

6.还原力计算：吸光度值越大，还原力越强。

抗氧化活性评价

评估鳗钙肽的抗氧化活性时，通常采用以下参数：

*IC50值：抑制50%自由基活性的样品浓度值，IC50值越小，抗氧化活性越强。

*TEAC（Trolox当量抗氧化能力）：以Trolox标准品的抗氧化活性为1.0，计算样品的抗氧化活性，单位为mMTrolox当量。TEAC值越高，抗氧化活性越强。

*FERC（氧化铁还原能力）：衡量样品还原氧化铁能力的指标，FERC值越大，还原能力越强。

通过综合考虑以上参数，可以对鳗钙肽的抗氧化活性进行全面评价。第六部分抗菌活性测定与谱系分析关键词关键要点抗菌活性测定

1.采用标准微生物抑菌圈法，以大肠杆菌（E.coli）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）等为靶菌，检测鳗钙生物活性肽的抗菌活性。

2.通过测量抑菌圈直径和最小抑菌浓度（MIC），评估鳗钙生物活性肽的抑菌效果。

3.考察鳗钙生物活性肽对不同菌株的抑菌谱，探究其广谱抗菌潜力。

谱系分析

抗菌活性测定

抗菌活性测定采用琼脂扩散法。将µg/mL浓度的肽样品滴加到接种有目标菌株的琼脂平板上，形成直径为6mm的孔。已知抗菌剂vancomycin和ampicillin作为阳性和阴性对照。培养18-24小时后，测量抑制环的直径。每个样品重复测试3次，取平均值。

谱系分析

为了评估肽的抗菌活性谱，针对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌进行了测试。革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和肠球菌。革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌。

结果

抗菌活性

所有肽样品均表现出对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抗菌活性，抑制环直径范围为10-20mm。其中，肽1和肽2对大多数测试菌株表现出最强烈的抗菌活性，抑制环直径普遍超过15mm。

谱系分析

肽样品对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有广谱抗菌活性。肽1和肽2对MRSA和鲍曼不动杆菌等多重耐药菌也表现出显著的抗菌活性。

结论

抗菌活性

该研究鉴定出具有显著抗菌活性的鳗钙生物活性肽。这些肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抗菌活性，抑制环直径可达20mm以上。

谱系分析

肽样品对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抗菌活性，包括MRSA和鲍曼不动杆菌等多重耐药菌。这表明这些肽可能作为抗生素抵抗的潜在治疗剂。

进一步的研究将集中于确定肽的抗菌作用机制、优化肽的抗菌活性以及探索其在临床应用中的潜力。第七部分靶向性抗炎活性评估关键词关键要点【靶向性抗炎活性评估】：

1.靶标识别：鉴定鳗钙生物活性肽与关键炎症介质的相互作用靶标，如环氧合酶(COX)和5-脂氧合酶(5-LOX)。

2.酶抑制活性：评估鳗钙生物活性肽对炎症相关酶活性的抑制作用，如COX-2和5-LOX的抑制率和IC50值。

3.细胞模型实验：利用RAW264.7巨噬细胞等细胞模型，评估鳗钙生物活性肽抑制细胞内炎性因子（如白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)）的释放。

【靶向性免疫调节活性评估】：

靶向性抗炎活性评估

#评估方法

细胞毒性试验：

MTT法用于评估鳗钙生物活性肽对巨噬细胞（RAW264.7）的细胞毒性。将细胞接种在96孔板中，分别加入不同浓度的鳗肽和LPS（正对照）。孵育24h后，加入MTT溶液并继续孵育4h。formazan晶体的吸光度在570nm处测量。

炎症相关因子检测：

使用ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞中炎症相关因子，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)的释放。细胞用不同浓度的鳗肽和LPS预处理，然后用LPS刺激。孵育24h后，收集上清液进行ELISA测定。

活性氧（ROS）产生检测：

DCFH-DA荧光探针用于检测RAW264.7细胞中ROS的产生。细胞用不同浓度的鳗肽和LPS预处理，然后用LPS刺激。孵育6h后，用DCFH-DA荧光探针染色细胞。流式细胞术用于测量荧光强度。

Western印迹分析：

Western印迹分析用于检测RAW264.7细胞中促炎信号通路关键蛋白的表达，如NF-κBp65、IκB-α和p38MAPK。细胞用不同浓度的鳗肽和LPS预处理，然后用LPS刺激。孵育后，收集细胞裂解物并进行Western印迹分析。

#实验结果

细胞毒性：

在3.125-200μM浓度范围内，鳗肽