动物细胞融合单克隆抗体

关于动物细胞融合单克隆抗体abcde植物细胞杂交技术第2页,共39页，2024年2月25日，星期天人-鼠(想像图)材料1:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？第3页,共39页，2024年2月25日，星期天A细胞B细胞人工诱导1、动物细胞融合的概念杂交细胞

动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合如：B淋巴细胞如：骨髓瘤细胞第4页,共39页，2024年2月25日，星期天细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞3、诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质2、原理？第5页,共39页，2024年2月25日，星期天4、动物细胞融合过程灭活丧失感染性保留融合活性病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。第6页,共39页，2024年2月25日，星期天比较项目细胞融合的原理细胞融合前的处理方法诱导手段用途植物体细胞杂交纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体5、比较动、植物体细胞杂交技术细胞膜的流动性植物细胞的全能性细胞膜的流动性第7页,共39页，2024年2月25日，星期天1、能使动物细胞融合的特有的诱导因子是A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动2、融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁3、动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞BAB第8页,共39页，2024年2月25日，星期天第二课时2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体第9页,共39页，2024年2月25日，星期天复习回顾：动物细胞融合（也称动物细胞杂交技术）（1）融合前处理（2）原理：（3）诱导融合方法（4）意义：第10页,共39页，2024年2月25日，星期天植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导融合方法主要用途获得植物新品种细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞全能性酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散离心、振荡、电刺激、聚乙二醇离心、振荡、电刺激、聚乙二醇灭活的病毒制备单克隆抗体第11页,共39页，2024年2月25日，星期天二、单克隆抗体第12页,共39页，2024年2月25日，星期天强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。B淋巴细胞效应B细胞记忆B细胞增殖分化复习回顾抗体第13页,共39页，2024年2月25日，星期天抗体的传统生产方法抗原

反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！同时有其它抗原和抗体的存在第14页,共39页，2024年2月25日，星期天

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个（效应）B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。1、单克隆抗体的概念单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体单克隆抗体第15页,共39页，2024年2月25日，星期天提示1：一种效应B细胞只能产生一种抗体对（效应）B细胞进行细胞培养可行吗？正常情况下，细胞分裂次数是？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2、单克隆抗体的制备原理第16页,共39页，2024年2月25日，星期天一个（效应）B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体

既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验实验原理：第17页,共39页，2024年2月25日，星期天①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②融合后会有多少种细胞类型？（考虑2个之内）③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？学习任务：1、带着下列问题阅读课本53-54页第二自然段2、用文字和箭头整理出制备单克隆抗体的过程3、单克隆抗体的制备过程第18页,共39页，2024年2月25日，星期天BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的效应B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。第19页,共39页，2024年2月25日，星期天已免疫过的小鼠检测后提取效应B细胞骨髓瘤细胞BB细胞、B瘤细胞、瘤瘤细胞、B细胞、瘤细胞细胞融合HAT培养基杂交瘤细胞（B瘤细胞）克隆、检测杂交瘤细胞小鼠腹水体外培养液注入提取单克隆抗体产生所需抗体多种第20页,共39页，2024年2月25日，星期天4、单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

第21页,共39页，2024年2月25日，星期天诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，化学性质单一，并能大量制备。4、单克隆抗体的应用第22页,共39页，2024年2月25日，星期天“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。第23页,共39页，2024年2月25日，星期天两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势本节小结两个“筛选”筛选出杂交瘤细胞

筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞第24页,共39页，2024年2月25日，星期天5、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞6、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）B淋巴细胞B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞AD第25页,共39页，2024年2月25日，星期天7、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体B第26页,共39页，2024年2月25日，星期天（2013海南卷）31单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-Ⅰ）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-Ⅰ的单克隆抗体可快速检测HSV-Ⅰ。回答下列问题：（1）在制备抗HSV-Ⅰ的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-Ⅰ蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗

的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了

反应，再从小鼠的

中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的

细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是

。HSV—1蛋白体液免疫脾脏骨髓瘤无限增殖且产生专一抗HSV-蛋白的抗体第27页,共39页，2024年2月25日，星期天（2）若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的

中使其增殖，再从

中提取、纯化获得。（3）通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-Ⅰ蛋白，其原因是该抗体具有

和

等特性。腹腔腹水特异性强灵敏度高第28页,共39页，2024年2月25日，星期天(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____类物质。若本题得到的单克隆抗体是非典抗体，则提取B细胞前可以给小鼠注射

。效应B

抗原

灭活的非典病毒8、第29页,共39页，2024年2月25日，星期天（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_________的诱导。细胞融合

灭活的病毒

聚乙二醇第30页,共39页，2024年2月25日，星期天(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是____________________________________选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞第31页,共39页，2024年2月25日，星期天(4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）__________________________________。有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境

第32页,共39页，2024年2月25日，星期天（2013重庆卷）2．题2图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是

A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群D第33页,共39页，2024年2月25日，星期天（2011年浙江卷）31.(12分)(1)实验分组：甲组：培养液+Y细胞+-TdR(标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)+生理盐水乙组：培养液+Y细胞+-TdR+X(生理盐水配制)每组设置若干个重复样品。（2）分别测定两组的CRD（细胞内的放射性强度），求每组的平均值。（3）将各样品在适宜条件下培养合适时间后，测定其CRD，求每组平均值并进行统计分析。（与说明，答题时用X、CRD、3H-TdR表示相关名词；Y细胞是能增殖的高等动物体细胞）请回答：第34页,共39页，2024年2月25日，星期天（1）实验目的：甲组：培养液+Y细胞+-TdR(标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)+生理盐水乙组：培养液+Y细胞+-TdR+X(生理盐水配制)每组设置若干个重复样品。（2）分别测定两组的CRD（细胞内的放射性强度），求每组的平均值。（3）将各样品在适宜条件下培养合适时间后，测定其CRD，求每组平均值并进行统计分析能增殖的高等动物体细胞探究X对Y细胞增殖（DNA合成）的影响第35页,共39页，2024年2月25日，星期天（2）预测实验结果及结论：__________。甲组：培养液+Y细胞+-TdR(标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)+生理盐水乙组：培养液+Y细胞+-TdR+X(生理盐水配制)每组设置若干个重复样品。（2）分别测定两组的CRD（细胞