2微生物的培养技术及应用【易学通】高二生物下学期特色课件（人教版20(1)9选择性必修3）

第1章发酵工程第2节微生物的培养技术及应用菌落学习目标01微生物的基本培养技术①培养基的配制②无菌技术③微生物的纯培养02微生物的选择培养和计数①选择培养基②微生物的选择培养基③微生物的数量测定从社会中来

向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。

一般家庭自制酸奶可能会导致肠胃不适，主要原因是有杂菌混入。

那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？这需要应用无菌技术和微生物的培养技术微生物的基本培养技术微生物的类群原核生物

(细菌、蓝细菌等)原生生物(如草履虫、衣藻等)真菌

(如酵母菌、霉菌等)酵母菌青霉菌大型真菌球菌蓝细菌放线菌草履虫衣藻病毒禽流感病毒SARS病毒是难以用肉眼观察的微小生物的统称，包括细菌、真菌、病毒和一些原生生物等。本章提及的微生物主要是用于发酵的细菌和真菌。微生物的基本培养技术菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。单菌落：一般是单个微生物繁殖形成的纯培养物。A：支原体的菌落

B：酵母菌的菌落

C：细菌的菌落

D：细菌和霉菌混杂的菌落

E：放线菌的菌落

F：霉菌的菌落微生物的基本培养技术微生物的类群是难以用肉眼观察的微小生物的统称，包括细菌、真菌、病毒和一些原生生物等。本章提及的微生物主要是用于发酵的细菌和真菌。菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。单菌落：一般是单个微生物繁殖形成的纯培养物。微生物的基本培养技术

一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。菌落特征是鉴定菌种的重要依据。形态突起(侧面观)边缘(部分)标点状圆形丝状不规则状假根状纺锤状扁平隆起凸透镜状垫状脐突状完整波状裂片状啮蚀状丝状卷曲状思考1:肺炎双球菌的S型菌和R型菌的菌落特征有什么区别？思考2:有鞭毛的细菌和无鞭毛的细菌其菌落边缘有何不同？微生物的基本培养技术实验室培养微生物条件1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件——培养基2）确保其它微生物无法混入——无菌技术高压蒸汽灭菌微生物的基本培养技术培养基的配制1、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。3、培养基类型：固体培养基液体培养基有

无

琼脂分离、计数、鉴定等扩大培养、工业生产2、培养基作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。长有酵母菌菌落盛有液体培养基微生物的基本培养技术划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途（补充资料1)培养基的类型及用途P11不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基微生物的基本培养技术选择培养基①基础培养基+青霉素→分离酵母菌等真菌②基础培养基+高浓度食盐→分离金黄色葡萄球菌③无碳源培养基→分离自养微生物④无氮源培养基→分离固氮微生物⑤以尿素为唯一氮源→分离分解尿素的细菌⑥以石油为唯一碳源→分离能消除石油污染微生物的基本培养技术大肠杆菌的代谢产物（有机酸）能与伊红美蓝结合，从而形成深紫色、并带有金属光泽的菌落。伊红美蓝培养基

鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学试剂配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。微生物的基本培养技术

鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学试剂配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。刚果红

+纤维素→红色复合物纤维素分解菌周围出现透明圈纤维素分解菌→纤维素酶→纤维二糖+葡萄糖（不能与刚果红形成红色复合物）微生物的基本培养技术

鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学试剂配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。①油脂培养基鉴别产脂肪酶的菌株→由淡红色变成深红色②H2S试验培养基鉴别产H2S菌株→产生黑色沉淀③加入酚红指示剂鉴别分解尿素的微生物→菌落周围变成红色给微生物提供碳元素的物质自养生物：CO2异养生物：含碳的有机物给微生物提供氮元素的物质固氮微生物：空气中的N2非固氮微生物：NH4+、NO3-

、尿素、含N有机物水无机盐速效碳源：淀粉、葡萄糖迟效碳源：纤维素（纤维素分解菌）碳源：氮源：4、培养基的营养构成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐微生物的基本培养技术

(2)还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及对氧气的要求。

（如维生素、氨基酸和碱基等）例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加_________，培养霉菌时需将培养基的pH调至____性，

培养细菌时需将pH调至_____________，培养厌氧微生物时则需要提供_______的条件。维生素酸中性或微碱性无氧1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g碳源、氮源和维生素等NaCl5g无机盐水定容至1000mL水微生物的基本培养技术无菌技术泛指在培养微生物的操作中，避免杂菌污染的方法。主要包括消毒和灭菌两个方面：消毒对操作的空间、操作者的衣着和手灭菌培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶、吸管和接种环等还要注意：避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触为了避免周围环境微生物污染，操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。思考:无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用?还能有效避免操作者被微生物污染.微生物的基本培养技术无菌技术1、消毒使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。

③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。

④紫外线消毒法：用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台

⑤生物消毒法:

指利用生物或其他代谢物去除环境中的部分微生物的方法.微生物的基本培养技术无菌技术2、灭菌（1）概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。

芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。孢子

细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。微生物的基本培养技术无菌技术2、灭菌

（1）概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。（2）灭菌的方法：

①灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧效果：最彻底

原理：使微生物燃烧

对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位

原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等

对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于

玻璃器皿

(如试管、培养皿、吸管、注射器)

金属器具

(如针头、镊子、剪刀等)的灭菌②干热灭菌：干热灭菌箱内160-170℃下加热2-3h微生物的基本培养技术无菌技术2、灭菌（1）概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。（2）灭菌的方法：干热灭菌箱在干热状态下，由于热穿透力较差，微生物的耐热性较强,必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的。因此，干热空气灭菌法采用的温度一般比湿热灭菌法_____。高微生物的基本培养技术无菌技术2、灭菌（1）概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。（2）灭菌的方法：

原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性

优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的

某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。对象：培养基等注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。③湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121℃下维持15-30min高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌法（排气-升压-保压-降压）高压蒸汽灭菌法（排气-升压-保压-降压）121°C1.5--2个大气压15分钟--30分钟适用于培养基、生理盐水、缓冲液、玻璃器皿和工作服等类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min3.无菌的方法：消毒与灭菌接种室、接种箱，超净工作台微生物的基本培养技术课堂检测无菌技术思考1:培养基灭菌为什么采用高压蒸汽灭菌而不采用干热灭菌？分析：干热灭菌箱内的高温会导致培养基的_________丧失，而高压蒸汽锅内的_________较大，不会导致培养基的_________散失。思考2:如何制备一瓶无菌水？分析：对一瓶有菌水进行___________________处理。思考3:某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是？分析：_____________________。思考4:某同学从高压蒸汽灭菌锅内拿出培养基后发现，培养基已经溅满了锥形瓶的瓶壁，最可能的原因是？

分析：___________________________________________，就提前打开了高压蒸汽锅。

思考5：用紫外线可以给接种室消毒，其原理是紫外线能___________________。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等_________，可以加强消毒效果。水分湿度水分高压蒸汽灭菌未将锅内冷空气排尽高压蒸汽锅的压力表读数还未降至零损伤细菌的DNA消毒液由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。（1）概念：（2）内容：1）配制培养基2）调pH、分装3）灭菌（培养基和器具）4）接种和分离5）恒温箱中培养微生物的基本培养技术微生物的纯培养酵母菌的纯培养探究-实践分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。1、菌落：2、纯培养：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。3、原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖微生物的基本培养技术方法步骤1、制备培养基微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践马铃薯(200g)去皮马铃薯块切块加水(1000mL)煮沸软烂马铃薯纱布过滤滤液加葡萄糖/蔗糖(20g)加琼脂加水定容(1000mL)酵母菌培养基配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养1）配制培养基方法步骤1、制备培养基微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践配制培养基→（调pH→分装）

→灭菌→倒平板→接种和分离→培养2）灭菌酵母菌培养基转移包牛皮纸锥形瓶加棉塞皮筋勒紧放入高压蒸汽灭菌锅中(100kPa、121℃)灭菌15~30min方法步骤1、制备培养基微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践配制培养基→（调pH→分装）

→灭菌→倒平板→接种和分离→培养2）灭菌5~8套培养皿几层牛皮纸包紧灭菌2h放入干热灭菌箱(160~170℃)包器材方法步骤1、制备培养基微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践配制培养基→（调pH→分装）

→灭菌→倒平板→接种和分离→培养培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板拔出锥形瓶的棉塞将瓶口迅速通过火焰用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养皿(10~20mL)倒入培养皿，立即盖上皿盖待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置翻转灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。2）倒平板倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践5.将制备的空白平板，置于恒温培养箱中培养一段时间，平板上长出了菌落，可能的原因是？2、接种和分离酵母菌微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践方法步骤配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养平板划线法稀释涂布平板法2、接种和分离酵母菌平板划线法:通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。(1)原理：单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散或稀释生长繁殖连续划线法分区划线法(2)“平板划线”实验操作微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践方法步骤配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养2、接种和分离酵母菌平板划线法微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践

配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养1．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。2．在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装出酵母菌培养液的棉塞。3．将试管口通过火焰。4．在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。5．将试管口通过火焰，并塞上棉塞。6．在火焰旁打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划3～5条平行线，盖上盖子。7．灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。方法步骤第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌分区划线法12345①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养平板划线法注意事项:微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞杀死接种环上原有微生物灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后微生物的基本培养技术问题探讨酵母菌的纯培养探究-实践2、接种和分离酵母菌稀释涂布平板法:将菌液进行一系列梯度稀释,然后将不同的稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基表面,进行培养。方法步骤配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践2、接种和分离酵母菌稀释涂布平板法:将菌液进行一系列梯度稀释,然后将不同的稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基表面,进行培养。方法步骤配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养微生物的基本培养技术酵母菌的纯培养探究-实践课堂检测接种和分离平板划线连续划线稀释分散灼烧冷却末端一划破稀释涂布平板梯度稀释稀释度涂布灭菌酒精灯火焰旁70%酒精冷却分布均匀3、培养酵母菌

完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h.结果分析与评价1、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？2、在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？微生物的基本培养技术应该没有

如果有,则说明培养基被杂菌污染如果观察到了不同形态的菌落,可能是接种的菌种不纯或无菌操作不规范等原因引起的.酵母菌的纯培养探究-实践方法步骤配制培养基→（调pH→分装）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养微生物的基本培养技术思维训练评估论点的可信程度评估“水果酵素”的功效是否真实？

P14阅读讨论所谓“酵素”就是”酶”的另一种说法。“酵素”制作就是利用微生物无氧呼吸的原理,进行泡菜一样的发酵。成分:可能含有糖类(包括一些简单的糖和膳食纤维),蛋白质(包括多种酶),有机酸等成分,不存在它独有的特殊的营养物质,甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质,食用后可能会危害人体健康.微生物的选择培养和计数课题背景

自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，更难实现。稀释涂布平板法呈现的杂菌群那么我们又如何达成这一目标呢？科学家们应用选择性培养基解决了这一难题。微生物的选择培养和计数美国黄石国家公园的一个热泉

1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出耐高温的DNA聚合酶。

为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？②原理:实验室微生物的筛选时，可人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

因为水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。①在寻找目的菌株时,要根据它相对应的生存环境的要求,到相应的环境中去寻找.筛选菌株的思路：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。①基础培养基+青霉素→分离酵母菌等真菌②基础培养基+高浓度食盐→分离金黄色葡萄球菌③无碳源培养基→分离自养微生物④无氮源培养基→分离固氮微生物⑤以尿素为唯一氮源→分离分解尿素的细菌⑥以石油为唯一碳源→分离能消除石油污染微生物的选择培养和计数选择培养基:将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。微生物的选择培养和计数思考:那么如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？思考-讨论选择培养基配方的设计尿素的立体结构

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。

这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。

讨论：1、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？2、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。培养基只是添加尿素作唯一氮源，其他营养成分基本相同。微生物的选择培养和计数微生物的数量测定

稀释涂布平板法

稀释涂布平板法:将菌液进行一系列梯度稀释,然后将不同的稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基表面,进行培养。1、概念：2、用途：

a.用于微生物的纯培养;b.用于选择筛选微生物;c.用于统计样品中活菌的数目.当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品中的一个活菌;通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约有多少活菌.3、原理：

微生物的选择培养和计数微生物的数量测定稀释涂布平板法4ⅹ1074ⅹ1054ⅹ1044ⅹ1034ⅹ107（2）计算公式：___g土中的菌株数=（C÷V）×MC：代表______________________V：代表___________________M：______________1某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板时所用的稀释液体积稀释倍数思考:甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？（80+90+100）/30.1×105=9×107个微生物的选择培养和计数微生物的数量测定

稀释涂布平板法

注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板上进行计数。②为增强实验说服力与准确性，设计实验时，需要涂布至少三个平板作为重复组。(目的:减少偶然误差)③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。(原因:当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.)④分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。微生物的选择培养和计数微生物的数量测定显微镜直接计数：这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数缺点：不能区分死菌与活菌不适于对运动细菌的计数微生物的选择培养和计数微生物的数量测定细菌计数板菌落数微生物的选择培养和计数土壤中分解尿素中的细菌的分离与计数稀释涂布平板法2）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备