含氮类药物的分析

关于含氮类药物的分析12第一节芳胺类药物的分析一、结构与性质1.基本结构与代表药物对氨基苯甲酸酯的基本结构

第2页,共181页，2024年2月25日，星期天3第3页,共181页，2024年2月25日，星期天42.主要性质：（1）芳伯氨基的特性①重氮化-偶合反应②与芳醛缩合为Schiff碱③易氧化变色注:盐酸丁卡因无此性质第4页,共181页，2024年2月25日，星期天5（2）水解特性酯键容易水解，光、热或碱有促进作用，可利用水解产物进行鉴别（3）弱碱性（脂烃胺侧链）与生物碱沉淀试剂生成沉淀非水溶液滴定法测定含量（4）光谱特性第5页,共181页，2024年2月25日，星期天6（5）有机碱的溶解特性游离碱——油状液体或低熔点固体，难溶于水，易溶于有机溶剂其盐酸盐——白色结晶性粉末，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂第6页,共181页，2024年2月25日，星期天7二、鉴别试验1.芳香第一胺反应

又称重氮化-偶合反应原理：第7页,共181页，2024年2月25日，星期天8①直接反应

苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠②酸水解后起反应

贝诺酯③盐酸丁卡因无芳伯氨基，在酸性下与亚硝酸钠不起重氮化反应，但反应生成N-亚硝基化合物，呈乳白色沉淀。第8页,共181页，2024年2月25日，星期天9盐酸普鲁卡因Ch.P.（2010）[鉴别]（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。第9页,共181页，2024年2月25日，星期天10亚硝基化反应：第10页,共181页，2024年2月25日，星期天112.水解产物的反应酯键＋水→酸＋醇例子：（1）盐酸普鲁卡因（2）苯佐卡因第11页,共181页，2024年2月25日，星期天12例盐酸普鲁卡因Ch.P.（2010）【鉴别】（1）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。第12页,共181页，2024年2月25日，星期天13盐酸普鲁卡因△第13页,共181页，2024年2月25日，星期天14（2）苯佐卡因（碘仿反应）黄色沉淀、臭气第14页,共181页，2024年2月25日，星期天15例苯佐卡因Ch.P.（2010）【鉴别】（2）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5ml，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。第15页,共181页，2024年2月25日，星期天163.制备衍生物测熔点盐酸

丁卡因白色结晶过滤洗涤25%硫氰酸铵5%醋酸钠测熔点（131℃）80℃干燥第16页,共181页，2024年2月25日，星期天17Ch.P（2010）盐酸丁卡因【鉴别】（1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80℃干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点约为131℃。第17页,共181页，2024年2月25日，星期天184.氯化物的反应5.UV苯环的紫外吸收特性

第18页,共181页，2024年2月25日，星期天196.IR盐酸普鲁卡因注射液的鉴别：取本品（约相当于盐酸普鲁卡因80mg)，水浴蒸干，残渣经减压干燥，依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集397图）一致。7.HPLC法利用含量测定项下的色谱图进行鉴别，规定保留时间应一致。第19页,共181页，2024年2月25日，星期天20第20页,共181页，2024年2月25日，星期天21三、特殊杂质检查1.盐酸普鲁卡因及其制剂中对氨基苯甲酸的检查杂质来源：制备或贮藏过程中水解盐酸普鲁卡因水解对氨基苯甲酸脱羧苯胺（有色、毒性增加）第21页,共181页，2024年2月25日，星期天22HPLC法离子对色谱法离子对试剂？外标法第22页,共181页，2024年2月25日，星期天23盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中含1

g的溶液，作为对照品溶液；取供试品溶液1ml与对照品溶液9ml混合均匀，作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.1％庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）-甲醇（68∶32）为流动相；检测波长为279nm。取系统适用性试验溶液10

l，注入液相色谱仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000，盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取对照品溶液10

l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10

l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.5%。第23页,共181页，2024年2月25日，星期天242.盐酸丁卡因及其制剂中有关物质的检查以对丁氨基苯甲酸为对照品，TLC法检查

第24页,共181页，2024年2月25日，星期天25TLC法用于杂质的检查1.杂质对照品法2.供试品溶液的自身稀释对照法3.杂质对照法与供试品自身稀释对照法并用（两法并用）4.母体药物对照法（对照药物法）

当杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异时应用，要求对照药物合格且稳定性好P96第25页,共181页，2024年2月25日，星期天26Ar—NH2Ar—N≡N+Cl-

HClNaNO2（1）原理1.亚硝酸钠滴定法适用范围：

具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物四、含量测定第26页,共181页，2024年2月25日，星期天271）加入适量的溴化钾

溴化钾起催化剂的作用（2）测定条件第27页,共181页，2024年2月25日，星期天28慢快快第28页,共181页，2024年2月25日，星期天29第一步是控制步骤Ar-NH2

浓度↑，NOCl↑，反应加快Ar-NH2+HCl→Ar-NH2·HCl成盐反应慢K1>K2300倍第29页,共181页，2024年2月25日，星期天302）酸的种类及浓度一般采用盐酸酸性，反应mol比1:2，但实际用过量为1:2.5~6最常用反应速度随酸种类的不同而不同：

νHBr

>νHCl

>νH2SO4，HNO3价贵第30页,共181页，2024年2月25日，星期天31盐酸为何要过量？

加快重氮化反应速度重氮盐在酸性溶液中稳定防止生成偶氮氨基化合物实际用量为1:2.5~6第31页,共181页，2024年2月25日，星期天32酸度不宜过大阻碍芳伯氨基的游离亚硝酸易分解第32页,共181页，2024年2月25日，星期天33

T，VT，亚硝酸逸失，重氮盐分解3）温度在室温下（10℃～30℃）进行滴定第33页,共181页，2024年2月25日，星期天344）滴定方式与速度控制为了避免滴定过程中HNO2

的分解逸失，滴定速度先快后慢。过快：指示剂变色，终点提前过慢：HNO2

的分解逸失第34页,共181页，2024年2月25日，星期天35

滴定方式：

滴定管尖端插入液面下2／3处，在搅拌下一次性放下大部分滴定液，近终点前才提出滴定管，冲洗管尖，再缓缓滴定至终点。第35页,共181页，2024年2月25日，星期天36（3）指示终点的方法永停滴定法（Ch.P.）外指示剂法（KI-淀粉）电位法内指示剂法（中性红）终点指示方法第36页,共181页，2024年2月25日，星期天371）永停滴定法（附录ⅦA）用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂—铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。第37页,共181页，2024年2月25日，星期天38盐酸普鲁卡因的含量测定：取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl第38页,共181页，2024年2月25日，星期天392）电位法USP3）外指示剂法碘化钾-淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O

4）内指示剂法

中性红不可逆指示剂第39页,共181页，2024年2月25日，星期天402.酸碱滴定法盐酸丁卡因的水溶液显酸性，可用氢氧化钠溶液滴定盐酸丁卡因的水溶液显酸性，在反应体系中加入适量乙醇和盐酸，用氢氧化钠滴定液滴定，电位法指示滴定终点。第40页,共181页，2024年2月25日，星期天41第一个等当点：第二个等当点：

根据两个等当点间相应的氢氧化钠滴定液的体积，即可计算药物的盐酸盐的含量。第41页,共181页，2024年2月25日，星期天42盐酸丁卡因的含量测定：取本品约0.25g，精密称定，加乙醇50ml振摇使溶解，加0.01mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，照电位滴定法，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，两个突跃点体积的差作为滴定体积。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于30.08mg的C15H24N2O2·HC1。第42页,共181页，2024年2月25日，星期天433.非水碱量法盐酸丁卡因结构中脂烃胺侧链有弱碱性，可用非水碱量法测定注意：

溶剂、试剂、滴定剂、终点指示第43页,共181页，2024年2月25日，星期天44JP盐酸丁卡因的含量测定：取预先干燥过的本品约0.2g，精密称定，加甲酸2ml与醋酐80ml溶解后，在30℃水浴中加热15min，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，电位法指示终点，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于30.08mg的C15H24N2O2‧HCl。第44页,共181页，2024年2月25日，星期天45注射用盐酸丁卡因的测定

对照品法定量5.HPLC法盐酸普鲁卡因注射液的测定

分离模式：离子对色谱法

定量方法：外标法4.UV法

第45页,共181页，2024年2月25日，星期天46一、结构与性质1.基本结构与代表药物第二节苯乙胺类药物的分析第46页,共181页，2024年2月25日，星期天47第47页,共181页，2024年2月25日，星期天48第48页,共181页，2024年2月25日，星期天492.主要性质：（1）弱碱性

有烃胺基侧链，具有弱碱性（2）酚羟基特性：

①与三氯化铁呈色

②易被氧化呈色

③易被溴取代（溴量法）第49页,共181页，2024年2月25日，星期天50（3）旋光性：手性碳原子（4）芳伯氨基特性：（盐酸克仑特罗）（5）光谱特性（6）溶解性：游离碱溶于有机溶剂而其盐溶于水第50页,共181页，2024年2月25日，星期天51二、鉴别试验1.与FeCl3反应酚羟基紫色或紫红色2.氧化反应

含酚羟基（特别邻二酚羟基），易被碘、过氧化氢和铁氰化钾等氧化呈色第51页,共181页，2024年2月25日，星期天52亚硝基铁氰化钠△3.与亚硝基铁氰化钠（Rimini）反应脂肪伯氨基无醛丙酮,NaHCO3红紫色此为脂肪族伯胺专属反应，如重酒石酸间羟胺，可与含脂肪仲氨基的肾上腺素区别。第52页,共181页，2024年2月25日，星期天53重酒石酸间羟胺盐酸多巴胺盐酸甲氧明重酒石酸去甲肾上腺素硫酸苯丙胺·第53页,共181页，2024年2月25日，星期天544.双缩脲反应芳环侧链具有氨基醇结构第54页,共181页，2024年2月25日，星期天555.UV与IR6.TLC与HPLCTLC法规定主斑点的位置和颜色应一致。HPLC法规定保留时间应一致。第55页,共181页，2024年2月25日，星期天56三、特殊杂质检查1.酮体的检查来源：原料剩余，即氢化不完全第56页,共181页，2024年2月25日，星期天57氢化还原酮体药物310nm有吸收方法:规定药物在310nm处的吸收度310nm无吸收原理:比较法P92第57页,共181页，2024年2月25日，星期天581——肾上腺素2------酮体310第58页,共181页，2024年2月25日，星期天59杂质限量检查法对照法灵敏度法比较法P92

阿司匹林Ch.P（2010）【检查】溶液的澄清度

取本品0.50g，加温热至约45℃的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。

第59页,共181页，2024年2月25日，星期天60例中国药典（2010年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸溶液（9→2000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波长处测定，吸收度不得超过0.05，已知肾上腺素酮在310nm波长处的百分吸收系数为453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量。第60页,共181页，2024年2月25日，星期天61第61页,共181页，2024年2月25日，星期天622.有关物质的检查来源:原料，中间体，副产物一般方法：

TLC法的自身稀释对照法

HPLC法的主成分自身对照法

PC法用于极性较大的药物第62页,共181页，2024年2月25日，星期天63检查方法：纸色谱法（PC）分离后，甲醇萃取，照分光光度法于232nm波长处测定吸收度，控制吸收度以控制有关物质的量。例：盐酸苯乙双胍中有关物质的检查第63页,共181页，2024年2月25日，星期天64取本品1.0g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录ⅤA）试验，精密吸取0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条（7.5cm×50cm）上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条上，样点直径均为0.5

1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以乙酸乙酯-乙醇-水（6∶3∶1）为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10％铁氰化钾溶液1ml，加10％亚硝基铁氰化钠溶液与10％氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15分钟，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样纸条及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密量取甲醇各20ml，分别进行萃取，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在232nm的波长处测定吸光度，不得过0.48。第64页,共181页，2024年2月25日，星期天65四、含量测定1.非水碱量法常用于有机碱性药物的含量测定（详将见第四章……）第65页,共181页，2024年2月25日，星期天662.

溴量法原理：盐酸去氧肾上腺素＋3Br2＋3HBr第66页,共181页，2024年2月25日，星期天67Br2+

2KI→2KBr+I2I2+

2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6去氧肾上腺素︰Br2︰Na2S2O3

1︰3︰6反应摩尔比T=CMn=3.395mg/ml0.05×203.53=第67页,共181页，2024年2月25日，星期天68精密称取盐酸去氧肾上腺素0.1085g，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.0982mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗滴定液14.35ml，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗滴定液46.46ml。每1ml溴滴定液(0.05mol/L)相当于3.395mg的C9H13NO2.HCl。第68页,共181页，2024年2月25日，星期天69第69页,共181页，2024年2月25日，星期天703.UV-Vis法酚羟基呈色Fe2+芳伯氨基呈色重氮化-偶合反应第70页,共181页，2024年2月25日，星期天71取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的三氯甲烷20ml使溶解，用盐酸溶液（9→100）振摇提取3次（20ml、15ml、10ml），分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液（9→100）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另取盐酸克仑特罗对照品适量，精密称定，加盐酸溶液（9→100）溶解并定量稀释制成每1ml中含7.2

g的溶液，作为对照品溶液。第71页,共181页，2024年2月25日，星期天72精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分别置25ml量瓶中，各加盐酸溶液（9→100）5ml与0.1%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置3分钟，各加0.5%氨基磺酸铵溶液1ml，摇匀，时时振摇10分钟，再各加0.1%盐酸萘乙二胺溶液1ml，摇匀，放置10分钟，用盐酸溶液（9→100）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光光度法（附录IVA），在500nm的波长处分别测定吸光度，计算，即得第72页,共181页，2024年2月25日，星期天73（1）偶合剂：碱性下用β-萘酚酸性下用N-（1-萘基）-乙二胺（即：盐酸萘乙二胺）第73页,共181页，2024年2月25日，星期天74（2）氨基磺酸铵的作用：除去过量的亚硝酸，避免其与偶合试剂显色偶合剂N-（1-萘基）-乙二胺遇亚硝酸也能显色，干扰比色测定，所以在重氮化后，应加氨基磺酸铵将剩余的亚硝酸分解除去，再加偶合试剂N-（1-萘基）-乙二胺。第74页,共181页，2024年2月25日，星期天754.HPLC法一般方法：离子对色谱法离子抑制色谱法例16盐酸异丙肾上腺素注射液：

为离子对色谱法，调节溶液pH为3.0，加入离子对试剂庚烷磺酸钠外标法定量第75页,共181页，2024年2月25日，星期天76第三节芳氧丙醇胺类药物的分析一、结构与性质1.基本结构与代表药物芳氧丙醇胺类药物结构中有芳环，并具有氨基丙醇侧链，基本结构为：第76页,共181页，2024年2月25日，星期天77阿替洛尔盐酸卡替洛尔第77页,共181页，2024年2月25日，星期天78盐酸普萘洛尔氧烯洛尔第78页,共181页，2024年2月25日，星期天79酒石酸美托洛尔富马酸比索洛尔第79页,共181页，2024年2月25日，星期天802.主要理化性质（1）弱碱性（2）旋光性（3）光谱特征（4）溶解性：游离碱难溶于水，盐可溶于水第80页,共181页，2024年2月25日，星期天81二、鉴别试验1.沉淀反应盐酸普萘洛尔注射液的鉴别：取本品适量，加硅钨酸试液数滴，即产生淡粉红色沉淀。第81页,共181页，2024年2月25日，星期天822.与高锰酸钾反应部分药物分子结构中有双键，具有还原性氧烯洛尔的鉴别：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高锰酸钾溶液1ml，高锰酸钾颜色消褪，并产生红棕色沉淀。3.UV4.IR省略……5.TLC第82页,共181页，2024年2月25日，星期天833.紫外光谱富马酸比索洛尔的鉴别：取本品，加水溶解并分别稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液（1）和每1ml中约含0.01mg的溶液（2），照紫外-可见分光光度法（附录IVA）测定，溶液（1）在271nm的波长处有最大吸收；溶液（2）在223nm的波长处有最大吸收。第83页,共181页，2024年2月25日，星期天844.红外光谱酒石酸美托洛尔的鉴别：取本品适量，加水溶解后，再加氨试液碱化，用二氯甲烷提取，静置，取适量二氯甲烷液，置水浴上蒸干，置五氧化二磷干燥器中放置过夜，依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集685图）一致。第84页,共181页，2024年2月25日，星期天85盐酸卡替洛尔滴眼液的鉴别：取本品，用水稀释制成每lml中约含盐酸卡替洛尔5mg的溶液，作为供试品溶液；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，加水溶解并稀释制成每lml中约含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VB）试验，吸取上述两种溶液各2

l,分别点于同一硅胶GF254

薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液（50∶20∶1）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。5.色谱法第85页,共181页，2024年2月25日，星期天86三、特殊杂质检查1.游离萘酚的检查盐酸普萘洛尔中游离萘酚的检查：取本品20mg，加乙醇与10%氢氧化钠溶液各2ml，振摇使溶解，加重氮苯磺酸试液lml，摇匀，放置3min；如显色，与

-萘酚的乙醇溶液（每lml中含

-萘酚20

g）0.30ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.3%）。第86页,共181页，2024年2月25日，星期天872.有关物质的检查酒石酸美托洛尔中有关物质的检查（TLC法+HPLC法）（1）取本品，加甲醇溶解并定量稀释制成每lml中约含50mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用甲醇分别定量稀释制成每lml中含0.1mg和0.25mg的溶液，作为对照溶液（1）和（2）。照薄层色谱法试验，量取上述三种溶液各5

1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-乙酸乙酯（10∶90）为展开剂（层析缸底部放置2个盛有展开剂体积30%的浓氨溶液小烧杯，并预先平衡1h以上），展开后，在空气中晾干3h，再置碘蒸气缸中放置15h，取出，立即检视，除主斑点与原点外，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液（2）的主斑点比较，不得更深，且深于对照溶液（1）主斑点的杂质斑点不得多于1个。第87页,共181页，2024年2月25日，星期天88（2）取本品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含10

g的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸盐缓冲液（取醋酸铵3.9g，加水810ml溶解后，加三乙胺2.0ml，冰醋酸10.0ml，磷酸3.0ml，摇匀）-乙腈（824∶146）为流动相；流速为每分钟2ml；柱温30℃；检测波长为280nm。另取洒石酸美托洛尔对照品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，置石英杯中，在距离紫外光灯（254nm）下5cm处，放置3h，作为系统适用性试验溶液。取系统适用性试验溶液20

l，注入液相色谱仪，酒石酸美托洛尔峰的保留时间约为7min，相对保留时间约0.3处为4-[(2RS)-2-羟基-3-[(1-异丙基)氨基]丙氧基]苯甲醛（杂质I）峰，酒石酸美托洛尔峰与杂质I峰的分离度应大于10.0，理论板数按酒石酸美托洛尔峰计算不低于3000。取对照溶液20

l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%。再精密量取供试品溶液和对照溶液各20

l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质Ⅰ保留时间一致的色谱峰，其峰面积乘以校正因子0.1后不得大于对照溶液主峰面积的0.6倍（0.3%）；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.6倍（0.3%）；各杂质峰面积的和（杂质I峰面积乘以校正因子0.1后计入）不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%）。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的色谱峰忽略不计。第88页,共181页，2024年2月25日，星期天89四、含量测定1.非水碱量法

本类药物的原料药大多用该法测定含量。氧烯洛尔片的含量测定也采用非水碱量法，为排除辅料的干扰，采用三氯甲烷提取主药，过滤后测定。第89页,共181页，2024年2月25日，星期天90氧烯洛尔片的含量测定：取本品30片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氧烯洛尔0.2g），置碘瓶中，精密加三氯甲烷50ml，振摇提取，滤过，精密量取续滤液25ml，置锥形瓶中，加二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显粉红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于26.52mg的C15H23NO3。第90页,共181页，2024年2月25日，星期天912.紫外分光光度法对照品法定量盐酸卡替洛尔滴眼液的含量测定：精密量取本品适量，用水定量稀释制成每1ml中约含盐酸卡替洛尔16

g的溶液，照紫外—可见分光光度法（附录IVA），在252nm的波长处测定吸光度；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含盐酸卡替洛尔16

g的溶液，同法测定，计算，即得。第91页,共181页，2024年2月25日，星期天923.高效液相色谱法阿替洛尔片的含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾6.8g，辛烷磺酸钠

1.3g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至3.0）—甲醇（70∶30）作为流动相；检测波长226nm。理论板数按阿替洛尔峰计算不低于2000。阿替洛尔峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。测定法

取本品20片（糖衣片应除去包衣），精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于阿替洛尔25mg），置100ml量瓶中，加流动相适量，超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20

l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿替洛尔对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。第92页,共181页，2024年2月25日，星期天93第四节苯并二氮杂䓬类药物的分析一、结构与性质1.基本结构与代表药物目前临床应用的1,4-苯并二氮杂䓬类药物为取代苯环与七元含氮杂环并合而成的有机药物，基本结构为：第93页,共181页，2024年2月25日，星期天94地西泮氯氮䓬第94页,共181页，2024年2月25日，星期天95奥沙西泮氯硝西泮第95页,共181页，2024年2月25日，星期天96三唑仑阿普唑仑第96页,共181页，2024年2月25日，星期天972.主要性质（1）弱碱性可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别或非水碱量法测定含量。第97页,共181页，2024年2月25日，星期天98（2）水解性（3）光谱特征第98页,共181页，2024年2月25日，星期天99二、鉴别试验1.化学鉴别法（1）沉淀反应氯氮䓬的鉴别：取本品约10mg，加盐酸溶液（9→1000）10ml溶解后，加碘化铋钾试液1滴，即生成橙红色沉淀。第99页,共181页，2024年2月25日，星期天100阿普唑仑的鉴别：取本品约5mg，加盐酸溶液（9→1000）2ml溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试液1滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液1滴，即生成橙红色沉淀。第100页,共181页，2024年2月25日，星期天101（2）水解后呈芳香第一胺反应

适用于氯氮䓬、奥沙西泮，地西泮无此反应。氯氮䓬的鉴别：取本品约10mg，加盐酸溶液（1→2）15ml，缓缓煮沸15min，放冷；溶液显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）。第101页,共181页，2024年2月25日，星期天102（3）硫酸-荧光反应地西泮的鉴别：取本品约10mg，加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外灯（365nm）下检视，显黄绿色荧光。

艾司唑仑——天蓝色第102页,共181页，2024年2月25日，星期天103地西泮的鉴别：取本品20mg，照氧瓶燃烧法（附录ⅦC）进行有机破坏，以5%氢氧化钠溶液5ml为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸2分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录Ⅲ）。（4）分解产物的反应第103页,共181页，2024年2月25日，星期天1042.光谱法3.色谱法三、有关物质的检查HPLC法四、含量测定原料药：非水碱量法制剂：紫外分光光度法

高效液相色谱法第104页,共181页，2024年2月25日，星期天105第五节吡啶类药物的分析一、结构与性质1.基本结构与代表药物吡啶类药物均含吡啶环，基本结构为：第105页,共181页，2024年2月25日，星期天106尼可刹米异烟肼酰肼基酰氨基第106页,共181页，2024年2月25日，星期天107硝苯地平甲酸甲酯第107页,共181页，2024年2月25日，星期天108（1）吡啶环1）弱碱性pKb＝8.8，非水碱量法与生物碱沉淀试剂生成沉淀2）开环反应戊烯二醛反应二硝基氯苯反应（二）性质第108页,共181页，2024年2月25日，星期天1093）与碱共热分解出吡啶臭味无水碳酸钠或吡啶母核吡啶臭味氢氧化钙，△

尼可刹米和异烟肼有此反应第109页,共181页，2024年2月25日，星期天110（2）二氢吡啶环1）还原性氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法测定含量2）不稳定性

易发生光化学歧化反应，其分析应避光操作，同时应检查引入的特殊杂质第110页,共181页，2024年2月25日，星期天111弱酸性1）酰肼基还原性缩合反应(与某些含羰基的试剂)2）酰胺基遇碱水解放出二乙胺↑3）硝基——有氧化性，可被还原为芳伯胺基（4）光谱特征（3）取代基第111页,共181页，2024年2月25日，星期天112二、鉴别试验1.吡啶环的开环反应适用范围：适用于吡啶环

位未取代，β或γ位被羧基衍生物取代者。（1）戊烯二醛反应吡啶环CNBr芳伯胺戊烯二醛衍生物硝苯地平？第112页,共181页，2024年2月25日，星期天113[O]红色联苯胺苯胺黄色第113页,共181页，2024年2月25日，星期天1142H2O戊烯二醛[O]第114页,共181页，2024年2月25日，星期天115第115页,共181页，2024年2月25日，星期天116尼可刹米Ch.P.（2010）【鉴别】（2）取本品1滴，加水

50ml，摇匀，分取2ml，加溴化氰试液2ml与2.5%苯胺溶液3ml，摇匀，溶液渐显黄色。第116页,共181页，2024年2月25日，星期天1172）二硝基氯苯反应条件：无水、加热、碱性吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯共热至熔融醇制氢氧化钾紫红色第117页,共181页，2024年2月25日，星期天118二硝基氯苯反应第118页,共181页，2024年2月25日，星期天119BP异烟肼注射液的鉴别：取本品适量（约相当于异烟肼25mg），加乙醇5ml，加硼砂0.1g及5％的2,4-二硝基氯苯乙醇溶液5ml，水浴蒸干，继续加热10min，残渣加甲醇10ml搅拌溶解后，即显紫红色。第119页,共181页，2024年2月25日，星期天120（2）沉淀反应2.尼可刹米3.异烟肼氯化汞白色沉淀1.尼可刹米硫酸铜硫氰酸铵草绿色配位

化合物沉淀第120页,共181页，2024年2月25日，星期天1212.二氢吡啶的解离反应二氢吡啶类药物（硝苯地平）丙酮或甲醇溶解

氢氧化钠溶液橙红色第121页,共181页，2024年2月25日，星期天122硝苯地平

Ch.P.（2010）

取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氢氧化钠溶液3～5滴，振摇，溶液显橙红色。反应机制：二氢吡啶类药物与碱作用，1,4-位氢可发生解离,形成p-

共轭，发生颜色变化第122页,共181页，2024年2月25日，星期天1233.酰肼基团的反应（1）还原反应异烟肼黑色浑浊银镜气泡（N2）氨制硝酸银第123页,共181页，2024年2月25日，星期天124异烟肼Ch.P.（2010）

【鉴别】（2）取异烟肼约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1m1，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。第124页,共181页，2024年2月25日，星期天125缩合△2.缩合反应异烟肼+芳醛腙（测熔点）芳醛：香草醛、对二甲氨基苯甲醛、水杨醛第125页,共181页，2024年2月25日，星期天126第126页,共181页，2024年2月25日，星期天127异烟肼Ch.P.（2005）

【鉴别】（1）取本品约0.1g，加水5ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1m1，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结晶，在105℃干燥后，测定熔点，其熔点为228～231℃，熔融时同时分解。第127页,共181页，2024年2月25日，星期天128第128页,共181页，2024年2月25日，星期天129Ca(OH)2或NaCO3NaOH试液△尼可刹米二乙胺↑臭味碱性异烟肼尼可刹米吡啶（臭气）（1）水解反应（2）脱羧反应4.分解产物反应熔融第129页,共181页，2024年2月25日，星期天130尼可刹米Ch.P.（2010）【鉴别】（1）取本品10滴，加氢氧化钠试液3ml，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。第130页,共181页，2024年2月25日，星期天131BP硝苯地平的鉴别：取本品25mg，加10ml混合溶液（盐酸∶水∶乙醇=1.5∶3.5∶5），温热，加入锌粒0.5g，放置5min，滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（10g/L）5ml，放置2min，再加入氨基磺酸铵溶液（50g/L）2ml，摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即显红色（持续5min以上）。5.重氮化-偶合反应第131页,共181页，2024年2月25日，星期天1326.紫外光谱与红外光谱7.高效液相色谱法第132页,共181页，2024年2月25日，星期天1331.异烟肼中游离肼的检查杂质来源：原料残存、降解产生检查方法：TLC、灵敏度法三、特殊杂质检查第133页,共181页，2024年2月25日，星期天134异烟肼中游离肼的检查：取本品，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，作为供试品溶液；另取硫酸肼对照品，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释制成每1ml中约含0.08mg（相当于游离肼20µg）的溶液，作为对照品溶液；取异烟肼与硫酸肼各适量，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释制成每1ml中分别含异烟肼100mg及硫酸肼0.08mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-丙酮（3∶2）为展开剂，展开，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视。系统适用性试验溶液所显游离肼与异烟肼的斑点应完全分离，游离肼的Rf值约为0.75，异烟肼的Rf值约为0.56。在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。第134页,共181页，2024年2月25日，星期天135为什么查？检查方法？

HPLC法

外标法

不加校正因子的主成分自身对照法注意——避光操作2.有关物质第135页,共181页，2024年2月25日，星期天136四、含量测定1.氧化还原滴定法（1）溴酸钾滴定法异烟肼与溴酸钾反应的摩尔比为3∶2第136页,共181页，2024年2月25日，星期天137注射用异烟肼的含量测定：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取约0.2g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取25m1，加水50m1、盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mo1/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。每1ml的溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。(规格：0.1g)

第137页,共181页，2024年2月25日，星期天138取部分量滴定第138页,共181页，2024年2月25日，星期天139（2）溴量法异烟肼与溴反应的摩尔比为1∶2第139页,共181页，2024年2月25日，星期天140BP异烟肼注射液的含量测定：精密量取本品适量（约相当于异烟肼0.4g），加水稀释至250ml，摇匀。精密量取25ml，置具塞锥形瓶中，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾1g，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。第140页,共181页，2024年2月25日，星期天141剩余回滴法测定注射液的含量第141页,共181页，2024年2月25日，星期天142（3）铈量法原理：利用二氢吡啶类药物的还原性，与硫酸铈发生反应。硝苯地平与硫酸铈反应的摩尔比为1∶2第142页,共181页，2024年2月25日，星期天143硝苯地平的含量测定：取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50℃左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的C17H18N2O6。第143页,共181页，2024年2月25日，星期天1442.非水碱量法利用吡啶环的碱性尼可刹米的含量测定：取本品约0.15g，精密称定，加冰醋酸10ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于17.82mg的C10H14N2O。第144页,共181页，2024年2月25日，星期天1453.紫外分光光度法尼可刹米注射液的含量测定：用内容量移液管精密量取本品2ml，置200ml量瓶中，用0.5％硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加0.5％硫酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取适量，加0.5％硫酸溶液定量稀释成每1ml中约含尼可刹米20μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在263nm的波长处测定吸光度，按C10H14N2O的吸收系数（）为292计算，即得。第145页,共181页，2024年2月25日，星期天146“移液管”

停留15〃后移液管内剩余溶液为标示刻度外的体积“内容量移液管”

移液管内净体积为标示刻度内体积第146页,共181页，2024年2月25日，星期天1474.高效液相色谱法异烟肼的含量测定：照高效液相色谱法（附录VD）测定。色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH值至6.0）-甲醇（85∶15）为流动相；检测波长为262nm。理论板数按异烟肼峰计算不低于4000。测定法

取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取异烟肼对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。第147页,共181页，2024年2月25日，星期天148

1.基本结构与代表药物硫氮杂蒽母核第六节吩噻嗪类药物的分析一、结构与性质第148页,共181页，2024年2月25日，星期天149盐酸氯丙嗪第149页,共181页，2024年2月25日，星期天150盐酸异丙嗪第150页,共181页，2024年2月25日，星期天151第151页,共181页，2024年2月25日，星期天152第152页,共181页，2024年2月25日，星期天153奋乃静盐酸氟奋乃静第153页,共181页，2024年2月25日，星期天154癸氟奋乃静第154页,共181页，2024年2月25日，星期天155

（1）UV母核为三环共轭大π体系

204~209nm

(205nm)250~265nm（强）(254nm)300~325nm(300nm)2.性质第155页,共181页，2024年2月25日，星期天156（2）S原子为-2价，具有还原性，易氧化呈色吩噻嗪（二价，三个峰值）砜(六价，四个峰值)亚砜(四价，四个峰值)氧化剂：硫酸、硝酸、三氯化铁

及过氧化氢[O]第156页,共181页，2024年2月25日，星期天157氧化产物（砜及亚砜）有四个吸收峰，与母核吸收光谱有明显差异254nm第157页,共181页，2024年2月25日，星期天158第158页,共181页，2024年2月25日，星期天159吩噻嗪（负二价S

）有色络合物金属离子（3）易与金属离子络和呈色如钯离子比色法测定时，其氧化产物对测定无干扰。（4）弱碱性母核N几乎无碱性，但其10-取代基上的含N基团（脂烃胺基、哌啶基、哌嗪基），碱性较强第159页,共181页，2024年2月25日，星期天160二、鉴别试验1.UV与IR例盐酸氯丙嗪Ch.P.（2010）

【鉴别】（2）取本品，加盐酸溶液（9→1000）制成每1ml中约含5µg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在254nm与306nm的波长处有最大吸收，在254nm的波长处吸光度约为0.46。（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集391图）一致。第160页,共181页，2024年2月25日，星期天161[O]（硫酸、硝酸或过氧化氢）吩噻嗪呈色例盐酸氯丙嗪Ch.P.（2010）

【鉴别】（1）取本品约10mg，加水1ml溶解后，加硝酸5滴即显红色，渐变淡黄色。2.显色反应（1）氧化反应第161页,共181页，2024年2月25日，星期天162盐酸异丙嗪

Ch.P.（2010）【鉴别】（1）取本品约5mg，加硫酸5ml溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。（2）取本品约0.1g，加水3ml溶解后，加硝酸

1ml，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。第162页,共181页，2024年2月25日，星期天163癸氟奋乃静PdCl2红色只有未被氧化的药物才发生此反应（2）与钯离子络合显色第163页,共181页，2024年2月25日，星期天1643.分解产物的反应癸氟奋乃静的鉴别：取本品15～20mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在600℃炽灼15～20min，放冷，加水2ml使溶解，加盐酸溶液（1→2）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液0.5ml，应显黄色。4.色谱法第164页,共181页，2024年2月25日，星期天165三、有关物质的检查一般方法：

TLC法或HPLC法注意：

避光操作，溶液临用新配第165页,共181页，2024年2月25日，星期天166四、含量测定1.非水碱量法利用吩噻