第2节-复制叉课件

第三章DNA的复制第2节复制叉第2节-复制叉2.复制叉2.1DNA双链的合成：

复制叉（replicationfork)：刚分开的模板链与未复制的双链DNA间的连接区。5′5′3′3′LeadingstrandPrimerOkazakifragmentDNApolymeraseDirectionofreplicationDirectionDirectionLaggingstrandP211第2节-复制叉2.复制叉2.2RNA引物：

①DNA聚合酶不能从头合成DNA②RNA聚合酶从头合成RNA③引物酶（primease)合成RNA。无DNA序列特异性。5-10nt第2节-复制叉2.复制叉2.3RNA引物的去除：①RNaseH:核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。②RNaseH：只能断裂2个核糖核苷酸之间的酯键。TemplateATPP212第2节-复制叉2.复制叉2.4DNA解旋酶：①DNA解旋酶的极性（polarity)：，每个DNA解旋酶在单链DNA上都沿着一定的方向运动。

5′→3′or3′→5′

与DNA解旋酶结合的DNA链决定方向

ATP提供能量DoubleP213第2节-复制叉P213第2节-复制叉2.复制叉2.4DNA解旋酶：②作用机制（如何移动DNA的）Papillomavirus：乳头瘤病毒，E1蛋白nucleotideDNATopATPMiddleADPBottomTopATP1.3nm发夹P215第2节-复制叉2.复制叉2.5DNA单链的稳定：

单链DNA结合蛋白（SSB,single-strandedbindingprotein）

协同结合（cooperativebinding）

结合DNA是非特异性静电和疏水作用

结合后DNA处于伸直状态第2节-复制叉2.复制叉2.6DNA超螺旋的去除：第2节-复制叉小结1.复制叉

Leadingstrand

Laggingstrand

Okazakistrand2.RNA引物

RNAprimase

RNaseH3.DNAhelicase4.SSB

Cooperativebinding5.DNAtopoisomerase第2节-复制叉作业什么是复制叉？RNase的特点是什么？什么是DNA解旋酶的极性？第2节-复制叉第3节DNA聚合酶的种类和复制叉DNA的合成第2节-复制叉3.1DNA聚合酶的种类3.1.1原核生物DNA聚合酶

亚基功能

PolI1RNA引物的去除，DNA修复

PolII1DNA修复

PolIII(核心)3DNA复制

PolIII(全酶)9DNA复制

PolIV1DNA修复，移损合成

PolV3移损合成P219第2节-复制叉3.1DNA聚合酶的种类3.1.2真核生物DNA聚合酶

亚基功能

Polα4合成引物

Polβ1DNA修复

Polγ3线粒体DNA复制与修复

Polδ2-3DNA复制与修复

Polε4DNA复制与修复

Polθ1DNA修复

Polζ1移损合成

Polλ1DNA修复P220第2节-复制叉3.1DNA聚合酶的种类3.1.2真核生物DNA聚合酶

亚基功能

Polμ1体细胞超变

Polκ1移损合成

Polη1移损合成

Polτ1移损合成，体细胞超变

Rev11移损合成

Polα4合成引物

Polδ2-3DNA复制与修复

Polε4DNA复制与修复第2节-复制叉3.1.2真核生物DNA聚合酶

Polα：2亚基DNA聚合酶α和2亚基引物酶

Polδ&Polε

：高延伸性的聚合酶

Polδ：LaggingstrandPolε：Leadingstrand

聚合酶切换：聚合酶δ或聚合酶ε取代聚合酶α/引物酶的过程聚合酶切换第2节-复制叉3.1DNA聚合酶的种类3.1.3滑动夹增强DNA聚合酶延伸能力proliferatingcellnuclearantigen(PCNA)P221-222第2节-复制叉3.1DNA聚合酶的种类3.1.3滑动夹增强DNA聚合酶延伸能力P223第2节-复制叉βsubunitsofE.coliPolyIIIholoenzymeT4phagegp45EukaryoticPCNA3.1DNA聚合酶的种类3.1.3滑动夹增强DNA聚合酶延伸能力

功能的保守

结构的保守P224第2节-复制叉3.1DNA聚合酶的种类3.1.4滑动夹装载器(slidingclamploader)

E.coli:γ复合体

Eukaryotic:复制因子C（RF-C）①结合ATP②结合并打开滑动夹③结合DNA

滑动夹套住DNA

水解ATP④滑动夹装载器脱离DNA5subunits滑动夹装载器的作用过程第2节-复制叉小结3.1.1原核生物DNA聚合酶3.1.2真核生物DNA聚合酶3.1.3滑动夹3.1.4滑动夹装载器(slidingclamploader)第2节-复制叉1.DNAhelicase2.SSB

Cooperativebinding3.DNAtopoisomerase4原核生物DNA聚合酶5真核生物DNA聚合酶6滑动夹7滑动夹装载器(slidingclamploader)第2节-复制叉3.2ThereplicationofDNAatfork--elongation3.2.1DNA聚合酶III全酶（PolyIIIholoenzyme）

全酶是核心酶和对其有增强功能的其他元件的多蛋白复合体的总称。

全酶构成核心DNA聚合酶III核心DNA聚合酶III滑动夹夹子装载器P227第2节-复制叉3.2ThereplicationofDNAatfork3.2.1DNA聚合酶III全酶（PolyIIIholoenzyme）

全酶构成

1.核心DNA聚合酶III22.γ复合体1

2.1τ-蛋白2第2节-复制叉3.3复制体3.3.