创新斑马鱼技术在化妆品行业的应用-环特生物 -2022

创新斑马鱼技术助力化妆品产业让消费者选择更轻松V-2021/03/25HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.环特生物周示玉目录水中小白鼠认识斑马鱼研究价值技术体系斑马鱼技术服务体系应用价值为化妆品产业持续赋能环特简介十余年发展荣誉等身1234HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.01水中小白鼠认识斑马鱼技术的价值认识斑马鱼与人类基因同源性高达87%

；一种被誉为“水中小白鼠”的模式生物；常见的热带鱼，成体长4～6cm；胚胎24小时内发育成型，1天成长相当于鼠类8-10天；中国已是全球第2大斑马鱼研究大国。斑马鱼的生理、发育和代谢与哺乳类动物高度相似，能可靠模拟和预测人类生理、病理过程。高通量周期更短3R原则透明直观整体模式生物，与人类皮肤结构具有高度的相似性，且个体差异性较小，测试结果可重复性较高；可靠性高胚胎及幼鱼通体透明，显微镜下可直接观察多种组织器官变化，实验结果直观易懂；胚胎在24小时内就可发育成形，斑马鱼1天的发育程度相当于鼠类8～10天，实验周期更短、成本更低；雌性斑马鱼每次可产卵200枚左右，是目前唯一适于微孔板高通量筛选的脊椎动物，可以实现多个样品的同时筛选根据《欧盟动物保护法》，5天以内的斑马鱼胚胎和幼鱼由于自带卵黄囊，无须进食，因此不属于动物，符合3R原则。斑马鱼技术优势：与人体皮肤结构的强对应性皮肤结构斑马鱼皮肤结构对应人体皮肤结构主要功能表皮层及基底膜区保护层角质化上皮保护，抗菌因子微嵴层/支持角质层，促进分泌表面层颗粒层稳定，气体交换，防震中间层棘层粘液杯状细胞、分泌细胞、感觉细胞、未分化细胞基底层基底层附着在真皮、半小体上透明层透明层含有层粘连蛋白和整合素致密层致密层含有胶原蛋白半桥粒半桥粒将基底层连接到细胞外基底层细胞桥粒细胞桥粒与上皮细胞粘结侧线内耳毛细胞运动和振动的感觉器官真皮层生黑色素细胞生黑色素细胞色素沉着，防止紫外线辐射鳞屑头发保护、钙源血管血管输送血液，供应营养皮下组织脂肪细胞脂肪细胞隔热，储存热量，吸收创伤K：角质形成细胞；M：黏液细胞；C：杯状细胞；I：离子细胞绿色：内皮细胞；紫色：成纤维细胞；黑色、黄色和银色：色素细胞斑马鱼皮肤结构斑马鱼皮肤中色素细胞分布ChangWJ,HwangPP.Developmentofzebrafishepidermis[J].BirthDefectsResearchPartCEmbryoTodayReviews,2011.Cooper,CynthiaD.Insightsfromzebrafishonhumanpigmentcelldiseaseandreatment[J].DevelopmentalDynamics,2017.斑马鱼被美国国立卫生研究院列为第三大模式生物受到欧美食品药品监督管理部门认可，并通过GLP认证OECD认定斑马鱼胚胎毒性测试为评价化学品毒性最敏感的体内方法OECD和ISO共发布10+项斑马鱼化学品毒性检测标准斑马鱼技术是FDA，EPA、EURLECVAM等国际组织认可的检测技术；斑马鱼技术论文频频登上《Nature》《Science》等刊物斑马鱼技术是国际大公司的标配技术，如默克、强生等，用于产品技术开发斑马鱼技术受到国内外广泛认可斑马鱼技术受到国际广泛认可HJ1609-2019

水质急性毒性斑马鱼卵法ISO15088（2007）GB/T35515-2017化学品鱼类雌激素、雄激素和芳香酶抑制活性试验方法

OECD230（2009）GB/T35517-2017化学品鱼类生殖毒性短期试验方法

OECD229（2009）GB/T31270.12-2014化学农药环境安全评价试验准则第12部分：鱼类急性毒性试验GB/T27861-2011化学品鱼类急性毒性试验

OECD203（1992）GB/T21858-2008化学品生物富集半静态式鱼类试验

OECD305（1996）GB/T21854-2008化学品鱼类早期生活阶段毒性试验

OECD210（1992）GB/T21814-2008工业废水的试验方法鱼类急性毒性试验

JISK0102-71:1998GB/T21808-2008化学品鱼类延长毒性14天试验

OECD204（1984）GB/T21807-2008化学品鱼类胚胎和卵黄囊仔鱼阶段的短期毒性试验

OECD212（1998）GB/T21806-2008化学品鱼类幼体生长试验

OECD215（2000）GB/T21800-2008化学品生物富集流水式鱼类试验

OECD305（1996）GB/T21281-2007危险化学品鱼类急性毒性分级试验方法《全球化学品分类和标签协调手册》(GHS)GB/T13267-1991水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法

ISO7346-1～7346-3:1984斑马鱼评价毒性与安全性国际专著：Wiley，2012（其中9/10/11/17四章由环特首席科学家李春启博士执笔）斑马鱼技术作为一种全新评价方法的优势人体实验细胞实验/3D皮肤斑马鱼哺乳类动物实验周期短-√√-实验费用低--√-高通量-√√-高灵敏性-√√-应用范围广√√√-与人体的相关性高√-√√实验结果形象生动√-√√实验技术易推广--√-国家及行业标准√√/--√用“水中小白鼠”斑马鱼，代替人类试用，全面评价产品及成分的安全性和功效，是一种从传统体外试验向人体实验的有效过渡，并兼具前两者优点的一种新方法。1.斑马鱼发育、代谢与哺乳动物高度相似，基因与人类同源性达87%，能可靠模拟和预测人类生理与病理

(YuchenD.,

et

al.FrontiersinNeuroanatomy,2016)2.斑马鱼被科学界公认为是评价毒性最敏感的体内方法

(Pickering&Gast,1972;McKim,1977;vonWesternhagen,1988;Power,1997)斑马鱼技术在化妆品行业的标准化进程近年来，越来越多的化妆品头部企业、检测机构、社会团体都投入到斑马鱼在化妆品评价的标准化工作中，得益于行业的认可和支持。HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.02技术体系基于化妆品评价的技术体系斑马鱼技术安全评价体系的价值结构质量控制自检与市场抽检法规层面注册与备案检测品牌运营品牌方自我定位与社会责任获取消费者信任，保证长期稳定的品牌效应品牌运营工厂自检OEM/ODM交付品牌方市场监督部门随机抽检质量控制新原料：《化妆品新原料申报与评审指南》普通化妆品：特护化妆品：注册与备案检测《化妆品注册和备案检验工作规范》`安全评价体系类胰蛋白酶含量致敏性虹膜带宽/视动反应急性毒性皮肤中性粒细胞数量刺激性雌激素含量慢性毒性/雌激素LC50眼刺激性雌鱼卵巢变化、繁殖能力孕妇专类产品解决方案胚胎发育毒性婴童专类产品功效宣称的备案依据序号功效宣称人体实验室环特生物测试方案测试指标诱导条件测试结果应用场景1祛斑美白①√

1、美白功效测试1、黑色素抑制率/功效初筛2、酪氨酸酶活力2、酪氨酸酶活性抑制率/3、色素沉着功效3、色素沉着抑制率甲萘醌2防晒√

1、防晒功效1、紫外线损伤部位的防护效率UVB功效初筛3防脱发√

1、舒缓功效1、损伤部位炎症细胞的抑制率SLS功效初筛2、修护功效2、损伤部位恢复率断尾3、改善新陈代谢功效3、血流速的促进率/4祛痘√

1、祛痘功效测试1、炎症细胞的抑制率痤疮丙酸杆菌功效初筛5滋养②√

1、胶原蛋白再生功效1、胶原蛋白基因表达上调率/功效初筛2、补水保湿功效2、局部皮肤脱水面积抑制率氯化钠6修护②√

1、修护功效1、损伤部位恢复率断尾功效初筛2、舒缓功效2、损伤部位炎症细胞的抑制率断尾7抗皱**1、抗皱功效1、胶原蛋白基因表达上调率/功效宣称依据2、抗氧化功效2、氧化产物的荧光强度甲萘醌8紧致**1、紧致功效1、弹性蛋白基因表达上调率/功效宣称依据9舒缓**1、舒缓功效1、炎症细胞的抑制率SLS功效宣称依据2、舒缓神经功效2、总运动距离的降低率冰醋酸10去屑**1、去屑功效1、炎症细胞的抑制率马拉色菌功效宣称依据2、修护功效2、损伤部位恢复率断尾11保湿**1、补水保湿功效1、局部皮肤脱水面积抑制率氯化钠功效宣称依据12护发**1、舒缓功效1、炎症细胞的抑制率SLS功效宣称依据2、修护功效2、损伤部位恢复率断尾13宣称温和（无刺激）**1、温和无刺激功效1、炎症细胞迁移率/功效宣称依据2、安全性宣称功效2、斑马鱼胚胎半数存活率/功效评价技术体系美白祛斑功效机理：抑制黑色素抗氧化功效ROS清除率抗氧化功效减少色素沉着舒缓功效炎症细胞减少舒缓功效缓解刺痛感修护功效促进再生抗光老化功效皮肤皱缩改善微循环功效促进微血管扩张抗衰老功效Β-半乳糖苷酶活性补水保湿功效表皮细胞密度HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.03应用价值为化妆品产业持续赋能原料端原料功效验证，开发原料新的功效原料风险监控，控制原料毒副作用配方端配方筛选，原料处理技术优化，确保最优配方工艺风险控制，确保加工过程无毒副产生营销端视频/图文等实验素材可视化宣传支持鱼叔叔实验室自媒体矩阵联合推广政府项目、奖项联合申报产品端功能验证：为产品功效宣称提供科学依据风险控制：筛查产品中可能存在的毒副作用同类比对：确定产品优势定位1234斑马鱼技术在化妆品领域的应用价值覆盖从原料筛选、配方筛选、产品验证和营销服务等全产品生命周期的技术服务，为化妆品企业研发赋能，为消费者选择好产品提供可信赖的参考依据。时间YP01YP02YP0324h51.0／55.948h51.0230.455.972h50.8108.955.996h35.9104.629.6120h35.987.529.7玻尿酸护肤品对斑马鱼胚胎的LC50值（μL/mL）

根据OECD236标准，被测物的LC50＞100mg/L，可近似为0.1μL/mL，则可认为该物质安全；三种玻尿酸护肤品都是安全的，YP02样品最安全。斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料筛选评价指标：是否有致敏性，提供表型图及分析数据参考依据：专利号CN10334939B：一种斑马鱼类过敏检测模型的建立及其应用RuiYang,Qiao-Cong

Lao,

Hang-Ping

Yu,et.al.

Tween-80andImpurityInduceAnaphylactoidReactioninZebrafish.J.Appl.Toxicol，2015;35:295–301.DobsonJT,SeibertJ,TehEM,etal.CarboxypeptidaseA5identifiesanovelmastcelllineageinthezebrafishprovidingnewinsightintomastcellfatedetermination.Blood,2008,112(7):2969-2972.2号产品致敏试剂盒检测过敏反应检测肥大细胞脱颗粒产生的类胰蛋白酶，有效预测原料/产品致敏风险安全性评价：致敏性斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料筛选风靡一时的大麻类植物原料2021.05.26正式禁用10μg/mL全部死亡0.1μg/mL身体弯曲心包水肿静脉窦淤血肾性水肿斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料筛选美白原料的筛选：1、看安全性；2、看功效；3、可重复性；4、市场性价比。某间苯二酚类美白剂X某间苯二酚类美白剂XXX斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料筛选多肽成分活性协同增效斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料筛选多肽成分的紧致、抗皱功效乙酰基六肽-8复合多肽-1复合多肽-2棕榈酰二肽-7棕榈酰五肽-4原样棕榈酰五肽-4复配小分子HA+麦角硫因控制胶原蛋白表达的相关基因：col1a1b、col1a1a等控制弹性蛋白表达的相关基因：eln1、eln2等斑马鱼具有与人类相同的上述基因，并且具有相同的调控功能斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料筛查20%的原料添加量24%28%35%29%26%22%麦角硫因对斑马鱼ROS清除作用表型图超级抗氧化剂——麦角硫因的功效筛查斑马鱼技术在化妆品领域的应用：原料改性研究评价指标组别正常对照组0.0005%原样0.01%脂质体斑马鱼头部黑色素信号强度（像素）16831152356462842610534777954076355958476944053646976451739504975603505108440891666477530024807776901653556492708660805191642385953059507894911610731465359145413Mean643215135146654美白功效（%）/2027P<0.001<0.0010.0005%原样0.01%脂质体正常对照组美白化妆品原料脂质体包裹前后功效对比斑马鱼技术在化妆品领域的应用：技术营销(报告)某国货美妆品牌线上爆款（面膜产品）和某代餐领导品牌（口服美容产品）HANGZHOUHUNTERBIOTECHNOLOGY,INC.04环特简介十余年发展荣誉等身亚洲首家斑马鱼生物科技公司为三大行业（营养保健食品、化妆品、药物）提供功效及安全性评价等技术服务已通过AAALAC国际认证、国家CNAS认可、CMA资质认定牵头发布国内首批保健食品功效评价的斑马鱼检测团标2项荣获德国纽伦堡国际发明金奖、英国国际发明展金奖及杰出创新奖和中国发明协会发明创业奖项目奖金奖等多项发明类国