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文档简介

任务三

粪大肠菌群测定项目七水样中生物指标测定

多管发酵法

一、方法原理

多管发酵法是以最可能数(MPN)来表示实验结果的，用概率来推算水体中大肠杆菌密度的最近似数值的一种方法。大肠菌群在乳糖蛋白胨培养基中生长繁殖，会分解乳糖产酸产气,使得溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色。44.5℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长,最后产气的为粪大肠菌群。通过查MPN表,得出粪大肠菌群浓度。

项目七水样中生物指标测定

二、试剂及仪器

（一）试剂及药品

（1）单倍乳糖蛋白胨培养基。

将蛋白质牛肉浸亮乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL水中,调节pH至7.2~7.4加人1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、充分混匀115℃高压蒸汽灭菌20min，避光干燥保存。

成分质量（g）成分体积（ml）蛋白质牛肉浸膏乳糖氯化钠103551.6％溴甲酚紫乙醇溶液项目七水样中生物指标测定（2）三倍乳糖蛋白陈培养液：按上述方法称取3倍培养基的营养成分的量，溶于1000mL水中,配成三倍乳糖蛋白胨培养基。（一）试剂及药品项目七水样中生物指标测定（3）EC培养基成分质量（g）成分质量（g）胰胨20磷酸氢二钾4乳糖5磷酸二氢钾1.5胆盐三号1.5氯化钠5将上述成分加热溶解于1000mL水中，115℃高压蒸汽灭菌20min，灭菌后pH应在6.9左右。（4）无菌水：取适量实验用水，1℃高压蒸汽灭菌20min，备用。（二）实验仪器

高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、试管、无菌刻度吸管或移液枪、采样瓶。三、操作步骤

（一）样品采集

采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，距水面10～15cm处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平前推。采好水样后，迅速扎上无菌包装纸。项目七水样中生物指标测定

（1）将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定样品接种量，不同种类样品的接种量见下表。（二）样品测定

项目七水样中生物指标测定

接种体积为10mL时，则使用三倍浓度乳糖蛋白胨培养基；接种体积≦1mL时，则使用单倍乳糖蛋白胨培养基。并同时准备一组空白对照。

（2）将接种过的水样和空白对照放入恒温培养箱，在37℃培养24h，若试管内培养基变黄、有气泡产生，则为阳性。

（3）取呈阳性的水样，用接种环转接到EC培养基中，30min内放入恒温培养箱。在44.5℃培养24h，若有气泡产生，则说明粪大肠杆菌呈阳性。

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