2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修32

③意义：打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育新的作物类型。植物体细胞杂交技术①植物细胞融合完成的标志：杂种细胞再生出新的细胞壁。②植物体细胞杂交技术完成的标志：形成杂种植株。有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞呢？2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体动物细胞融合技术一、动物细胞融合技术1.概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.原理：细胞膜的流动性3.结果：形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞。4.融合方法：动物细胞没有细胞壁，可以直接诱导融合。与植物原生质体融合的方法相同物理法电融合法、离心法化学法聚乙二醇（PEG）融合法生物法灭活病毒诱导法（动物细胞融合特有）灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。P49细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布动物细胞融合完成的标志:细胞核的融合一、动物细胞融合技术5.意义：6.应用：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导方法结果7.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞物理法、化学法物理法、化学法、灭活病毒形成杂种植株形成杂交细胞1.抗体的早期生产方法向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。1.浆细胞产生抗体，每个浆细胞只能产生一种特异性抗体。2.浆细胞可以分泌抗体，但是不能无限增殖。3.抗体主要分布在血清中，在组织液及外分泌液液含有。缺点：产量低、纯度低、特异性差面临问题：要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的淋巴细胞，形成细胞群。在体外培养条件下，一个B淋巴细胞(高度分化的细胞)是不可能无限增殖的。二、单克隆抗体及其应用1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒设计了一个极富创造性的试验方案：米尔斯坦【英国】科勒【德国】抗体一种B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞分泌特异性抗体能在体外大量增殖能迅速大量增殖，能产生特异性抗体单克隆抗体由于发明了单克隆抗体的制备技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。二、单克隆抗体及其应用注射特定的抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合两两融合的细胞：BB、瘤瘤、B-瘤未融合的细胞：B、瘤

思考：不注射抗原，直接提取B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，能得到单克隆抗体吗？不能。能从该小鼠的脾中得到可以产生特定抗体的B淋巴细胞。实质是浆细胞思考：若只考虑细胞的两两融合，融合形成的细胞有几种？如何筛选？二、单克隆抗体及其应用2.单克隆抗体的制备过程第一次筛选（用特定的选择培养基）资料分析：1.细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。2.免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。3.鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死。--筛选杂交瘤细胞在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。第二次筛选（克隆化培养、抗体检测）--能产生所需抗体的杂交瘤细胞AB1、AB2、AB3……1.将杂交瘤细胞进行有限稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。2.用标记的抗原检测每个小孔上清液（抗原抗体能结合即为阳性孔）；3.阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次。多孔细胞培养板阳性孔二、单克隆抗体及其应用2.单克隆抗体的制备过程抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔内（体内培养）细胞培养液提取小鼠腹水中提取特异性强，灵敏度高，可大量制备。单克隆抗体易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低，规模小，产量少需要人为控制培养条件，成本相对较高二、单克隆抗体及其应用2.单克隆抗体的制备过程注射特定蛋白免疫小鼠培养小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞多种细胞多种杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞选择培养基克隆化培养抗体检测注射到小鼠腹腔内增殖体外培养单克隆抗体诱导融合单克隆抗体小结动物细胞融合动物细胞培养筛选1筛选2特异性强、灵敏度高、可大量制备细胞增殖细胞膜具有流动性既能大量繁殖又能产生专一抗体二、单克隆抗体及其应用3.应用：P50①作为诊断试剂：(最广泛的用途)②用于疾病的治疗和运载药物(主要用于癌症的治疗)1.ADC的抗体和药物各具有什么作用？2.除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？3.单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？抗体：通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞。药物：发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。①可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗；②一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗。①单克隆抗体：检测的特异性和灵敏度高；②ADC：靶点清楚、毒副作用小等优点【本节小结】一、概念检测1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要是为了获得细胞产品，后者主要是为了获得杂种植株2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（）

A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体CA二、拓展应用假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用这种技术来