豇豆抗煤霉病鉴定技术规程

豇豆抗煤霉病鉴定技术规程范围本文件规定了江西省豇豆对煤霉病抗性鉴定的试验设计、接种方法、病情调查、抗性评价和接种后材料的处理等技术要求。本文件适用于江西省豇豆对煤霉病的抗性鉴定。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T496肥料合理使用准则通则NY/T2118蔬菜育苗基质NY/T5079无公害食品豇豆生产技术规程术语和定义下列术语和定义适用于本文件。豇豆煤霉病cowpeasootyblotch指由半知菌亚门尾霉属菜豆尾孢(CercosporacruentaSacc.)侵染豇豆引起的一种真菌病害。接种体inoculums用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体的适当部位并使之发病的过程。病情级别diseaseratingscale人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。病情指数diseaseindex是全面考虑发病率和严重度两者的综合指标。病情指数按公式（1）计算：病情指数（ID）=Σ（各病级的株数×病级数）×100/调查总株数×最高病级数············（1）抗性评价evaluationofresistancelevels根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。耗材与仪器耗材本鉴定技术规程中使用耗材包括：豇豆壳、琼脂粉、葡萄糖、培养皿、烧杯、纱布、漏斗、三角瓶、营养钵等。仪器本鉴定技术规程中使用仪器包括：空调、显微镜、移液器、血球计数板、恒温培养箱、冰箱等。试验设计育苗每份材料选取健康饱满种子，用30℃左右的温水浸泡1～2小时，在25℃～28℃下催苗，待露白后播于营养钵中，每钵播种2粒，每份材料播种20粒，种子上覆盖1.5cm厚营养土，肥水管理按NY/T496和NY/T2118进行，幼苗出土前保持气温30℃～35℃，出土后控制气温25℃～30℃，当植株长至1.5m高时进行抗病性接种鉴定。鉴定对照材料选用当地历年易感煤霉病的豇豆品种作为对照感病材料，具体育苗管理参照5.1。接种方法病原菌的分离从江西露地栽培豇豆病株中采集典型病叶，迅速带回实验室进行分离纯化，通过回接试验确定为豇豆煤霉病菌，并经形态学鉴定为菜豆尾孢(CercosporacruentaSacc.)，转接至斜面上，置于培养箱中10℃保存备用。接种体制备将保存的豇豆煤霉病菌转出活化，置于豇豆壳汁培养基上28℃～30℃培养，7d后刮下菌丝块，在捣碎机上捣碎，双层纱布过滤，加入适量葡萄糖及无菌水制得孢子液，利用血球计数板计数，并调整其浓度至3×104个/mL，3h内完成接种试验。豇豆壳汁培养基的制备方法：称取60g豇豆壳用蒸馏水冲洗干净，适量去离子水中浸泡24h，捣碎机捣碎，55～60℃水浴1-2h，经2层纱布过滤，上清液补水至1L，加入琼脂粉15g，121℃高压蒸汽灭菌20min。人工接种当植株长至1.5m高左右时去掉顶部叶片进行接种。采用喷雾接种法接种，以豇豆叶面有水滴而又不会掉落为佳。把接种好的植株置于（28±2）℃、相对湿度100%的空调房内黑暗培养48h，然后每天光照14h，强度为35klx，保持空气湿度在80%以上，其他按照NY/T5079栽培管理进行。病情调查调查时间接种后15d进行病情调查。病情分级标准根据分级标准记载病情，分级标准的划分详见表1。表1豇豆煤霉病病情级别分级标准病情级别症状描述0级叶片无病症1级叶面积发病率≤5%3级5%<叶面积发病率≤25%5级25%<叶面积发病率≤50%7级50%<叶面积发病率≤75%9级75%<叶面积发病率病情记载按照表1所述植株的病情级别及其对应的症状描述，调查所有供试材料的发病情况，记载每份材料的病情级别，按公式（1）计算病情指数。豇豆抗煤霉病鉴定结果记载表格见表2。表2豇豆抗煤霉病鉴定结果记载表编号品种名称来源重复病情级别病情指数平均相对抗性指数抗病评价013579ⅠⅡⅢ注1：播种日期注2：接种日期注3：调查日期抗性评价鉴定有效性判别当鉴定试验中感病对照品种达到其相应感病程度（相对抗性指数≤0.5）时，该批次抗豇豆煤霉病鉴定视为有效。抗性评价一次鉴定结果不可作为最终鉴定结果，应根据3次或以上抗性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价，抗性级别以试验次数重复的相对抗性指数平均值作为其抗病性水平。抗性评价标准相对病情指数=IDm×100/IDCK相对抗性指数（RRI）=1-IDm/IDCK其中，m为供试种质资源。依据相对抗性指数来评价豇豆对煤霉病的抗性，共分为6个级别（见表3）。表3豇豆对煤霉病的抗性评价标准相对抗性指数（RRI）抗性评价英文缩写<0