电泳问题解决方案

电泳问题解决方案电泳问题解决方案20231/36电泳问题解决方案Example1“Smearing”，是难免了。Example2样品量过大而消灭了样品“穿插”污染，正常的当载样在20to40micrograms/well将会很秀丽。Example3有的窄些。Example4“Smearing”〔留意泳道4〕，这可能和样品中的含有大量脂类的膜相关蛋白引起的：由于不连续4WESTERNExample5电泳问题解决方案电泳问题解决方案202322/36这张还不是太糟糕。泳道45Example6泳的进展，样品不断的融解，以至形成托尾而不是一条条清洗的条带。另外，这个样品可能含有杂质比较多〔不溶性杂质或基因组DNA〕，可见上样前的充分别心也是必要的!Example7〔杂质在电泳过程中不断的进入胶中〕，或同时也污染了其他的相临样品。Example8完全是染液重复利用惹的祸，对于这张〔只有下面着色〕，只要重再染，效果还是可以的。Example9天染色结果变成这个样子了，呵呵~~缘由：固定在胶中的蛋白都溶到水里了。Example10集中。Example11电泳问题解决方案电泳问题解决方案202333/36难以很好推测。Example12〔聚合不够均匀，载样过大，消灭上面的状况自然是必定的了！Example13SDS〔可能有析出〕，样品根本无法进入胶中。只有让分别的蛋白入胶，才能进展良好的分别。Example14〔假设重复结果全都的话〕。Example15做的好图。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20234/36SDS-SDS-Rice“:///~bioslabs/studies/sds-/sdsgoofs.html“如有错误望各位战友不吝指出，感谢！我也格外期望能够借此帖引起大家对SDS-中的问题进展反思，共同争论您在SDS-中遇SDS-OK，let”sgo....SDS-“hallofshame”〔westernblot成熟起来的，这中间我就学到了很多，相对于PCR，我第一次就成功的做出了RT-PCR和重叠延长PCR，PCR〕胶是最简洁犯的多种错误〔固然这些错误仍在更之中。看你自己的胶缺陷或许并不能很好的解决问题，至少不是最完善的解决方式，本文用图例指出你可能在哪一些方面改进你的技术。之相对的解释及建议。从这本“失误大全”中你应当能够找到解决你的问题的正确的方法。电泳问题解决方案电泳问题解决方案202366/36病症1——涂抹痕迹〔smears〕涂抹痕迹——例1大。是明显这种连接不是格外结实〔我推举重倒胶，制胶很关键，假设你后续还要做blot，胶没有〕涂抹痕迹——例234这些泳道的样品主要含有一种蛋白〔血红蛋白的亚基91034于样品需要稀释后才能进展蛋白含量测定。但是这名学生却遗忘了这个样品已经稀释过了，〔〕电泳问题解决方案电泳问题解决方案20237/3620-40一团糟！涂抹痕迹——例32道的不全都性。电泳问题解决方案电泳问题解决方案202388/36涂抹痕迹——例4一个高约半厘米左右的样品被压缩成为一个仅为数微米厚的薄层条带，局部蛋白浓度急剧增加。景。很多膜相关蛋白的凝胶图像都显示同样的特征。4凝胶的区分力量，造成了很深的涂抹痕迹。病症2——条纹拖尾电泳问题解决方案电泳问题解决方案202399/36条纹拖尾——例1这个不是格外严峻，有条纹拖尾的泳道〔图中左边第5〕也是可以用的。条纹的消灭是由由于分别胶外表存在轻度的缺陷〔可能是在倒积层胶之前分别胶干了一些，造成整个泳道的蛋白浓度的不全都，使得消灭这种条纹拖尾病症，而不是全都的很深的背景。条纹拖尾——例24窄。留意凝胶前端染料的缺失，是由于电泳时间过长所致。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20231010/36条纹拖尾——例3浓缩就析出来了。然后再跑胶过程中渐渐溶解造成了条纹拖尾病症。1这个问题可能是由于加样孔成形不佳和/或凝胶加样不认真所致。背景较深而且不均一说明隔持续进入凝胶。加样孔。电泳问题解决方案电泳问题解决方案202311/36至加样孔外而不是进入积层胶。在几分钟之内觉察问题可能挽救一局部损失，但是由于PH效应导致有效的样品浓缩失败，样品损失以及蛋白污染电泳缓冲液。条带过浅——例2染色剂可解决。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20231212/36条带过浅——例3第五道旁边用“X”标记的泳道的样品蛋白含量被低估了，或者电泳样品预备时弄错了样品浓度，的主要的条带，说明这个孔的问题就是上样量过低。条带过浅——例4果就是上面的样子了。电泳问题解决方案电泳问题解决方案202313/36脱色液中的酸化甲醇是格外必要的，它可以固定蛋白阻挡其从聚丙烯酰胺基质上弥散。病症4——前端指示剂缺失局部前端指示剂——例1凝胶的话就不能确定各个条带相对应的迁移率了。这块胶有一个内部的刻度——也就是跑胶时带上了分子量标准〔Marker条带都可以作为参考来确定跑胶的迁移率。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20231414/36前端指示剂缺失——例2于组成均一的凝胶来说都是全都的。前端指示剂缺失——例3从这块胶曲率来看应当是属于由于两侧薄板之间结合略微松弛形成的边缘效应“皱眉”电泳问题解决方案电泳问题解决方案202315/36前端指示剂作为参考线，即使存在“皱眉效应”也可以进展比较。5——条带仅在凝胶顶部1很明显这块胶的指示剂前端位于什么位置。仍有连续电泳的空间可以把条带分得更开以增加区分增高直到弥散限制了区分率的连续提高。2这两块胶一个是7%的一个是14%的，看起来都还不错。有些人做试验室很不耐烦过早就终止了可能发生在你很晚跑电泳的时候，你的教师都饿了，而你却不能让他等你一步一步地做完。扭曲的条带样品浓缩之后全部的条带都变扭曲的外形。扭曲的条带也可以见于电场的不均一，但是这种条带的扭曲应当是对称的。加样孔不成形〔箭头所示。事实上，这种状况通常发生在加样孔深度不够或者样品不慎漏至加样孔外。的好处就是它可以削减泳动特别。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20231919/36高密度胶这块胶明显是非正确聚合的。聚丙烯酰胺的密度相当高以至于只有少数小分子蛋白可以进入分别的聚合。裂开胶住假设你收集了足够多的碎片这块胶仍旧是可以用的。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20232020/36电场效应假设把你浸在蓝色染料中然后拉着你在电场中跑，你也肯定会皱眉的7——包含多种病症的失败凝胶1么导致这些意料之外的效应格外重要。接下来你就可以着手改进你的跑胶质量。这块胶：缺乏前端指示剂——电泳时间过长；右侧泳道上样量偏大。电泳问题解决方案电泳问题解决方案202321/362上样量太大。分别胶上沿不平，条带扭曲。电泳问题解决方案电泳问题解决方案20232222/363这块胶：上样量不均一〔相邻加样孔上样不同全脱色。这说明可能是由于没有正确取放凝胶——用手直接接触凝胶导致胶外表留下蛋白而被考马斯亮蓝染色。有时候你可以得到格外秀丽的指纹！7——千奇百怪的胶1电泳问题解决方案电泳问题解决方案202323/3623E.Mora