骨髓检查专题知识讲座

骨髓检查专题知识讲座骨髓检查专题知识讲座第1页学习关键点1.概念粒/红比值、非红系百分比、骨髓稀释、细胞化学染色、造血干细胞、造血祖细胞2.骨髓检验适应证、骨髓细胞形态学检验、正常骨髓象特征以及骨髓增生程度分级和标准3.血细胞免疫标识技术及分子生物学技术在血液系统疾病中临床应用4.血细胞染色体常规显带技术种类及其在血液系统疾病中临床应用5.常见细胞化学染色及其临床意义骨髓检查专题知识讲座第2页一、骨髓常规检验（一）临床应用（二）骨髓穿刺术（三）骨髓片检验（四）大致正常骨髓象骨髓检查专题知识讲座第3页（一）临床应用1.诊疗或帮助诊疗血液系统疾病

能够确诊疾病包含各种白血病、再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、尼曼-匹克病、戈谢病、多发性骨髓瘤、骨髓转移癌等；帮助诊疗包含缺铁性贫血、溶血性贫血、特发性血小板降低性紫癜、恶性淋巴瘤骨髓浸润、骨髓增生异常综合征等，并可提升一些疾病诊疗率如疟疾、黑热病等；2.血液系统疾病疗效观察及病情判断，经过复查可作出骨髓完全缓解、个别缓解、改进、复发等意见。骨髓检查专题知识讲座第4页

适应证1.血象检验中有不明原因某种血细胞过多或过少，或出现幼稚细胞。2.不明原因肝、脾或淋巴结肿大3.不明原因发烧、紫癜、骨痛、恶病质4.疑有其它恶性肿瘤有骨髓内转移5.肾功效异常、血沉显著增加或有异常蛋白血症和异常蛋白尿症6.血液系统疾病定时复查、化疗后疗效观察7.其它：骨髓活检、细胞表面抗原测定、造血干/祖细胞培养、血细胞染色体核型分析以及微生物培养、寄生虫学检验（如疟疾、黑热病）等骨髓检查专题知识讲座第5页

禁忌证1.因为凝血因子严重缺点引发出血性疾病：血友病2.妊娠晚期妇女不宜做骨穿，若高度怀疑恶性病者可行骨髓穿刺，同时应终止妊娠。3.穿刺部位有炎症或畸形应避开骨髓检查专题知识讲座第6页（二）标本采集、制片、染色1.骨髓穿刺部位选择：①骨髓腔中红骨髓丰富；②穿刺部位浅表、易定位；③应避开主要脏器。常见穿刺部位：髂骨、胸骨、脊突、胫骨粗隆首选穿刺部位：髂后或髂前上棘骨髓检查专题知识讲座第7页2.骨髓制片注意事项骨髓易凝（不宜抗凝），取材后应马上涂片，并尽快送检，确保细胞在新鲜状态下染色。取玻片上骨髓小粒丰富骨髓液来制片推片时角度应小一些，速度应慢一些，防止血膜过厚。推片时应注意保留片尾和边缘，以防大致积细胞丢失。涂片后应马上扇干，以防细胞皱缩变形。初诊病人骨髓推片以10张为好，且全部送检同时应送检血片（不少于3张）和简单病历一份。对于非技术原因而多部位穿刺均抽不出骨髓者即为干抽，常见于骨髓纤维化症，骨髓极度增生或增生极度减低，肿瘤骨髓浸润等，可进行骨髓组织病理检验。骨髓检查专题知识讲座第8页ABCD

A涂片制备良好，尾部有骨髓小粒B涂片制备良好，尾部无骨髓小粒C涂片制备不佳，推片时用力不均匀且无尾部D涂片制备差，有些骨髓液未涂开骨髓检查专题知识讲座第9页3.骨髓取材情况判断（1）骨髓穿刺取材满意指征抽吸骨髓时病人有特殊酸痛感；可见较多骨髓小粒和脂肪滴（与血片区分）；镜检可见大量有核细胞，同时可发觉骨髓特有细胞：巨核C、浆C、组织C等镜检粒细胞杆状核多于分叶核。骨髓检查专题知识讲座第10页3.骨髓取材情况判断（2）骨髓稀释完全稀释：是指抽出“骨髓液”实际上与外周血一样，骨髓成份少或无。肉眼观察，其“骨髓液”较稀、无黄色小粒；推片尾部无骨髓小粒。个别稀释：指抽吸骨髓液时混进较多血窦血。特征包含：①骨髓小粒无或少见；②有核细胞降低，且分布不匀，显著呈条状分布；③骨髓特有细胞少；④中性分叶核粒细胞和成熟淋巴细胞百分比增加。骨髓检查专题知识讲座第11页4.染色方法（1）Wright染色：（2）Wight-Giemsa染色：①染液配制：Ⅰ液是将瑞特染粉1g、姬姆萨染粉0.3g加入到500ml甲醇瓶中配制而成，Ⅱ液为Wright染色中磷酸盐缓冲液；②染色步骤同瑞特染色。（3）国际标准化委员会推荐罗曼诺夫斯基染色：①染液配制：Ⅰ液由美蓝9.0mg、天青B17.0mg及伊红13.0mg溶解于20ml1:1甘油甲醇中配制而成，Ⅱ液：0.00132Msorensen磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）②染色步骤：涂片固定后，上述Ⅰ液用100mlⅡ液稀释后，染色10min后冲洗，待检。骨髓检查专题知识讲座第12页瑞氏染色结果分析骨髓检查专题知识讲座第13页（三）骨髓检验1.低倍镜检验了解骨髓取材、涂片及染色情况，选择适当部位用于有核细胞分类计数判断骨髓有核细胞增生程度：选择细胞分布适中部位进行，以骨髓中有核细胞与成熟红细胞之比判断观察巨核细胞分布情况，重点在尾部和边缘，并计数全片巨核细胞数量注意观察骨髓片边缘及尾部是否存在体积特大或成堆出现特殊病理细胞。骨髓检查专题知识讲座第14页骨髓有核细胞增生程度五级判断标准增生程度有核细胞/成熟红有核细胞/HP常见病例增生极度活跃1:1﹥100各种白血病增生显著活跃1:1050-100白血病及增生贫血增生活跃1:2020-50正常骨髓，贫血增生低下1:505-10再障增生极度低下1:200﹤5再障*10～20个是空档，检验者应依据详细情况（如年纪）等进行判断。骨髓检查专题知识讲座第15页骨髓有核细胞增生程度骨髓检查专题知识讲座第16页2.油镜检验（1）观察各细胞系增生情况，细胞发育情况，细胞大小、形态有没有异常，有没有异常结构等（2）骨髓有核细胞分类计数计数部位：应选择厚薄适当且均匀、细胞结构清楚、染色好、背景洁净部位进行计数，普通在体尾交界处计数秩序：呈“之”字形由尾部向头部推进，以免出现有些视野重复计数现象计数细胞：除巨核细胞、破碎细胞、分裂象以外其它有核细胞计数数目：最少计数200个有核细胞；增生显著活跃以上者最好计数500个；对于增生极度减低者可计数100个骨髓检查专题知识讲座第17页粒细胞系形态观察细胞大小、形态，包含有没有伪足、内外浆等；核形态有没有改变，如早期阶段核形不规则，成熟阶段核分页过多或不分页；胞浆有没有异常，包含着色异常，颗粒过多或过少，甚至无颗粒，是否有中毒颗粒、黄沙样颗粒、吞噬物、空泡、包涵体等；核浆发育是否正常，包含胞浆颜色改变，颗粒出现阶段。骨髓检查专题知识讲座第18页红细胞系形态观察细胞大小、形态改变，如巨幼改变，缺铁改变，幼红细胞结构异常（点彩、豪周小体、卡波环等）。核形改变：固缩、碎裂、畸形核浆发育不平衡：核染色质结构与胞浆颜色改变不平行，包含核老浆幼、浆老核幼成熟红细胞形态、大小、受色有没有异常，有没有异常结构骨髓检查专题知识讲座第19页巨核细胞系形态观察细胞数量（分布）、大小（小巨核、巨幼变）和形态（胞核分叶过多）改变。注意血小板数量、大小、形态、分布及颗粒改变。骨髓检查专题知识讲座第20页3.结果计算

（1）计算各系统细胞总百分比及各阶段细胞百分比某阶段细胞百分比=所计该阶段细胞个数/所计骨髓有核细胞总数×100（2）计算粒/红比值（G/E），即各阶段粒细胞百分率总和与各阶段有核红细胞百分率总和之比。（3）计算各阶段巨核细胞百分比或各阶段巨核细胞个数。骨髓检查专题知识讲座第21页4.填写骨髓细胞学检验汇报单

（1）填写患者姓名、性别、年纪、科室、病区、床号、住院号、骨髓涂片号、骨髓穿刺部位、骨髓穿刺时间、临床诊疗等。（2）填写骨髓片取材、制备和染色情况。（3）填写骨髓汇报单中各阶段细胞百分比、粒红比值、计数有核细胞总数等。（4）填写文字描述内容（见后）（5）存取经典彩图（6）填写诊疗意见及提议：依据骨髓片、血片及细胞化学染色所见，结合临床及疾病性质提出诊疗意见。骨髓检查专题知识讲座第22页骨髓汇报文字描述内容骨髓特征描写1、对骨髓取材、涂片、染色情况评价2、骨髓有核细胞增生程度和粒红比值3、详细叙述粒系和红系增生情况和成熟情况,细胞形态有没有异常，包含成熟红细胞；4、简单描述淋、单、浆各系基础情况5、涂片中巨核细胞和血小板分布和形态情况；6、有没有特殊病理细胞和寄生虫骨髓检查专题知识讲座第23页骨髓汇报文字描述内容血片特征描写1、白细胞分布情况以及分类结果评价，有没有幼稚细胞、异常结构及形态改变；2、成熟红细胞大小、形态、结构、受色有否异常，有没有有核红；3、血小板形态和分布情况；4、有没有特殊病理细胞和血液寄生虫。骨髓检查专题知识讲座第24页骨髓细胞形态学检验诊疗意见性质1.必定性诊疗：骨髓呈特异性改变，临床表现又经典者，如确诊为白血病、巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤、骨髓转移癌、戈谢病、尼曼-匹克病、疟疾等2.提醒性诊疗：骨髓有较特异性改变，但特异性不强，如提醒缺铁性贫血、急性白血病亚型等，同时可提议做对应检验3.符合性诊疗：骨髓呈非特异性改变，但结合临床及其它检验可解释临床者。如符合溶血性贫血、特发性血小板降低性紫癜、原发性血小板增多症、脾功效亢进等，同时可提议做深入检验4.可疑性诊疗：骨髓象有改变或出现少许异常细胞，临床表现不经典，可能为某种疾病早期、前期或不经典病例，如疑为难治性贫血等，要结合临床，做深入检验，并动态观察其改变骨髓检查专题知识讲座第25页骨髓细胞形态学检验诊疗意见性质5.排除性诊疗：临床怀疑为某种血液病，但骨髓象不支持或骨髓象大致正常，可考虑排除此病，但应注意也可能是疾病早期，骨髓还未有显著反应6.形态学描写：骨髓象有些改变，但提不出上述性质诊疗意见，可简述涂片形态学检验主要特点，同时尽可能提出一些提议7.其它：假如取材不佳，可提出骨髓稀释、骨髓个别稀释易见如基础正常可做出基础正常骨髓象对于已确诊病人，治疗后复查骨髓时，应与以前骨髓片进行比较，得出疾病个别缓解、完全缓解、改进、退步、复发等意见骨髓检查专题知识讲座第26页细胞分类注意事项（1）细胞形态受涂片、染色影响较大，分类时应观察全片情况，综合分析。（2）细胞形态改变多样，观察细胞时不能凭着一、二个非特征性特点就轻易地做出必定或否定判断（3）介于两阶段之间细胞应划为下一阶段（4）遇有难以确定细胞，个别可列入分类不明细胞，若有一定数量，则应借助细胞化学染色进行判断。（5）急性白血病时，各系统原始细胞虽各有特征，但有时极为相同，极难判别，这时应注意观察伴随出现幼稚细胞、成熟细胞，并与其比较，推测原始细胞归属。骨髓检查专题知识讲座第27页（三）成人大致正常骨髓象特点1.骨髓有核细胞增生活跃，粒红比值（2~4）:12.粒细胞系统占40%～60%，其中原始粒细胞＜2%，早幼粒细胞＜5%，中性中幼粒细胞约8%，中性晚幼粒细胞约10%，中性杆状核粒细胞约20%，中性分叶核粒细胞约12%，嗜酸性粒细胞＜5%，嗜碱性粒细胞＜1%3.红细胞系统占20～25%，以中、晚幼红细胞为主（各占10%），原始红细胞＜1%，早幼红细胞＜5%骨髓检查专题知识讲座第28页（三）成人大致正常骨髓象特点4.淋巴细胞系统占20～25%，单核细胞系统＜4%，浆细胞系统＜2%，淋单浆均为成熟阶段细胞，原始阶段罕见，幼稚阶段偶见5.巨核细胞系统在1.5cm×3cm血膜上，可见巨核细胞7～35个，其中原巨不见或偶见，幼巨占0%～5%，颗粒巨占10%～27%，产板巨占44%～60%，裸核型巨核细胞占8%～30%。血小板较易见，成堆存在6.其它细胞如组织细胞、成骨细胞、吞噬细胞等偶见，分裂象细胞少见，不见寄生虫和异常细胞。7.细胞形态：红细胞、血小板及各种有核细胞形态基础正常骨髓检查专题知识讲座第29页正常骨髓象必须具备四个条件1.有核细胞增生活跃

2.各系各阶段细胞所占百分比大致正常

3.各系各阶段细胞形态无显著异常

4.无特殊病理细胞和寄生虫骨髓检查专题知识讲座第30页小儿骨髓象特征（1）有核细胞较成人丰富，粒红比值有所降低，尤其是新生儿红系活跃，粒红比可达1:1。（2）婴儿期幼红细胞体积较大，有类似巨幼样特征。（3）淋巴细胞百分比偏高，伴随年纪增加，逐步靠近成人水平

骨髓检查专题知识讲座第31页二、细胞化学染色概念：细胞化学染色是一个以形态为基础，利用化学或生物化学技术对血细胞内各种化学成份作定位、定性和定量分析方法。染色要求：（1）在原位显示细胞成份和结构；（2）尽可能保持细胞生前成份、结构及酶活性不变。骨髓检查专题知识讲座第32页细胞化学染色基础过程1.固定固定作用就是保持使细胞结构及化学成份不变。常见有甲醛蒸汽固定法和液体（甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等）固定法。2.显示经过不一样化学反应，使被检测化学物质最终形成稳定有色沉淀。如偶氮偶联法、普鲁士蓝反应、雪夫反应。3.复染目标在于显示各种细胞特征而便于观察。复染液颜色应与有色沉淀颜色有显著对比度，既能显示细胞结构又能清楚地看出细胞化学染色结果。骨髓检查专题知识讲座第33页（一）骨髓铁染色1.原理：细胞外含铁血黄素和幼红细胞内铁蛋白聚合物与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀，并定位于含铁部位。4Fe3++3K4[Fe(CN)6]Fe[Fe(CN)6]3+12K+骨髓检查专题知识讲座第34页2.血细胞染色反应骨髓中贮存铁分为细胞内铁和细胞外铁。细胞内铁是指存在于中、晚幼红细胞及红细胞胞质中可染铁，分别称为铁粒幼红细胞、铁粒红细胞。铁粒幼细胞：经铁染色后胞浆内含有细小蓝色铁颗粒幼红细胞铁粒红细胞：经铁染色后胞浆内含有细小蓝色铁颗粒成熟红细胞环形铁粒幼细胞：经铁染色后幼红细胞内铁颗粒6颗以上。且围绕核周排列达1/2以上者骨髓检查专题知识讲座第35页2.血细胞染色反应依据细胞内铁颗粒多少可将铁粒幼细胞分为四型Ⅰ型：胞浆内有1~2个铁颗粒Ⅱ型：胞浆内有3~5个铁颗粒Ⅲ型：胞浆内有6~10个铁颗粒Ⅳ型：胞浆内铁颗粒>10个A有核红细胞胞质中无铁颗粒，B，为Ⅰ型铁粒幼红细胞C为Ⅱ型铁粒幼红细胞，D为Ⅲ型铁粒幼红细胞，E为Ⅳ型铁粒幼红细胞，F环形铁粒幼红细胞，G铁粒红细胞DEFGABCD骨髓检查专题知识讲座第36页2.血细胞染色反应细胞外铁指存在于骨髓小粒和巨噬细胞中可染铁。阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。依据骨髓小粒中铁存在方式及量将细胞外铁分为（-）（+）（++）（+++）（++++）骨髓检查专题知识讲座第37页3.铁染色参考范围细胞外铁：主要反应骨髓铁贮存情况正常：+～++约2/3人为（++），约1/3人为（+）细胞内铁：主要反应红细胞内可利用铁量。正常：铁粒幼达12～44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。

骨髓检查专题知识讲座第38页4.铁染色临床意义

铁染色临床主要应用于缺铁性贫血和铁粒幼细胞贫血等诊疗和判别诊疗及指导铁剂治疗。（1）缺铁性贫血细胞外铁阴性，细胞内铁阳性率显著下降或为零。经铁剂治疗有效后，其细胞内铁、外铁增多。（2）铁粒幼细胞贫血铁粒幼红细胞增多，其中环形铁粒幼红细胞增多，占15%以上，细胞外铁也显著增多。（3）骨髓增生异常综合征伴环形铁粒幼红细胞增多难治性贫血，其环形铁粒幼红细胞占15%以上，细胞外铁也常增加。（4）其它非缺铁性贫血溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血、屡次输血后和白血病等，细胞外铁和内铁正常或增加。（5）感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症、血色病等，细胞外铁显著增加而铁粒幼红细胞可降低。骨髓检查专题知识讲座第39页（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）

中性粒细胞碱性磷酸酶是成熟粒细胞特异性颗粒（中性颗粒）中释放一个酶，其活性与粒细胞成熟程度和功效相关，正常人只有成熟中性粒细胞（包含杆状核）可见阳性。

1.原理（偶氮偶联法）中性粒细胞碱性磷酸酶在PH9.2—9.8缓冲液中能水解磷酸萘酚钠，释放出萘酚与重氮盐偶联，形成不溶性偶氮染料而沉积于中性粒细胞胞浆中。骨髓检查专题知识讲座第40页2.NAP染色结果NAP存在于中性成熟粒细胞中，阳性结果为胞质内出现有色颗粒状或弥散状沉淀。计数100个成熟中性粒细胞，依据细胞胞浆颜色深浅及颗粒分布情况判定为：（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），分别计0、1、2、3、4分。100个细胞中阳性细胞总数即为阳性率，100个细胞中阳性细胞分数总和即为积分。3.参考范围

NAP积分值为14～113分

骨髓检查专题知识讲座第41页

（-）（+）（++）（+++）（++++）

嗜酸性粒细胞单核细胞淋巴细胞ABCD骨髓检查专题知识讲座第42页3.NAP临床意义

有些生理性原因可使酶活性发生改变，如应激状态、经前期、妊娠期、新生儿等可使NAP活性增加。临床常应用于以下疾病判别：

NAP↑NAP↓急性淋巴细胞白血病急性髓细胞白血病（粒、单、红）类白血病反应慢性粒细胞白血病（急变期增高）再障PNH反应性组织细胞增生症恶组真性RBC增多症继发性RBC增多症细菌性感染病毒性感染阻塞性黄疸肝细胞性黄疸骨髓检查专题知识讲座第43页（三）过氧化物酶（POX）染色复方联苯胺法原理：细胞中髓过氧化物酶能分解过氧化氢，释放新生态氧，新生态氧能将四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，联苯胺蓝自动脱氧呈棕色四甲基苯醌二胺。若加入亚硝基铁氰化钠，则与联苯胺蓝形成稳定蓝色颗粒，并定位于过氧化物酶所在部位。二氨基联苯胺法原理：血细胞内POX，在H2O2存在情况下，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不溶性沉淀，定位于POX酶所在活性部位。骨髓检查专题知识讲座第44页过氧化物酶染色操作1、取1毫升0.1%TMB溶液，加10微升亚硝基铁氰化钠饱和溶液混匀；2、于新鲜干燥血片（骨髓片）上滴加0.5mlTMB混合溶液，1min后再加稀过氧化氢溶液0.7ml，混匀，染色6min。3、倾去染液，待干，再以瑞氏染液复染15~20min,水洗，干后镜检。骨髓检查专题知识讲座第45页过氧化物酶染色结果复方联苯胺法细胞浆内出现蓝色或蓝黑色颗粒即为阳性，依据蓝色颗粒粗细、深浅及分布情况可划分为以下三种情况：强阳性：颗粒粗而深染，充满胞浆阳性：颗粒较粗，弥散分布弱阳性：颗粒细小，稀疏分布阴性弱阳性阳性强阳性骨髓检查专题知识讲座第46页

二氨基联苯胺法

细胞浆内出现金黄色颗粒即为阳性过氧化物酶染色结果骨髓检查专题知识讲座第47页过氧化物酶染色临床意义

髓过氧化物酶主要存在于原始阶段以下粒细胞和单核细胞胞浆内，其含量伴随细胞成熟而逐步增加，粒细胞系反应较强，单核细胞系反应较弱，而淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、红细胞系均为阴性。嗜碱粒细胞呈阴性，嗜酸粒细胞呈强阳性。骨髓检查专题知识讲座第48页过氧化物酶染色临床意义

过氧化物酶染色在临床上主要用于判别急性髓细胞和急性淋巴细胞白血病，同时还有利于急性髓细胞白血病分型。

M2、M3反应强，M1、M5反应弱，尤其有利于M3与M5判别。

急性淋巴细胞白血病急性单核细胞白血病急性粒细胞白血病急性早幼粒细胞白血病

CDEF骨髓检查专题知识讲座第49页过氧化物酶染色质量确保1、过氧化物酶染色要求标本一定要新鲜，骨髓片与血片均可。2、过氧化氢轻易失效，可将其滴于血膜上，观察有没有气泡产生来判断。3、过氧化氢浓度应适宜，过高会抑制酶作用。4、配制TMB乙醇浓度应掌握在85—88%为好，过高会使蛋白快速凝固，影响染液渗透。5、染液PH以5.5为好。6、细胞化学染色不是为识别单个细胞，更不能以单个细胞反应来解释结果，而应依据全片整体情况来分析。骨髓检查专题知识讲座第50页（四）苏丹黑B染色法原理苏丹黑B是一个较强脂溶性染料，易溶于细胞中脂质成份中去，从而显示细胞中脂质所在。临床意义苏丹黑B染色结果及临床应用与过氧化物酶染色基础一致，主要用于急性白血病类型判别。因其与细胞中脂质结合而不受涂片新鲜程度影响。其敏感度高于过氧化物酶法，但特异性较过氧化物酶法低。骨髓检查专题知识讲座第51页（五）过碘酸-雪夫染色（糖原染色）原理过碘酸是种氧化剂，能使含有乙二醇基（-CHOH-CHOH）多糖类物质氧化，形成二醛基（-CHO-CHO）。醛基与雪夫试剂中无色品红结合变成紫红色化合物，沉积于含有多糖类细胞内。该反应称为过碘酸-雪夫反应（PAS），又称糖原染色。骨髓检查专题知识讲座第52页正常血细胞染色反应1.粒细胞系统分化差原始粒细胞呈阴性，分化好原始粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并伴随细胞成熟而逐步增强，阳性呈弥散性、细颗粒状；嗜碱性粒细胞中嗜碱性颗粒呈阳性，而颗粒之间胞质不着色；嗜酸性粒细胞中嗜酸性颗粒不着色，而颗粒之间胞质呈红色。2.红细胞系统有核红细胞及红细胞均呈阴性。3.单核细胞系统分化差原始单核细胞呈阴性，其它阴性或阳性，阳性多数呈细颗粒状。4.淋巴细胞少数呈阳性，阳性率常小于20％，阳性呈粗颗粒状或块状。5.巨核细胞系统巨核细胞和血小板呈阳性，呈颗粒状或块状。骨髓检查专题知识讲座第53页EFGHABCDE淋巴细胞呈颗粒状阳性，F淋巴细胞呈粗颗粒状阳性，G单核细胞颗粒状阳性，H有核红细胞呈阴性A中性粒细胞呈弥散状阳性，B中性幼稚粒细胞呈弥散、颗粒状阳性，C嗜酸性粒细胞颗粒呈阴性，D嗜碱性粒细胞颗粒呈阳性。骨髓检查专题知识讲座第54页糖原染色临床意义临床上可用于（1）判别红白血病、MDS幼红细胞阳性巨幼贫、再障幼红细胞阴性（2）判别急粒白血病细胞阴性急淋白血病细胞阳性急单白血病细胞极弱阳/阴性（3）判别弋谢细胞强阳性尼曼一匹克细胞阴性骨髓检查专题知识讲座第55页（六）特异性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色）原理粒细胞内特异性酯酶能水解氯乙酸AS-D萘酚，产生AS-D萘酚与重氮盐坚牢紫酱GBC偶联，生成不溶性红色沉淀，并定位于胞浆中。

粒细胞酯酶GBC

氯乙酸AS—D萘酚AS-D萘酚红色沉淀骨髓检查专题知识讲座第56页正常血细胞染色反应

特异性酯酶主要分布于中性粒细胞和肥大细胞胞浆内，阳性反应呈红宝石颗粒状。1.粒细胞系统分化差原始粒细胞呈阴性，分化好原始粒细胞以下各阶段均呈阳性，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞呈阴性。2.单核细胞系统个别细胞呈弱阳性，其它呈阴性。3.其它细胞如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核红细胞、血小板等均呈阴性，肥大细胞阳性。

中性粒细胞呈强阳性幼稚粒细胞呈强阳性原始细胞呈阳性淋巴细胞呈阴性骨髓检查专题知识讲座第57页特异性酯酶染色临床意义临床上主要用于急性白血病判别

急粒急单急淋急性粒-单白血病阳性阴性阴性个别细胞呈阳性骨髓检查专题知识讲座第58页（七）非特异性酯酶染色非特异性酯酶包含有α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）、α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）、醋酸AS-D萘酚酯酶染色原理：细胞中萘酚酯酶能水解各种萘酚酯，生成萘酚与重氮盐偶联形成不溶性有色沉淀，定位于细胞质内酶所在部位。上述萘酚酯酶可存在于单核细胞、粒细胞和淋巴细胞中，都属非特异性酯酶。单核细胞系统阳性可被氟化钠抑制，所以需同时做氟化钠抑制试验。骨髓检查专题知识讲座第59页正常血细胞染色反应1.正常单核系分化差原始单核细胞呈阴性外，各阶段均呈阳性，可被氟化钠所抑制。2.粒系和淋巴系细胞含量少，呈弱阳性或阴性，阳性不被氟化钠抑制。3.其它细胞巨核细胞和血小板呈阳性，少数有核红细胞呈弱阳性，都不被氟化钠抑制。骨髓检查专题知识讲座第60页非特异性酯酶染色临床意义临床上可用于急性白血病类型判别。（1）急单白血病（M5）细胞呈阳性，粒-单细胞白血病（M4）个别细胞呈阳性，可被氟化钠抑制（2）急粒白血病（主要是M3）早幼粒呈阳性，不被氟化钠抑制（3）急淋白血病细胞呈阴性骨髓检查专题知识讲座第61页（八）酯酶双染色【原理】在同一张涂片上进行两种酯酶染色方法称为酯酶双染色。多数采取一个特异性酯酶加一个非特异性酯酶染色。反应原理基础上同各自染色原理，同一张涂片上细胞要分别在两种不一样基质液中作用一定时间，最终复染，显微镜观察。【临床意义】酯酶双染色可同时观察两种不一样或同一