抗原抗体及其结合反应

关于抗原抗体及其结合反应

教学目的掌握：抗原抗体结合力、抗原抗体结合反应特点熟悉：影响抗原抗体结合反应的因素第2页,共37页，2024年2月25日，星期天第一节抗原一、抗原的特性免疫原性、免疫反应性特异性二、用于免疫测定的抗原分类天然、合成多肽、基因重组第3页,共37页，2024年2月25日，星期天第二节抗体一、抗体的特性特异性、多样性、免疫原性二、用于免疫测定的抗体分类多克隆、单克隆、基因工程三、抗体产生的规律初次应答、再次应答第4页,共37页，2024年2月25日，星期天第三节抗原抗体结合反应的原理抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。抗原表位与抗体高变区间的结构互补抗原表位与抗体高变区的紧密接触抗原抗体之间的结合力亲水胶体转化为疏水胶体物质基础第5页,共37页，2024年2月25日，星期天一、抗原抗体结合力静电引力范德华引力氢键疏水作用力抗原抗体结合力示意图第6页,共37页，2024年2月25日，星期天１.静电引力（electrostaticforces）抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力第7页,共37页，2024年2月25日，星期天2.范德华引力（VonderWaalsforces）

抗原和抗体相互接近时，由于分子的极化作用而出现的引力。

范德华引力<静电引力第8页,共37页，2024年2月25日，星期天3.氢键结合力供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力供氢体：羧基、氨基和羟基受氢体：羧基氧、羧基碳和肽键氢键具有高度的方向性第9页,共37页，2024年2月25日，星期天4.疏水作用力（疏水键）

两个疏水基团在水溶液中相接触时，由于对水分子排斥而趋向聚集力。第10页,共37页，2024年2月25日，星期天二、抗原抗体的亲和力和亲合力抗原抗体亲和力示意图第11页,共37页，2024年2月25日，星期天抗原抗体亲合力示意图第12页,共37页，2024年2月25日，星期天三、液相中抗原抗体的结合反应抗原抗体复合物

(疏水胶体)可见反应电解质

抗原

(亲水胶体)抗体﹢第13页,共37页，2024年2月25日，星期天四、固相表面抗原抗体的结合反应1.抗原抗体结合反应时间2.反应体积3.解离速度4.固相化抗原或抗体的构象第14页,共37页，2024年2月25日，星期天第四节抗原抗体结合反应的特点特异性可逆性比例性阶段性第15页,共37页，2024年2月25日，星期天

亲水胶体转化为疏水胶体示意图亲水胶体疏水胶体可见反应第16页,共37页，2024年2月25日，星期天一、特异性抗原抗体反应特异性示意图第17页,共37页，2024年2月25日，星期天特异性示意图第18页,共37页，2024年2月25日，星期天交叉反应（crossreactions）抗原抗体交叉反应示意图第19页,共37页，2024年2月25日，星期天二、可逆性可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性影响因素：抗体对相应抗原的亲合力环境因素对复合物的影响第20页,共37页，2024年2月25日，星期天

【Ag】+【Ab】【Ag-Ab】

解离后抗原抗体仍保持原有特性。一定条件：低pH、高浓度盐等。Ab1第21页,共37页，2024年2月25日，星期天比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系最适比：沉淀物最多时的抗原抗体的浓度比或量比等价带:

抗原与抗体分子比例合适范围前带：

抗体过量后带：

抗原过量三、比例性第22页,共37页，2024年2月25日，星期天

抗原抗体反应比例性示意图第23页,共37页，2024年2月25日，星期天四、阶段性第一阶段：特异性结合阶段第二阶段：反应可见阶段第24页,共37页，2024年2月25日，星期天第五节影响抗原抗体结合反应的因素抗原抗体本身因素反应基质因素实验环境因素第25页,共37页，2024年2月25日，星期天一、抗原抗体本身因素抗原:理化性状、表位种类和数目抗体:来源、特异性、亲和性、效价第26页,共37页，2024年2月25日，星期天来源R型Ab：等价带宽，易出现可见反应。H型Ab：等价带窄，易出现前带或后带McAb:不宜用于凝集和沉淀反应。浓度：是相对Ag而言，比例要合适，故实验前

需滴定，以求最适Ag与Ab比例。

特异性与亲和力：关键因素，选择特异性与亲和力高的Ab。第27页,共37页，2024年2月25日，星期天二、反应基质因素非特异性因素，如蛋白、盐、药物等第28页,共37页，2024年2月25日，星期天三、实验环境因素电解质:0.85%生理盐水或缓冲液酸碱度:pH6~8温度:37℃最适第29页,共37页，2024年2月25日，星期天(一）电解质作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%NaCl溶液，缓冲液、Ca2+、Mg2+等。第30页,共37页，2024年2月25日，星期天（二）酸碱度

抗原抗体反应中一般以pH6-8为宜，有补体参与的反应最适pH为7.2-7.4酸凝集：当pH为3左右时，接近细菌Ag的等电点，可出现非特异性凝集。第31页,共37页，2024年2月25日，星期天（三）温度

最适温度为37℃或室温18-25℃为宜。若温度高于56℃，可导致已结合了的抗原抗体复合物解离，甚至分子变性。第32页,共37页，2024年2月25日，星期天抗原抗体反应类型第33页,共37页，2024年2月25日，星期天第34页,共37页，2024年2月25日，星期天标记免疫技术用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析第35页,