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文档简介

岗位演练凝胶层析分离蛋白质混合物1任务八细胞色素C的凝胶层析查阅资料；检索蛋白质的分子量；理解凝胶层析法分离的原理查阅设计《凝胶层析分离蛋白质混合物操作记录》在任务实施过程中同步、如实填写。分离血红蛋白与鱼精蛋白混合物，获得血红蛋白溶液和鱼精蛋白溶液。设计目标设计（一）任务描述2（二）实训材料1.材料、试剂血红蛋白和鱼精蛋白混合物2.仪器设备铁架台、层析柱、胶管、交联葡聚糖凝胶G-50、恒流泵。3（三）实训操作4凝胶预处理装置组装装柱灌胶加样洗脱凝胶回收保温3h后，冷却至室温，抽真空30min排出气泡。待凝胶沉降后，用倾泻法除去不沉降的微粒。凝胶的预处理除泡和杂质自行溶胀：取SephadexG-50干凝胶30g，加蒸馏水800mL浸泡。加热至100℃，保温3h。凝胶溶胀5（三）实训操作装柱将层析柱垂直固定于铁架上，端柱头为适配器加蒸馏水至柱高度的一半。搅拌条件下，缓慢且均匀加入全部凝胶。胶床顶加满水，装入并拧紧适配器，制备凝胶床打开出水口，用洗脱液洗涤凝胶床，用量微2倍柱床体积。恒流泵流速为2mL/min。平衡6（三）实训操作7

加样滤膜过滤蛋白质混合物溶液以1mL/min泵入柱中洗脱泵入洗脱液（1mL/min）收集洗脱液，直至红色消失，合并洗脱液即为细胞色素C原液凝胶回收将洗净的凝胶回收，以便再次利用。注意：规范填写《细胞色素C的凝胶层析操作记录》，不可补填和篡改！（三）实训操作（四）任务分析与总结（1）根据血红蛋白和黄色的鱼精蛋白移动情况，参照两者分子量大小，总结说明一下凝胶层析法物质分离的原理及分子量与移动速度的关系。（2）本任务的凝胶层析是用于分组分离还是分级分离？请根据分离目的为该凝胶层析操作选取适当体积和径高比的层析柱（答案不唯一）。（3）凝胶层析法中全排阻分子、全渗透分子、部分渗透的较大分子和部分渗透的较小分子，从层析柱中流出的先后顺序是（

）。A.全排阻分子、部分渗透的较大分子、部分渗透的较小分子、全渗透分子B.全排阻分子、部分渗透的较大分子、全渗透分子、部分渗透的较小分子C.全渗透分子、部分渗透的较小分子、部分渗透的较大分子、全排阻分子D.全渗透分子、部分渗透的较大分子、部分渗透的较小分子、

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