维生素C含量测定方法

关于维生素C含量测定方法维生素C（VitaminC，AscorbicAcid）又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg维生素C。第2页,共33页，2024年2月25日，星期天胶原蛋白的合成：胶原蛋白的合成需要维生素C参加，治疗坏血病预防牙龈萎缩、出血：牙龈是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC时易产生牙龈萎缩、出血。预防动脉硬化：可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。抗氧化剂：可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。治疗贫血：使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。防癌：丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。保护作用：在人的生命活动中，谷胱甘肽和酶保证细胞的完整性和新陈代谢的正常进行至关重要。功效第3页,共33页，2024年2月25日，星期天酶：谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽，在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式，即氧化型和还原型，还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC是一种强抗氧化剂，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽，从而发挥抗氧化作用。提高人体的免疫力：白细胞含有丰富的VC，当机体感染时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力，提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成，提高机体对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋白的合成。提高CI补体酯酶活性，增加补体CI的产生。促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的增生。提高机体的应急能力：人体受到异常的刺激，如剧痛、寒冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。该状态伴有一系列身体，包括交感神经兴奋、肾上腺髓质和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来，在此过程需要VC的参与。功效第4页,共33页，2024年2月25日，星期天维生素C在抗病毒和预防病毒性传染病方面具有很高的应用价值。如果我们普遍认识到维生素C预防和治疗病毒传染病症的原理并且按量服用，就可以预防很多病毒的传播。第5页,共33页，2024年2月25日，星期天

目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。第6页,共33页，2024年2月25日，星期天测定方法滴定法测定维生素C

分光光度测定维生素C

高效液相色谱法测定维生素C

第7页,共33页，2024年2月25日，星期天2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量维生素C能还原2,6-二氯酚靛酚染料。维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素C第8页,共33页，2024年2月25日，星期天2，6-二氯靛酚法原理2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；无需另加指示剂。第9页,共33页，2024年2月25日，星期天取本品适量（约相当于Vc50mg），用适量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于Vc2mg）置50ml的锥形瓶中,加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫瑰红色,并持续5s不褪；空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。计算：(V-V0)×F×T×WW×标示量

标示量%=反应摩尔比１﹕１×100％测定方法第10页,共33页，2024年2月25日，星期天维生素C2,6-二氯酚靛酚维生素C2,6-二氯酚靛酚（还原型）（氧化型，粉红色）（氧化型）（还原型）++====2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。第11页,共33页，2024年2月25日，星期天碘量法原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VCEC6H6O6/C6H8O6=0.18,EI2/I-=0.535终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点反应式：

第12页,共33页，2024年2月25日，星期天注意！测定时：加HAC使溶液呈弱酸性

原因:(1)Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚(2)I2在碱性介质中会发生歧化反应加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差第13页,共33页，2024年2月25日，星期天电位滴定法原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.Pt为指示电极，甘汞作参比电极E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I-+k(常数)第14页,共33页，2024年2月25日，星期天电位滴定法右图：电位滴定法基本仪器装置计算式：(与碘量法相同)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%优点：解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题第15页,共33页，2024年2月25日，星期天2，4一二硝基苯肼分光光度法

原理：维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸反应式：

第16页,共33页，2024年2月25日，星期天pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸第17页,共33页，2024年2月25日，星期天脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎脎在500nm波长有最大吸收脎的结构：第18页,共33页，2024年2月25日，星期天分光光度法样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理500nm处测吸光度下图：721型分光光度计第19页,共33页，2024年2月25日，星期天

差示旋光法维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该制剂的含量第20页,共33页，2024年2月25日，星期天差示旋光法1）标准溶液的配制准确称取维生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的维生素C标准溶液。2）比旋光度与溶液pH值的关系量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得到维生素C溶液的pH及旋光度关系第21页,共33页，2024年2月25日，星期天差示旋光法选定pH为2.2和6.2第22页,共33页，2024年2月25日，星期天2）差示旋光度与溶液浓度关系吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(△a)。文献结果：线性方程为△a=0205*C+0．05，r=0．99643）辅料干扰试验取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。第23页,共33页，2024年2月25日，星期天4）稳定性试验同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。文献结果：差示旋光度基本不变5）回收率试验精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。文献结果：平均回收率为97.8％，变异系数cv为1.03％第24页,共33页，2024年2月25日，星期天6）样品测定取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。第25页,共33页，2024年2月25日，星期天薄层扫描法维生素C具有较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。

第26页,共33页，2024年2月25日，星期天（1）试纸的制备

2,6-二氯靛酚钠(DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。操作方法与结果第27页,共33页，2024年2月25日，星期天（2）缓冲溶液的配制

称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M氢氧化钠420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否则，用酸或碱调整pH值，保存于冰箱中。

3）扫描条件确定在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描，维生素C在290nm处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择

1=290nm，

2=420nm．双波长反射式锯齿扫描。第28页,共33页，2024年2月25日，星期天4）线性实验4.1）对照品溶液的配制精密称取维生素C标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。4.2）测定用5

l定量毛细管，分别吸取上述溶液各5

l，点于试纸上。点样后晾干，并将试纸固定在20cm×20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定△A的积分值(峰面积)作为纵坐标Y，点样量为横坐标X，得一直线方程Y=15692X+130225，r=0．9991

第29页,共33页，2024年2月25日，星期天5）样品的含量测定

取维生素C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用5

l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素