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文档简介

转基因食品定性检测参照国家标准第2页,共28页，2024年2月25日，星期天相关系列标准：第3页,共28页，2024年2月25日，星期天应用范围：GB/T19495的本部分规定了转基因产品检测的核酸定性PCR方法。本部分适用于种子、饲料、食品和环境样品中转基因成分的定性PCR检测。第4页,共28页，2024年2月25日，星期天检测原理：一般原理：定性分析包括对测试样品目标核算序列的筛选检测和特异性检测。在设置合适的对照和在检测下限的情况下，定性检测结果要清楚判断样品是否为转基因产品。本检测方法包括：目标序列的扩增和检测，扩增片段特异性的确证。第5页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR扩增目标序列的扩增是在反应缓冲液中，脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下进行的催化反应。在反应混合体系中不应存在DNA聚合酶的抑制剂。DNA扩增是一个循环的过程：—通过加热使双螺旋DNA变性为单链核酸：—在合适的温度下引物和目标序列发生退火；—在合适的温度下，结合在两条单链上的引物通过DNA聚合酶作用进行PCR延伸反应。第6页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR产物检测和确证可以通过凝胶电泳或其他方法检测PCR产物，必要是可以将PCR产物从凝胶中分离出来进行检测。可以通过限制性内切酶酶切分析、杂交、DNA序列分析或者熔点曲线分析等方法对PCR产物进行确证。采用实时荧光PCR方法检测时，扩增及检测同时进行。第7页,共28页，2024年2月25日，星期天检测步骤：第8页,共28页，2024年2月25日，星期天第9页,共28页，2024年2月25日，星期天第10页,共28页，2024年2月25日，星期天引物设计原则第11页,共28页，2024年2月25日，星期天第12页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR方法的选择：第13页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR反应条件及验证第14页,共28页，2024年2月25日，星期天结果判定：第15页,共28页，2024年2月25日，星期天植物基因组DNA提取方法：CTAB法SDS法试剂盒法第16页,共28页，2024年2月25日，星期天一、物种特异性检测：第17页,共28页，2024年2月25日，星期天第18页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR反应体系：第19页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR反应参数设置：第20页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR结果确证：第21页,共28页，2024年2月25日，星期天二、筛选检测方法第22页,共28页，2024年2月25日，星期天第23页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR反应体系：第24页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR反应参数：第25页,共28页，2024年2月25日，星期天PCR结果确证：第26页,共28页，2024年2月25日，星期天三

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