生物技术专业毕业论文-浙江省部分地区儿童铅污染状况的毒理学调查(任务书+开题报告+文献综述+外文翻译)

PAGEPAGE51毕业手册目录（一）本科毕业论文(设计)正文………………3（二）本科毕业论文(设计)任务书…………………18（三）本科毕业论文(设计)开题报告………………20（四）本科毕业论文(设计)文献综述………………24（五）本科毕业论文(设计)外文翻译…………30本科生毕业论文（设计）浙江省部分地区儿童铅污染状况的毒理学调查姓名：指导老师：合作老师：专业：生物技术提交日期：目录中文摘要………………5外文摘要………………6引言……………………7一、研究对象…………7二、材料和方法………………………71.材料和仪器………………………72.方法………………82.1儿童血铅暴露水平…………82.2基因多态性…………………82.2.1儿童人体外周血DNA提取……………82.2.2基因组DNA扩增………82.2.3PCR产物酶切2.2.4基因型及等位基因比例计算…………92.3尿δ-ALA……………………92.3.1标准曲线的绘制及样品测定………92.3.2标准曲线的绘制………102.3.3样品测定………………102.3.4计算……………………103.统计方法…………10三、结果………………101.儿童血铅水平……………………102.儿童血样标本提取的基因组DNA扩增和酶切的电泳结果……113.儿童基因型分布…………………114.基因多态性对儿童血铅水平的影响……………124.1不同基因型的儿童血铅水平比较…………124.2同一地区基因多态性与血铅水平关系……125.尿δ-ALA检测的效应指标……………………13四、讨论………………13参考文献………………15致谢……………………17浙江省部分地区儿童铅污染状况的毒理学调查摘要：目的研究浙江省部分地区儿童铅暴露情况。方法浙江省5个地区学龄儿童作为研究对象。采集儿童外周静脉血和晨尿，对血铅、δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶基因（ALAD）多态性和尿δ-氨基-γ-酮戊酸(ALA)水平进行分析。结果500名学龄儿童中ALAD1-1基因型有476例（95.2%），ALAD1-2基因型24例（4.8%）,未发现ALAD2-2基因型。等位基因ALAD-1和ALAD-2的频率分别为97.6%和2.4%.淳安和桐乡儿童血铅水平（分别为78.217±2.95μg/L,146.994±1.55μg/L）显著高于开化（53.555±2.29μg/L）；ALAD1-2基因型血铅水平与ALAD1-1基因型血铅水平无显著性差异。路桥儿童尿中δ-ALA水平显著高于开化，桐乡儿童尿δ-ALA显著低于开化，其它地区没有明显差异。结论浙江省部分地区可能存在较高的铅污染，铅对学龄儿童的健康影响值得引起重视。尽管本研究中ALAD1-2基因型并未表现高血铅水平，但作为敏感人群仍需要有关部门进一步做好监测和健康教育宣传。关键词：血铅暴露；血铅水平；ALAD基因多态性；尿δ-ALAThetoxicologysurveyaboutleadpollutioninChildrenfrompartareasofZheJAbstract：ObjectiveTostudyleadexposurelevelsinchildrenfrompartareasofZheJiangprovince.MethodsSchool-agechildrenfrompartareasofZhejiangprovincewerechosen.Peripheralvenousbloodandmorningurineofchildrenwerecollected.Bloodlead,polymorphismofδ-amino–γ-ketoneeaciddehydrationenzymegene(ALAD)andurineδ-aminoacid-γ-ketone(ALA)levelswereanalyzed.ResultsTherewere24casesofALAD1-2genotype(4.8%)in500school-agechildren，and476caseswereALAD1-1genotypes(95.2%),whileALAD2-2genotypewasnotfound.ThefrequencyofalleleALAD-1andALAD-2are97.6%and2.4%,respectively.BloodleadlevelsinthechildrenfromChunAnandTongXiang（78.217±2.95μg/L,146.994±1.55μg/L,respectively）significantlyhigherthanthoseofKaiHua（53.555±2.29μg/L）.NosignificantdifferenceswereobservedinbloodleadlevelsbetweenALAD1-2andALAD1-1genotype.δ-ALAlevelsinurinefromLuQiaowassignificantlyhigherthanthoseofKaiHua,however,thoseofTongXiangweresignificantlylowerthanthoseofKaiHua,andnoobviousdifferenceswerefoundamongtheotherareas.ConclusionHighleadpollutionofpartareasinZheJiangprovincemayoccur.Itshouldbeenpaymoreattentiontothehealthofschool-agechildrenexposedleadpollution.AlthoughALAD1-2genotypeswithhighbloodleadlevelswerenotshowKeywords:Leadexposure;Bloodleadlevels;ALADgenepolymorphism;Urineδ–ALA引言铅是一种具有神经性的重金属元素，对儿童的生长发育，智力发育等有不可逆的危害性。随着现代工业和交通业的高速发展，环境污染日趋严重，铅中毒已经成为危害儿童健康的主要因素之一[1]。δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶(ALAD)基因遗传多态性与铅毒性易感性的关系是近年来研究的焦点。ALAD基因多态性在改变铅在体内代谢动力学作用方面起重要作用，从而影响其在血铅水平及毒理作用。国内已有关于学龄儿童的家庭情况，居住情况，生活习惯，健康状况及父母所处的职业等因素对血铅暴露影响的研究[2]，发现居住于低楼层；有不良的生活习惯，父母长期从事铅相关职业的儿童铅中毒率较高。关于儿童铅暴露、基因多态性和相关效应在国内也有相关的研究[3,4,5]，但在浙江省尚未见报道。为了了解浙江省儿童血铅暴露情况，本研究从毒理学角度对浙江省部分地区儿童ALAD基因多态性、血铅暴露水平和效应生物标志物尿δ-ALA进行分析，对这些地区儿童的铅暴露与基因易感性以及毒性效应的相关性进行初步的探讨。一、研究对象监测点:浙江省5个地区，具体为：杭州淳安县、衢州开化县、嘉兴桐乡市、金华兰溪市、台州路桥区。由于开化地处山区，工农业业污染比较少，因此在本研究中作为对照点。路桥地区电子垃圾处理工业发达，桐乡皮革业发达，金华兰溪化工医药业发达，淳安造酒业及旅游业发达。研究对象：4-6年级在校学生。收集外周静脉血样，抗凝血0.6-1mL和晨尿(中段尿)15mL。二、材料与方法1材料与仪器1.1材料DNA提取试剂盒QIAGEN公司(批号：51104)DNA扩增试剂盒Takara生物工程（大连）有限公司（批号：DR001A）DNA酶切试剂盒Takara生物工程（大连）有限公司（批号：D1150A）琼脂粉BIOBASICINC公司（批号：AB0013）乙酰乙酸乙酯分析纯，KEYGEN凯基生物公司

对二甲氨基苯甲醛SigmaAldrich95％乙醇杭州长征化学试剂化工厂1.2主要仪器Eppendorfcentrifuge5810离心机德国Eppendorf份公司XW-80A涡旋混匀器上海医科大学仪器厂WFH-101B紫外凝胶成像仪上海精科仪器有限公司PTC-200PCR仪美国生物科技有限公司7K微型离心机中国制造DK-600S37℃水浴箱BIO-RAD电泳槽美国生物科技有限公司722型分光光度计上海横平科学仪器有限公司2方法2.1儿童血铅暴露水平血铅的测定本次研究选择开化、桐乡、淳安三个地区的血液标本进行血铅水平检测，方法参考《血铅临床检验技术规范》中的石墨炉院子吸收光谱法（GFAAS）。2.2基因多态性2.2.1儿童人体外周血DNA提取⑴.人外周血2-3mL，EDTA-K2抗凝。小心颠倒混匀，取出0.2mL，置于1.5mLEP管中。⑵.加入20μL/tubeQIAGENProtease（临用前按kit说明配制，溶于1.2mlsocrent），盖上cap，上下颠倒混匀2次。⑶.加入200μL，AL，vortex15seconds。⑷.56℃10min。⑸.加入200μL/tube无水乙醇，vortex15seconds。⑹.快速离心，将EP管中的液体小心转移到minispincolumn中，6000g，2min。⑺.弃去套管中的液体，并换上清洁的套管。⑻.加入500μL/tubeBUFFERAW1.，6000g，2min。⑼.弃去套管中的液体，并换上清洁的套管。⑽.加入500μL/tubeBUFFERAW2，20000g，2min。⑾.弃去套管中的液体，并将minispincolumn置回其中。⑿.20000g，2min，以便彻底清除column中的液体。⒀.将minispincolumn置于清洁的EP管中，室温静置5min。⒁.加入200μL/tubeBUFFERAE，6000g，2min。⒂.收集EP管，做好标记后，-802.2.2基因组DNA扩增采用PCR-RFLP技术对提取的DNA进行扩增。扩增引物：上游：5’-AGACAGACATTAGCTCAGTA-3’下游：5’-GGCAAAGACCACGTCCATTC-3’，PCR扩增目的基因片段长度为318bp。(1)PCR反应体系见表1.表1PCR反应体系成分体积10×Buffer缓冲液3μLdNTP10mMeach2.4μLPrimer110uM1μLPrimer210uM1μLTaq酶(5U/μL)0.25μL模板1μLddH2O21.35μL设立空白对照：不加DNA溶液，其它同上。将上述反应体系混匀，并离心数秒后开始PCR扩增。（2）扩增条件PCR循环参数：预变性94℃10min，94℃30s，55℃30s，72℃30s，36个循环，终末延伸72℃10min，低温保持4℃。扩增结束后，取5μL扩增产物加1μL10×上样缓冲液，混匀后，在1.5%琼脂糖凝胶中电泳40min（115V恒压），同时将Marker（DNA分子量标准）5μL2.2.3PCR产物按内切酶的说明书对PCR扩增的ALAD基因片段(318bp)进行酶切。酶切体系为20μL，具体见表2表2MspI酶切反应体系成分体积10×Buffer缓冲液2μLPCR产物12μL0.1%BSA2μLddH2O3μL内切酶1μL将上述体系混匀，并离心数秒后，37℃2.2.4基因型及等位基因比例计算基因型（%）=该地区某种ALAD基因型例数/该地区总的例数。等位基因概率计算根据Hardy-Weinberg平衡（p+q）²=p²+2pq+q²=1推算式中：p、q分别代表等位基因ALAD-1和ALAD-2。2.3尿δ-ALA.2标准曲线的绘制表3为标准曲线绘制体系管号012345标准应用液，mL00.100.300.500.071.00水，mL2.001.901.701.501.301.00δ-ALA含量，μg01.003.005.007.0010.0取6支具塞比色管按表1配置标准管向各管中加入2.0mL缓冲液、0.40mL乙酰乙酸乙酯，混匀。于沸水浴中加热12min，取出冷却至室温。各加入4mL乙酸乙酯，加塞振摇100次，离心分层。分别取出2.0mL乙酸乙酯层于另外6支具塞比色管中，各加入2.0mL显色剂混匀，静置10min。在554nm处，用10ram比色杯，以零管为参比，测定吸光度。以吸光度为纵坐标，δ-ALA的含量为横坐标绘制标准曲线。2.3.3样品测定对每一尿样均取2支具塞比色管，在管中各加入1.0mL尿样、1.0mL水和2.0mL缓冲液混匀。其中一支为样品管，另一支为空白管。向样品管中加入0.40mL乙酰乙酸乙酯，空白管中加入0.40mL缓冲液，充分混匀。其他操作同标准管。2.3.4计算X=mk/v式中：X：尿中δ-ALA的校正浓度，mg/L；m：由标准曲线查出的δ-ALA的含量，g；k：尿样换算成标准比重下的浓度校正系数；v：分析时所取尿样的体积，mL。3.统计方法采用excel软件录入建立数据库，应用SPSS11.0统计软件包对数据进行方差分析和秩和检验。三、结果1.儿童血铅水平本研究对开化、淳安和桐乡地区的儿童血铅水平进行了检测。由于血铅水平呈偏态分布，因此在本研究中采用几何分布进行统计和分析。结果见表4。开化144例，血铅水平为3.7~504.55μg/L，几何均值为53.555±2.29μg/L；淳安117例，血铅水平为15.3~558.4μg/L，几何均值为78.217±2.95μg/L；桐乡131例，血铅水平为35.97~295.15μg/L，几何均值为146.994±1.55μg/L。淳安和桐乡儿童血铅水平显著高于开化（q检验，P＜0.01），桐乡儿童的血铅水平最高。表4不同地区儿童血铅水平采样点名称n血铅的几何平均值(μg/L)对应log10值（μg/L）开化K14453.555±2.291.729±0.36淳安A11778.217±2.951.893±0.47**桐乡T131146.994±1.552.167±0.19**F值53.738P值0.000注：以开化为对照组，与淳安比，**P＜0.01；与桐乡比**P＜0.012.儿童血样标本提取的基因组DNA扩增和酶切的电泳结果ALAD基因扩增和酶切结果是依据电泳后DNA片段大小进行判断。如图1（左）,当出现318bp条带时，即可判断目的片段被扩增出来，再对其进行酶切。如图1（右），当结果出现第1-5泳道所示时即为ALAD1-1基因型，出现第6泳道所示即为ALAD1-2基因型。图1扩增ALAD片段（左）与MspI酶切结果（右）电泳图M：100bpladdermarker注：3501、03、05、07、09、11为样品泳道，blank为对照组泳道。318bp318bp232bp3.儿童基因型分布各监测点学龄儿童ALAD基因的多态性检测结果显示（见表5），500名儿童中ALAD1-1基因型有476例（95.2%），ALAD1-2基因型24例（4.8%）。其中淳安7例，兰溪和开化各3例，桐乡9例，路桥2例，未发现ALAD2-2基因型。各个地区ALAD基因型分布构成比例未见显著性差异（卡方分析，P>0.05）。表5各监测点位学龄儿童ALAD基因的多态性检测结果监测点nALAD1-1ALAD1-2ALAD2-2开化1009730淳安1009370兰溪1009730路桥1009820桐乡1009190合计500476244.基因多态性对儿童血铅水平的影响4.1不同基因型的儿童血铅水平比较为了解血铅水平与基因型的关系，本研究对开化、淳安、桐乡三地区儿童的样本检测结果进行了分析（见表6）。三地共279例标本，其中ALAD1-2基因型19例，ALAD1-1基因型260例，ALAD1-2基因型血铅平均水平略高于ALAD1-1基因型，但两者比较，统计学差异无显著性（方差分析，P>0.05）。表6不同基因型的儿童血铅水平基因型n血铅几何平均值（μg/L）对应log10值（μg/L）ALAD1-1ALAD1-22601988.838±2.511.948±0.4094.929±2.511.977±0.40F值0.090P值0.7644.2同一地区基因多态性与血铅水平关系为了解同一地区血铅水平与基因型的关系，本研究对开化、淳安、桐乡三地区儿童的样本检测结果进行了分析（见表7）。开化ALAD1-1基因型儿童血铅水平（几何均数），与ALAD1-2基因型的血铅水平无显著性差异。淳安和桐乡的不同基因型间儿童血铅水平差异也无显著性（P＞0.05）表7同一地区不同基因型的儿童血铅水平采样点名N1N2ALAD1-1（μg/L）ALAD1-2（μg/L）F值p值开化K97357.770±2.40（1.762±0.38）26.503±4.37（1.423±0.06）0.0000.992淳安A93784.664±3.02（1.928±0.48）84.275±3.02（1.926±0.48）2.3660.128桐乡T919147.333±1.48（2.168±0.17）159.294±1.35（2.20±0.13）0.3320.566注：N1为ALAD1-1基因型的例数，N2为ALAD1-2基因型的例数，表格括号内为对应的log10值。5.尿δ-ALA检测的效应指标晨尿δ-氨基-γ-酮戊酸(ALA)检测结果（见表8）显示，路桥地区学龄儿童尿δ-ALA（μg/mL）水平显著高于开化（q检验，P＜0.05），而桐乡学龄儿童尿δ-ALA（μg/mL）显著低于开化（q检验，P＜0.05），其它地区学龄儿童尿δ-ALA（μg/mL）与开化比较差异均无显著性（q检验，P＞0.05）。表8各监测点位学龄儿童晨尿δ-ALA检测结果采样点名称n尿δ-ALA（μg/mL）开化K1002.872±1.519淳安A1003.194±1.291兰溪C1002.984±1.218路桥Z1003.635±1.380*桐乡T1002.628±1.100*F值8.415P0.000注：“*”，表示P<0.05四、讨论铅是具有多脏器毒性的重金属元素，它在人体的理想水平为零，对儿童的主要损害是影响大脑发育[6]。儿童期的神经系统正处于快速生长和成熟时期，对铅的毒性尤其敏感。长期暴露在铅环境中对智能发育产生的损害将不可逆转翻。因此准确检测儿童体内血铅含量。正确指导铅中毒儿童驱铅，对儿童的生长发育具有重要的意义。血铅是反映近期铅接触的敏感指标，且其水平与铅中毒的程度密切相关。研究发现淳安和桐乡儿童血铅水平显著高于开化，其中桐乡儿童的血铅水平最高。国际儿童血铅中毒分级标准为：Ⅰ级，血铅＜100ug/L，相对安全；Ⅱ级，血铅100ug/L-199ug/L，血红素代谢受影响，神经传导速度下降；Ⅲ级，血铅200ug/L-499ug/L，铁锌钙代谢受影响，出现缺钙、缺锌、血红蛋白合成障碍，可有免疫力低下、学习困难、注意力不集中、智商水平下降或体格生长迟缓等症状；Ⅳ级，血铅500ug/L-699ug/L，可出现性格多变、易激怒、多动症、攻击性行为、运动失调、视力和听力下降、不明原因腹痛、贫血和心律失常等中毒症状；Ⅴ级，血铅≥700ug/L，可导致肾功能损害、铅性脑病（头痛、惊厥、昏迷等）甚至死亡。本研究对象中，开化和淳安血铅水平处于Ⅰ级，相对安全，而桐乡的血铅水平已经到达Ⅱ级范围，在此暴露水平下可影响神经传导速度和认知能力，使儿童易出现头晕、烦躁、注意力涣散、多动，这需我们引起重视。研究发现ALAD1-2型个体在铅暴露时更容易发生高血铅，是铅毒性的易感和高危人群[7,8]。本研究结果发现ALAD1-2基因型血铅水平与ALAD1-1基因型血铅水平无显著性差异。但有趣的是，对照地区的ALAD1-2基因型血铅水平反而降低。与之前报道的ALAD1-2基因型血铅水平不符[3]。可能与本研究的样本量较少，检测到的ALAD1-2基因型数量较少有关。另外，开化地处山区，绿化覆盖面较大，工农业污染较少，空气质量较好，因而铅暴露水平本底值较低，ALAD1-2基因型血铅水平低也可能是一种自然的现象。人体内的铅全部来自外界环境，外界环境包括大气污染、家居环境中的铅均会引起儿童铅中毒，并主要由消化道和呼吸道进入儿童体内[9]。对不同监测点ALAD1-2基因型血铅水平进行数据统计分析发现，桐乡和淳安地区的儿童血铅水平显著高于开化地区。分析原因之一可能是所处环境的差异。经过对淳安，开化，桐乡三个地区的工业情况调查发现，桐乡以皮革业为主，产生大量的废水，重金属污染比较严重；开化所处地理较偏僻，绿化较多，工业污染很少，反映的是一种比较原始的状态；淳安地区的工业主要为造酒业，近年来旅游经济发展迅速，由此带来一系列副反应令人担忧，比如水源水污染、汽车尾气污染等。因此本研究铅暴露水平的结果与各个地区实际污染情况是比较吻合的。Wetmur等研究发现，ALAD基因第4外显子的第177碱基发生G-C突变，这个突变改变了ALAD酶构象，增加了AIAD2亚单位与铅的亲和力，使AIAD2亚单位与铅的结合更为紧密，从而导致携有AIAD2亚单位的个体(ALAD22型和ALAD12型)在受到铅暴露时更容易发生高血铅和铅中毒[10]。本研究采用PCR-RFLP技术对ALAD基因型进行检测，理论上可得到三种基因型：ALAD1-1基因型、ALAD1-2基因型、ALAD2-2基因型。结果中只检测到ALAD1-1和ALAD1-2两种基因型，未发现ALAD2-2基因型，这与已有的国内报道相似[11]。根据Hardy-Weinberg平衡（p+q）²=p²+2pq+q²=1推算出2种基因型的理论分布频率为：等位基因ALAD-1和ALAD-2的频率分别为97.6%和2.4%，这与先前报道的上海职业接触工人的基因型分布频率（等位基因ALAD-1和ALAD-2的频率分别为97.05%和2.95%）相似[12]。ALAD基因型分布各地区之间无显著性差异。提示浙江省儿童对铅毒性的易感程度可能是相似的。在铅中毒机制中，铅会抑制ALAD和血红素合成酶的活性。ALAD受抑制后，δ-氨基-γ-酮戊酸（ALA）形成胆色素原的过程受阻，使血中ALA增加，并由尿排出。另外由于ALA合成过程，主要是ALA合成酶受血红素的反馈调节，即铅对血红素合成酶的抑制会间接促进ALA合成酶活性升高，导致ALA增加[13]。本研究结果显示，路桥学龄儿童尿δ-ALA显著高于开化，间接反映了该地可能存在铅污染。从目前对路桥地区的了解，该地废旧电器拆卸业发达，并且零星分布有电池制造企业，因此重金属污染不可避免。桐乡学龄儿童尿δ-ALA显著低于开化，但血铅水平相对较高。这一结果与目前对铅毒性机制的解释不相符，是不是铅能直接抑制ALA合成酶，造成尿δ-ALA降低，或者可能采样地存在其它的污染源，拮抗铅的毒性作用，因此有待进一步研究或证实。开化和淳安学龄儿童的血铅和尿δ-ALA水平与铅毒性机制相符。本研究采用的整群抽样法，抽取浙江省具有代表性地区的儿童血样和尿样，进行血铅水平、铅易感情况及相关效应指标的检测，从一定程度上反映了浙江省学龄儿童铅污染的基本情况。本研究还显示桐乡和淳安地区的儿童血铅水平显著高于开化地区，表明随着浙江省经济的发展可能带来一定的副作用，如儿童铅中毒等一系列与环境污染有关健康相关问题需要引起关注。因此，浙江省作为我国经济相对发达的沿海省份，铅污染对儿童健康的影响问题更值得关注。参考文献[1]王倩，王洁．2141名学龄前儿童血铅水平调查研究．中国妇幼保健，2009，24(10)：1389-1392．[2]王慧文，钱慧霞.衢州市1875名儿童血铅水平分析.上海预防医学杂志，2010，22（8）：411-412．[3]王永伟,杨跃林,等.ALAD基因多态性与铅毒性遗传易感性关系的研究.四川大学学报，2008,39（3）：511-513．[4]吴胜虎．颤祟帷,等．ALAD基因型与儿童铅毒性易感性研究．国外医学儿科学分册，1999，26(2)：85-87．[5]张文众，冷曙光,等.基质γ-羧基谷氨酸蛋白和氨基乙酰丙酸脱水酶基因多态性与儿童血铅的关系.环境与职业医学,2006，23（2）：112-114．[6]于风岭，伊长英，王素兰,等．2624例儿童血铅的检测与分析．中国妇幼保健，2004，19(11)：117-117．[7]WetmurJG,LehnerG,DesnickRJ.Theδ-aminolevulinatedehydratasepolymorphism:higherbloodleadlevelsinleadworkersandenvironmentallyexposedchildrenwiththe1-2and2-2isozymes.EnvironRes,1991,56:l09-ll9.[8]WetmurJG.Influenceofthecommonhumanα-amunolevulratedehydratasepolymorphismonleadbodyburden.EnmronhealthPellet,1994,102:215-219.[9]刘晓瀛.漫谈儿童血铅中毒.中国医疗前沿,20l0，18（5）：17-18．[10]WetmurJG,KayaAH,PlewinskaM,eta1.Molecularcharacterizationofthehumanδ-aminolevulinateaciddehydratase2(ALAD2)alleleimplicationsformolecularscreeningofindividualsforgeneticsusceptibilitytoleadpoisoning.AmJGenet,199l,49:757-763.[11]陈涵一，刘莉，等.基于不同人群的铅暴露标志及相关易感基因.卫生研究杂志，2010，39（5）：643-646．[12]叶细标，吴翠娥,等.δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶和维生素D受体基因多态性与铅毒性易感关系的初步分析.中华劳动卫生职业病杂志，2002，20(5)：372-374．[13]张红辉，罗晓宁,等.37例铅中毒者尿δ-氨基乙酰丙酸的分析报告.中国城乡企业卫生,2009，133(5)：15-1．致谢感谢。。。。。。。本科毕业论文(设计)任务书学院专业生物技术姓名学号指导老师职称合作老师职称题目浙江省部分地区儿童铅污染状况的毒理学调查一、课题的内容和任务要求1.查阅相关资料、熟悉实验基本操作 了解目前我国铅水平及对人体和环境的影响，结合查阅到的资料撰写相关综述性文章一篇。掌握ALAD基因的多态性检测方法的常用指标和基本原理。2.掌握人体铅暴露检测的毒理学方法掌握血样中ALAD基因提取方法，并掌握PCR技术；酶切技术及电泳技术的检测方法操作步骤。3.实验资料及数据整理、统计及论文撰写采用SPSS11.0软件进行实验资料的统计，完成综述、英文翻译及浙江省部分地区儿童铅污染状况毒理学调查论文各一篇。二、进度安排（起止时间：2010年7月～2011年3月）2010.7-2010.8文献查阅，翻译英文综述，了解实验背景，方法，目的。2010.8-2010.9熟悉实验仪器如PCR仪，电泳槽等，初步尝试实验操作，熟悉实验流程。2010.9-2010.11正式进行实验操作，重复，对样本DNA进行扩增、酶切及电泳最后判断其基因型；对个地区的血铅水平及尿δ-ALA进行测定。2010.12-2010.1数据的处理、统计和分析。2010.2-2010.3论文撰写。三、主要参考资料[1]吴胜虎，沈晓明，颜崇淮，等．应用氨基-δ-酮戊酸脱氢酶基因型筛查儿童铅毒性易感人群的研究．中华儿科杂志，2000,38(7)：435-438．[2]WetmurJG,LehnerG,DesnickRJ.Theδ-aminolevulinatedehydratasepolymorphism:higherbloodleadlevelsinleadworkersandenvironmentallyexposedchildrenwiththe1-2and2-2isozymes.EnvironRes,1991,56:l09-ll9.[3]WetmurJG.Influenceofthecommonhumanα-amunolevulratedehydratasepolymorphismonleadbodyburden.EnmronhealthPellet,1994,102:215-219.[4]王永伟,杨跃林,等.ALAD基因多态性与铅毒性遗传易感性关系的研究.四川大学学报，2008,39（3）：511-513.[5]吴胜虎．颤祟帷,等．ALAD基因型与儿童铅毒性易感性研究．国外医学儿科学分册，1999，26(2)：85-87.[6]张文众，冷曙光,等.基质γ-羧基谷氨酸蛋白和氨基乙酰丙酸脱水酶基因多态性与儿童血铅的关系.环境与职业医学,2006，23（2）：112-114.[7]叶细标，吴翠娥,等.δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶和维生素D受体基因多态性与铅毒性易感关系的初步分析.中华劳动卫生职业病杂志，2002,20(5)：372-374.[8]张红辉，罗晓宁,等.37例铅中毒者尿δ-氨基乙酰丙酸的分析报告.中国城乡企业卫生,2009,133(5):15-16.签名栏：学生：指导老师：学院领导：注意：1．任务书由指导老师填写、院领导审核，学生、指导老师、院领导均应签字。2．此任务书要求在毕业论文（设计）工作开始前下达。学院专业生物技术姓名学号指导老师职称合作老师职称题目浙江省部分地区儿童铅污染状况的毒理学调查题目性质实验研究技术开发工程设计应用型调查型其他一、选题依据和目标目的、意义:从毒理学角度对浙江省部分地区儿童ALAD基因多态性、血铅暴露水平和效应生物标志物尿δ-ALA进行分析，对这些地区儿童的铅暴露与基因易感性以及毒性效应的相关性进行初步的探讨。根据研究结果，对相应的地区做好相关预防措施和教育宣传。研究现状及发展趋势：随着全球工业化和城市化进程的加快，现代工业和交通的迅猛发展，环境铅污染逐渐成为突出的问题，已是影响儿童生长发育的重要因素。国内铅中毒的研究始于60年代，当时研究的重点是从职业卫生和职业病的角度出发，对该病的病因病理、临床诊断和治疗进行探讨。于60年代初始，国内儿童铅中毒报道的病例均系症状性铅中毒，主要是由于女工的职业性铅暴露所致的子代机体铅负荷升高，即母源性先天性铅中毒。而亚临床水平的儿童铅中毒的研究则在80年代后才开始，当时的研究表明，不足以产生临床症状的低水平铅暴露即能引起儿童智力发育的损害，这比国外的类似研究大约落后10年。此后各地不断有小规模的研究报道，证明根据国际上沿用的诊断标准，我国儿童铅中毒的现状远较我们想象的严重，即使在我们认为完全正常的人群中，也有相当惊人数目的儿童处于对发育有潜在危害的铅暴露下。铅污染越来越受世界各国的关注，越来越多的国家也针对环境污染状况，逐步制定了相关的政策和措施，积极开展健康教育，进一步完善儿童铅中毒的初级预防措施，让儿童远离铅中毒。二、课题关键问题及难点1.采样点的选取查阅文献资料，选取引起铅中毒具有代表性的地区作为调查对象。2.样品保存血液是很容易凝固及DNA易变性，对于抽取的儿童外周血要及时于-40℃保存，对于提取的DNA要及时保存在-803.实验条件DNA提取是采用试剂盒进行的，提取过程注意最后离心转数的变动。在进行正式实验前，必须进行预实验，摸清扩增ALAD酶指标测定实验中的最佳条件。4.结果分析采用合适的统计学方法对数据进行分析。客观对待实验结果，在合理的范围内分析、推测结果产生的原因。三、完成该课题研究已具备的条件本次研究内容为2010年浙江省卫生厅科研立项项目《浙江省重点地区重点污染物毒理学调查研究》内容，在本项目立项前，本实验室已开始从事这一调查工作，因此已有较好的工作基础，我们目前拥有拥有紫外分光光度计、PCR仪等仪器设备，完全能满足本次研究的需要。本次研究的经费主要由浙江省卫生厅科研立项项目提供。四、研究方案1.拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线本研究采用毒理学研究学进行调查。主要路线：DNA提取是采用生物工程研究所提供的试剂盒进行提取。设置相应的引物，对DNA进行扩展，酶切，根据ALAD基因多态性原理：ALAD基因第4外显子的第177碱基发生G-C突变，这个突变改变了ALAD酶构象，使其增加了AIAD2亚单位个体(ALAD22型和ALAD12型)，对电泳结果进行判断基因型；采用石墨炉院子吸收光谱法（GFAAS）对样本血铅水平进行测定；采用比色法对尿δ-ALA水平进行测定；最后采用excel软件录入建立数据库，应用SPSS11.0统计软件包对数据进行协方差分析和秩和检验，对三者进行比较。2.研究进度安排2010.7-2010.8文献查阅，翻译英文综述，了解实验背景，方法，目的。2010.8-2010.9熟悉实验仪器如PCR仪，电泳槽等，初步尝试实验操作，熟悉实验流程。2010.9-2010.11正式进行实验操作，重复，对样本DNA进行扩增、酶切及电泳最后判断其基因型；对个地区的血铅水平及尿δ-ALA进行测定。2010.12-2010.1数据的处理、统计和分析。2010.2-2010.3论文撰写。五、参考文献[1]吴胜虎，沈晓明，颜崇淮，等．应用氨基-δ-酮戊酸脱氢酶基因型筛查儿童铅毒性易感人群的研究．中华儿科杂志，2000,38(7)：435-438．[2]WetmurJG,LehnerG,DesnickRJ.Theδ-aminolevulinatedehydratasepolymorphism:higherbloodleadlevelsinleadworkersandenvironmentallyexposedchildrenwiththe1-2and2-2isozymes.EnvironRes,1991,56:l09-ll9.[3]WetmurJG,Influenceofthecommonhumanα-amunolevulratedehydratasepolymorphismonleadbodyburden.EnmronhealthPellet,1994,102:215-219.[4]王永伟,杨跃林,等.ALAD基因多态性与铅毒性遗传易感性关系的研究.四川大学学报，2008,39（3）：511-513.[5]吴胜虎．颤祟帷,等．ALAD基因型与儿童铅毒性易感性研究．国外医学儿科学分册，1999，26(2)：85-87.[6]张文众，冷曙光,等.基质γ-羧基谷氨酸蛋白和氨基乙酰丙酸脱水酶基因多态性与儿童血铅的关系.环境与职业医学,2006，23（2）：112-114.[7]叶细标，吴翠娥,等.δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶和维生素D受体基因多态性与铅毒性易感关系的初步分析.中华劳动卫生职业病杂志，2002,20(5)：372-374.[8]张红辉，罗晓宁,等.37例铅中毒者尿δ-氨基乙酰丙酸的分析报告.中国城乡企业卫生,2009,133(5):15-16.六、指导老师意见签名： 年月日七、学院意见学院负责人签名：年月日附：开题报告会情况记录参加开题报告会的主要人员姓名职称姓名职称开题报告提出的主要问题及回答情况：1.样品分析存在的问题和建议1.由于样品的采集在基层，所以获得样品后不能及时送达中心大大制约了对标本的利用率，包括细胞的分离和DNA的提取非常困难。2.项目仅限于为毒理学指标检测，指标之间的变化原因较难解释，需要结合人体内相关的污染物暴露情况进行分析，意义可能更大。3.本项目检测出一定人数的铅暴露易感人群，但是数量相对较少，对数据的进一步分析有一定的影响，建议扩大样本量。2.DNA提取注意事项在提取DNA时注意做好无菌措施，以防感染。在提取过程中水浴时间的控制及在水浴时要对样品进行震荡混匀。加不同试剂后离心转数有所改变，注意及时调整离心转数。提取的DNA要及时将其放入-80℃3.ALAD多态性的原理ALAD扩增上游引物5’-AGACAGACATTAGCTCAGTA-3’下游引物5’-GGCAAAGACCACGTCCATTC-3’，ALAD基因第4外显子的第177碱基发生G-C突变，这个突变改变了ALAD酶构象，增加了ALAD2亚单位与铅的亲和力，使ALAD2亚单位与铅的结合更为紧密，从而导致携有ALAD2亚单位的个体(ALAD1型和ALAD2型)记录人：年月日本科毕业论文(设计)文献综述学院专业姓名学号指导老师职称合作老师职称题目儿童铅中毒的研究文献综述儿童铅中毒的研究摘要：本文对国内外儿童铅中毒研究现状、铅中毒的根源、铅中毒对儿童的智能、行为发育、体格生长发育以及对机体的神经、消化、血液、心脑血管、泌尿等多系统造成不可逆性的损害。关键词：儿童铅中毒，根源，机体不可逆的损害。引言随着我国城市化，工业及交通业的迅猛发展，环境铅污染也日益加剧。铅对儿童的健康危害已经成为社会关注的焦点。由于儿童的特殊生理和行为特征，铅对儿童的危害是最直接，也最严重的。国内外大量研究证实，铅对儿童的生长发育、心理、智力及行为损伤是不可逆的，这种损害将是长期甚至是终生的。因此，全球对儿童铅中毒问题的研究极为重视。1.国内外儿童铅中毒情况1.1我国儿童铅中毒情况根据WHO人类环境处的Pruess博士估计，全球5岁以下的城市儿童约有半数血铅（BPb）≥100μg/L，绝大部分铅中毒病例发生于发展中国家[1]。我国目前还是发展中国家，随着城市化、工业化的发展，工业铅铅污染的排放造成的土壤，大气及水资源的铅含量增加，这已成为我国儿童铅中毒的主要来源。对儿童铅中毒流行病调查，结果显示：我国城市铅中毒流行率在30%~40%之间，部分城市工业污染区接近100%。在没有明显工业污染的普通市区，也有10%~30%的儿童铅超标[2]。其中广州市和北京市[3]0~6岁的儿童平均血铅值分别为89.23μg/L和98.8μg/L，血铅超标率分别达46.7%和35.7%。国家九\o"医学百科：五科"五科技攻关项目[4]对9省19个城市3~5岁幼儿血铅水平调查显示，其中有29.91%的幼儿血铅值超标，平均血铅值达到88.3μg/L。明显高于美国等发达国家。1.2国外儿童铅中毒状况美国是全球经济最发达的国家之一，儿童铅中毒现象也颇为显著。据估计，美国每年儿童铅中毒在20万人以上，美国卫生教育和福利部统计则估计达40万。如果以大于40μg/dL作为儿童过量铅吸收的拟定标准，则在欧美一些主要工业国家的城市儿童中，铅中毒的约占30%。根据俄罗斯官方数据显示，专业陪酒人员中的铅中毒从1991年的9.4%上升到1995年的11.6%。因为使用含铅器具盛装食物、饮料等。1997年在Bykov和Revich城市里，超过40%的儿童由于铅中毒将会出现行为问题、学习困难等[5]。Jessica等对美国纽约221名铅中毒的儿童家庭中油漆、涂料进行调查，在发现血铅高以后家中对此做了弥补的，儿童血铅含量有明显降低；同时相关结果显示黑人儿童的血铅含量明显偏高，儿童比成年人更容易受到铅中毒等[6]。根据国内外报道的数据可以看出，儿童铅中毒已经成为世界关注的大问题，直接关系着儿童的发育以及智商水平。2.铅污染来源2.1内源性2.1.1母源性近年来母源性铅污染的研究也引起一些学者的关注，多项研究结果提示，高血铅水平的孕妇可通过胎盘将铅\o"医学百科：转移"转移给\o"医学百科：胎儿"胎儿。郭艳芳[7]等学者岁孕妇及新生儿脐血铅水平进行研究，结果显示，新生儿脐血铅水平与母亲血铅、母亲孕期居住环境等因素呈显著性\o"医学百科：相关"相关，孕妇血铅含量的高低直接影响胎儿、\o"医学百科：婴儿"婴儿的血铅含量。母源性铅污染也是儿童铅中毒的重要因素之一。2.1.2骨源性也称内源性铅暴露，即沉积于骨骼（储存池）中的铅\o"医学百科：溶解"溶解进入\o"医学百科：血液"血液。成人摄入体内的铅90%以上蓄积于骨骼中，儿童仅占66.7%左右，且儿童储存池中的铅流动性较大，易引起内源性铅暴露。2.2外源性2.2.1环境铅污染环境铅污染是引起儿童铅中毒的主要原因。主要包括含铅工业，如蓄电池制造业、印刷业、\o"医学百科：金属"金属冶炼业、建筑材料制造业等。其次，由于我国还是发展中国家，无铅汽油的推广仍受限制，再我国现在汽车量的增加，使大气的铅含量也显著增加。1999年、2000年上海市连续2年对不同交通污染区的学龄儿童进行血铅水平及\o"医学百科：智商"智商测定，初步评价了汽油无铅化对学龄儿童的血铅及智商影响，证明汽油无铅化可有效降低儿童的\o"医学百科：大气"大气铅接触及学龄儿童血铅浓度[8]李其林[9]等通过对公路边污染区（离公路50m以内）和对照区（离公路100m以外）\o"医学百科：土壤"土壤和蔬菜铅含量的研究发现，在公路边50m以内汽车尾气明显增加了土壤和蔬菜的铅含量。2.2.2学\o"医学百科：习用品"习用品和玩具色彩艳丽的学习用品和玩具表面一般涂有鲜艳的油漆，铬酸铅是黄色和绿色油漆中常用的颜料，国产玩具和学习用品铅含量普遍较高，幼儿常有吸吮手指和咬啃玩具的\o"医学百科：习惯"习惯，加上有些儿童不注重洗手，通过手摸口啃直接摄入铅。2.2.3食品的污染及不良的饮食习惯广泛的环境污染使日常食品中常含有微量的铅，另外不良的生活习惯也能增加铅的摄入量，如常食含铅高的食品（传统制作的\o"医学百科：松花"松花蛋、爆米花等）3对健康的影响[10]3.1对造血系统的影响铅中毒可导致贫血，其发生机制与血红蛋白合成障碍及溶血有关[11]影响血红蛋白的合成：卟啉代谢障碍是铅中毒机制中重要和较早的变化之一。卟啉是血红蛋白合成过程的中问物，血红蛋白合成过程中，受到一系列巯基酶的作用。现已证实，铅至少对δ-氨基乙酰丙酸脱水酶(δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶，ALAD)、粪卟啉原氧化酶和亚铁络合酶有抑制作用。ALAD是一种金属酶，由8个相同的亚单位和8个锌离子组成，锌离子对酶的活性和稳定性起着重要的作用。铅能置换活动位点的锌离子，抑制ALAD的活性[12]，从而使δ-氨基乙酰丙酸(ALA)形成卟啉原受到抑制，结果血中ALA增多，由尿排出的ALA也增多；铅抑制粪卟啉原氧化酶，阻碍粪卟啉原Ⅲ，氧化为原卟啉Ⅸ，结果使血中粪卟啉增多，尿排出粪卟啉也增多；铅抑制亚铁络台酶，使原卟啉Ⅸ不能与二价铁结合为血红素，红细胞中原卟啉增多，可与红细胞线粒体内丰富的锌结合，导致锌原卟啉增加。所以尿中ALA、粪卟啉和血中原卟啉或锌原卟啉测定都是铅中毒的诊断指标。由于血红蛋白合成障碍，导致骨髓内幼红细胞代偿性增生，血液中点彩、阿织、碱粒红细胞增多。此三种红细胞中的嗜碱性物质都含有线粒体和微粒体碎片及RNA，有人认为此三种细胞是由染色技术所造成的不同形态表现而巳，其原因可能是铅抑制了红细胞嘧啶-5-核苷酸酶，以致大量嘧啶核苷酸蓄积在细胞浆内，并妨碍微粒体RNA的降懈。溶血：铅中毒贫血不仅是由于血红蛋白合成减少，也由于红细胞寿命缩短。铅可抑制红细胞膜Na一K’ATP酶的活性，使红细胞内K’离子逸出,致细胞膜崩溃而溶血。另外，铅与红细胞表面的磷酸盐结合成不溶性的磷酸铅,使红细胞机械脆性增加,也是溶血的原因。急性铅中毒时溶血作用较明显，慢性铅中毒时以影响卟啉代谢为主，溶血作用并不重要。3.2对\o"医学百科：神经"神经系统的影响铅对儿童神经\o"医学百科：行为"行为的影响始于胎儿时期的铅接触。铅很容易通过胎盘，且发育中的\o"医学百科：内皮"内皮细胞不\o"医学百科：成熟"成熟，所以铅很容易通过\o"医学百科：血脑屏障"血脑屏障，因而铅对发育中的\o"医学百科：中枢神经系统"中枢神经系统的损害尤其明显。铅抑制\o"医学百科：神经元"神经元的增殖和分化，并蓄积于内皮细胞，直接破坏血\o"医学百科：脑屏障"脑屏障。铅可选择性地\o"医学百科：积聚"积聚在\o"医学百科：中枢"中枢具有学习和记忆功能的\o"医学百科：海马"海马区内，降低突触\o"医学百科：兴奋性"兴奋性持续升高幅值，影响学习，记忆和认知功能。铅对新生儿行为能力、神经软体征和肌张力评分与脐血铅含量呈负相关关系。除此之外，铅对儿童智商（IQ）的影响也很大，儿童IQ值随血铅含量升高而下降3.3对血液系统的影响铅对血液系统的主要作用表现在2个方面，一是抑制血红蛋白的合成，二是缩短循环中的红细胞寿命。正常情况下，原卟啉Ⅸ在铁络合酶作用下与铁形成血红素。铅负荷过高时，由于铅抑制卟啉代谢中的铁络合酶，使原卟啉不能与铁结合形成血红素。早铁缺乏时，因没有足够的铁与原卟啉Ⅸ结合而影响血红素的合成．二者在引起贫血的同时都可造成原卟啉在体内的堆积，此时红细胞内含量丰富的锌离子与堆积的原卟啉结合，导致红细胞内锌原卟啉含量升高[13]。因此，测定儿童血中锌原卟啉含量对诊断铅负荷过高具有重要意义。3.4对其它\o"医学百科：器官系统"器官系统的影响铅对\o"医学百科：心血"心血管、\o"医学百科：肝脏"肝脏，\o"医学百科：肾脏"肾脏，骨骼等器官也有一定毒性作用。长期铅接触可导致\o"医学百科：血压"血压升高、\o"医学百科：心肌炎"心肌炎和\o"医学百科：心肌"心肌损害。铅对胃粘膜有直接作用，可以破坏胃粘膜再生能力，使胃粘膜出现\o"医学百科：炎症"炎症性变化。并抑制肠壁\o"医学百科：碱性磷酸酶"碱性磷酸酶和\o"医学百科：ATP"ATP酶的活性，使\o"医学百科：平滑肌"平滑肌痉挛，引起腹疼。对肾脏损害主要是影响\o"医学百科：肾小管"肾小管上皮细胞\o"医学百科：线粒体"线粒体的功能，抑制\o"医学百科：Na"Na+-K+ATP酶等的活性，引起肾小管功能障碍甚至损伤。4铅污染的机制研究4.1氧化损伤方面的铅毒机制[14]4.1.1诱导活性氧产生铅通过干扰\o"医学百科：卟啉"卟啉类物质的代谢，影响血红素的合成而诱导活性氧的产生;微量的铅既可抑制含巯基δ-\o"医学百科：氨基"氨基-γ-酮\o"医学百科：戊酸"戊酸\o"医学百科：脱水"脱水酶和血红素合成酶，从而影响血红素的合成。由于负\o"医学百科：反馈"反馈作用，血红素的合成受阻会刺激δ-氨基γ-酮戊酸脱水\o"医学百科：酶活性"酶活性，增加δ-氨基\o"医学百科：丙酸"丙酸的合成，造成δ氨基丙酸在血液和尿中积累。δ-氨基丙酸可发生烯醇化，形成烯醇式δ-氨基丙酸，后者能和氧合\o"医学百科：血红蛋白"血红蛋白偶联产生超\o"医学百科：氧自由基"氧自由基、过氧化氢和羟自由基。烯醇式δ-氨基丙酸自由基还会进一步破坏DNA。另外，血红素代谢受阻可以造成血液中锌原卟啉的增加，该物质即可导致其他分子的损伤，更能通过光敏\o"医学百科：反应"反应把分子氧激发为超氧阴离子自由基，直接诱发脂质过氧化，产生更多自由基。4.1.2影响\o"医学百科：细胞膜"细胞膜的保护作用除了直接诱导活性氧产生外，促氧物质也能依靠增加细胞膜的敏感性来间接诱导活性氧产生。研究发现，铅处理后，\o"医学百科：红细胞"红细胞膜变脆，\o"医学百科：透性"透性增加，结合于膜上的酶和\o"医学百科：蛋白质组"蛋白质组成发生改变，膜脂质的过氧化水平增加。铅除促进膜脂过氧化外，还影响膜脂质的组成，研究发现铅对磷酯\o"医学百科：酰胆碱"酰胆碱具有强烈的束缚作用，铅中毒后的红细胞膜磷酯酰\o"医学百科：胆碱"胆碱水平大大下降:转变的膜脂质成分可导致细胞膜完整性、渗透能力的变化从而增加细胞对脂质过氧化的敏感性。4.1.3影响细胞抗氧化系统正常功能铅能显著提高血红蛋白的自动氧化，而\o"医学百科：超氧化物歧化酶"超氧化物歧化酶和过氧化氢酶能抑制其自动氧化的过程，说明超氧阴离子自由基和H2O2可能参与血红蛋白的自动氧化过程，推测铅离子可能依靠与氧合血红蛋白的\o"医学百科：相互作用"相互作用而诱导活性氧产生，并最终导致红细胞膜的氧化损伤;大量研究表明，在接触铅的动物和工人身上发现，铅中毒会降低细胞中一些抗氧化酶的活性和细胞内抗\o"医学百科：氧化剂"氧化剂含量。对某些酶，铅主要通过与酶蛋白中的巯基（这些巯基有时就是其活性中心）结合而抑制酶活性，如谷胱甘肽还原酶和\o"医学百科：葡萄糖"葡萄糖-6-磷酸脱氢酶:铅对\o"医学百科：葡萄"葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（该酶含许多巯基）有极强的抑制作用，该酶催化葡萄糖-6-磷酸产生NADPH。后者为氧化型谷胱甘肽转化成还原型谷胱甘肽所必需，故它在细胞的抗氧化中起着重要作用。铅除了与酶中巯基结合降低酶活性外，还作为非竞争性抑制剂，影响酶与葡萄糖-6-磷酸和NADPH结合，而对另一些酶，则是通过影响酶中的\o"医学百科：微量元素"微量元素有效性发生作用的。硒是的必需成分，铁和铜，锌，锰分别是辅基，铅都影响它们的\o"医学百科：吸收"吸收。细胞中受铅影响最大的抗\o"医学百科：氧化物"氧化物是还原型谷胱甘肽。铅除通过抑制葡萄糖-6-磷酸脱氢酶阻止其\o"医学百科：再生"再生外，还可直接与其所含的\o"医学百科：半胱氨酸"半胱氨酸的巯基结合，干扰它发挥抗氧化活性。4.2生化过程代谢酶的影响机制铅对关键酶的影响在体外实验中，在二氯化铜存在的条件下，\o"医学百科：DNA"DNA聚合酶变得非常不准确，\o"医学百科：碱基"碱基对错配频率增加，不能正确\o"医学百科：复制"复制DNA。另外，铅对由RNA聚合酶催化的RNA合成也有影响。铅有\o"医学百科：抑制"抑制DNA聚合酶β亚基的\o"医学百科：作用"作用。\o"医学百科：重金属"重金属\o"医学百科：离子"离子，包括铅，能够影响很多酶，尤其是富含巯基（SH）的，它可以替代与些酶结合的重要\o"医学百科：元素"元素，如镁，钙，铁，铅和锌，如前所述，几种参与血红素合成的酶均能被铅抑制。另外，铅也能抑制\o"医学百科：兔肝"兔肝中黄嘌呤氧化酶和鸟嘌岭\o"医学百科：氨基水解酶"氨基水解酶的。铂与钙比较\o"医学百科：相似"相似，在某些条件下，铅能置换钙。体内实验表明，铅可与钙一起进入\o"医学百科：突触"突触体，铅能激活蛋白激酶C。铅也可抑制或激活不同的\o"医学百科：受体"受体激活和电压激活的离子通道。在HL-600细胞中，铅可\o"医学百科：刺激"刺激\o"医学百科：磷脂"磷脂酶AZ活性提高，从而增加\o"医学百科：溶血"溶血磷脂的活性。4.3细胞（染色体）分裂/周期影响机制4.3.1铅对\o"医学百科：染色体"染色体的影响在\o"医学百科：细胞"细胞分裂时期干扰纺锤体的形成，从而造成不正常染色体数量增加，染色体畸变和姐妹染色体交换\o"医学百科：频率"频率上升。4.3.2铅对\o"医学百科：基因表达"基因表达的影响\o"医学百科：谷胱甘肽"谷胱甘肽\o"医学百科：转移酶"转移酶（GST-P）在化学诱导肝癌\o"医学百科：发生"发生的老鼠的癌\o"医学百科：前期"前期损伤\o"医学百科：和肝"和肝癌中表达量特别高，四离子铅可以增加老\o"医学百科：鼠肝"鼠肝和肾中GST-P的表达量。在人体内，铁、铅等都是以离子状态存在，由于铅的活性远比铁的活性高。因此，当铅进入人体，就会把人体必需的铁离子置换出去，从而使人体表现为缺铁性贫血的症状。这也是随着人们生活水平的提高，反倒出现缺铁缺钙增多的原因，特别对铅中毒的儿童而言，如不采取驱铅治疗，就很难实现补铁补钙的目的。我们了解了铅中毒的危害，在思想才能引起重视，在工作中才能积极地采取措施，对铅中毒进行有效控制；铅负荷评价指标能使我们清楚铅中毒的程度，在治疗和预防中做到心中有数；明白了铅污染的途径，我们就可以在日常生活中关注某些细节，改变不科学的生活习惯，远离铅中毒的危害参考文献［1］GavaghanH.铅无安全水平.国外医学卫生学会分册,2002,29（3）:117-118.［2］傅松涛.儿童铅中毒防治.山西科技出版社，2007,12（3）：16-17.［3］陈欣欣，滕红红，王风芝，等.北京市0~6岁儿童血铅水平与相关影响因素的研究.中华流行病学杂志，2003，10（24）:868-871.［4］戚其平，杨艳伟，姚孝元，等.中国城市儿童血铅水平调查.中华流行病学杂志，2002，3（23）:162-166.[5]Snakin,Prisyazhnaya.LeadcontaminationoftheenvironmentinRussia.TheScienceofTheTotalEnvironment,2000,256（5）:95-101.[6]JessicaLeighton,SusanKlitzman,SlavenkaSedlar,etal.Theeffectoflead-basedpainthazardremediationonbloodleadlevealsofleadpoisonedchildreninNewYorkCity.EnvironmentalResearch,2003,92:182—190.［7］李明霞，李维城，郭艳芳等.维汉孕妇及新生儿脐血铅水平与环境因素的相关性研究.广东微量元素科学，2001，10（8）:19-24.［8］袁东，叶舜华，徐晓辉.无铅汽油使用后学龄儿童血铅、智商变化及经济效益初探.环境与职业医学，2004，21（2）:104-106.［9］李其林，王显军.汽车尾气对土壤和蔬菜中铅含量的影响.生态环境，2004，13（1）:7-18.［10］刘慧，李英娥，随挂英.儿童铅中毒的研究进展.济宁医学院学报，2003，26（1）：26-28.[11]何风生．中华职业医学．北京人民卫生出版社．1999,13（2）：215-226.[12]高万珍．氨基乙酰丙酸脱水酶与铅中毒的关系．国外医学卫生学分册，1997，24(6)：345-348.[13]沈晓明．铅与儿童生长发育．国外医学儿科分册，1991，25（5）：77-78.［14］郭碧花，张星海.抗氧化剂对铅毒的作用及机制探讨.中国工业医学杂志，2004，17（2）:100-104.学院专业生物技术姓名学号指导老师职称合作老师职称题目用生化和同位素地球化学方法了解伊比利亚lowerGuadiana河地区铅污染对环境和公众健康的影响：一种淡水双壳类研究。译文用生化和同位素地球化学方法了解伊比利亚lowerGuadiana河地区铅污染对环境和公众健康的影响：一种淡水双壳类研究。摘要：铅是一种水生生态系统中未知其生物作用的一种天然的成分，剧毒。它的毒性是因为它能模仿生物的重要金属，通过脂质过氧化物（LPO）产生摸损伤。大多数铅中毒的症状被认为是铅能干扰一种重要的酶-δ-氨基酮戊酸脱水酶（ALAD）的活性能被铅严重抑制。本文工作的目的是研究铅污染水平和铅污染对生活在lowerGuadiana河（葡萄牙和西班牙）中淡水双壳类动物Corbiculafluminea的影响（对ALAD和过氧化反应激生物标志物LPO的影响）中。LowerGuadiana河是一条主要的河流系统，历史上人因为开采矿石和人为因素的介入而受到影响。结果表明，ALAD酶的活性与组织中铅总浓度呈负相关，说明ALAD已成为Corbiculafluminea铅暴露的一个重要生物标志物。为了说明Corbiculafluminea铅暴露的来源，高精度的206Pb/204Pb，207Pb/204Pb，208Pb/204/Pb比例确认，历史上在伊比利亚黄铁矿带的开采活动，是lowerGuadiana河铅污染的主要来源。同位素结果也提供了针对降雨和河流水资源管理的明显的季节和地理差异。另外，在接近人口中心的Corbiculafluminea中检出的铅还来源于其它的软体动物，从而增加了Corbiculafluminea作为一个淡水生物监测体的多样性。总而言之，这项研究突出了自然生态系统用于水质监测的价值和它们对公共健康评估和监测的重要性。引言这项工作的主要目的是研究来自lowerGuadiana河，在伊比利亚南部最具有经济性和战略性的河流的各点位淡水双壳类Corbiculafluminea河中的铅污染水平和对其生物化学的影响。虽然近期Corbiculafluminea被引入伊比利亚半岛，但Corbiculafluminea已被广泛的用作淡水及河口生态系统中评价金属污染的生物指标（Araujoetal,1993）铅对Corbiculafluminea的生态毒理学效应取决于δ-氨基酮戊酸脱水酶