实验五、血液葡萄糖测定概论

实验五血液葡萄糖的测定（福林-吴宪氏法）一、实验目的1、掌握采用福林-吴宪氏法测定血液中葡萄糖的原理。2、熟悉分光光度计的使用。二、实验原理磷钼酸钼蓝（蓝色）C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5COOH+Cu2O↓3Cu2O+3H3PO4·2MoO3·12H2O6CuO+3H3PO4·Mo2O3·12H2ONa2CO3＋H2O＝NaOH+NaHCO3

NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4碱性铜试剂钼蓝溶液显蓝色，其蓝色的深浅与血滤液中葡萄糖的浓度成正比，选用颜色深浅较接近于测定管的标准管一同比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。血糖管的使用：血糖管下部的管径较细，以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。无蛋白血滤液的制备

多生化分析要避免蛋白质干扰，常常先将其中蛋白质除去；分析血液中许多成分时，也常常需要除去蛋白质，制成无蛋白质的血滤液。制备无蛋白血滤液的方法很多，可根据不同的需要加以选择。现将生化常用的无蛋白血滤液制备方法介绍如下：

钨酸法

原理：血液中的蛋白质在pH小于其等电点时，可用钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫酸钠，游离的钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性的钨酸蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即得无蛋白的血滤液。试剂：①10%钨酸钠溶液；②0.333mol／L硫酸溶液。仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、漏斗或离心管及离心机。方法与步骤：①取50ml锥形瓶1只，加入蒸馏水7份；②用奥氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解；③加入0.333mol／L硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置5～10min，使其酸化完全；④加入10％钨酸钠溶液1份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；⑤放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉淀，即得完全澄清的无蛋白血滤液，供测定用。用此法制得的无蛋白血滤液为10倍稀释的血滤液。即每毫升血滤液相当于全血0.ml，适用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的测定。三、实验步骤1、全血无蛋白滤液的制备抗凝血1ml蒸馏水7ml混匀1/3mol/L硫酸1ml振摇10%钨酸钠1ml振摇过滤放置5min无蛋白血滤液2、按表操作混匀，置沸水浴中煮8min。取出用流动自来水冷却3min无蛋白血滤液蒸馏水标准葡萄糖应用液碱性铜试剂空白管标准管测定管1.01.0-1.0-----2.02.02.0血糖管试剂ml磷钼酸试剂2.02.02.01：4磷钼酸溶液加至混匀后放置2min12.512.512.53、比色测定将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在420nm处测定吸收度。四、操作注意1、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准确8分钟。2、冷却时切不可摇动血糖管，以免还原的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。3、加入磷钼酸后迅速比色。4、分光光度计的使用。分光光度计的使用1、接通电源，打开比色皿盖，预热20-30分钟后，调节波长至所需波长。2、将盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放测定溶液。将比色皿盖盖上，此时空白溶液在光路上。将光点调到“T”，调节T为100%。3、将光点调到“A”，轻轻拉动比色架固定拉杆，使第二个比色皿溶液处在光路中，此时读数即为该溶液的吸收度。4、依次拉出第三、第四个比色皿，分别读取