蛋白质的共价结构

关于蛋白质的共价结构蛋白质蛋白质是氨基酸以肽键连接在一起的线性序列。具有游离的氨基和游离的羧基第2页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质通论蛋白质的化学组成与分类蛋白质的分子性状与大小蛋白质构象和结构的组织层次蛋白质功能的多样性第3页,共109页，2024年2月25日，星期天第4页,共109页，2024年2月25日，星期天凯氏定氮原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。第5页,共109页，2024年2月25日，星期天第6页,共109页，2024年2月25日，星期天第7页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质的分子量蛋白质相对分子质量变化极大。单体蛋白质：一条多肽链构成（肌红蛋白和溶菌酶）寡聚蛋白质或多聚蛋白质：两条或多条多肽链构成。每条多肽链称为亚基或亚单位，亚基间通过非共价键结合第8页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质的构象蛋白质的三维结构被称为蛋白质的构象构型：具有相同结构式的立体异构体中取代基的空间取向，没有共价键的断裂，不同的构型不能互变。构象：具有相同结构式和相同构型的的分子在空间可能的多种形态，构象形态间的变化不涉及共价键的断裂。第9页,共109页，2024年2月25日，星期天

1952年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次:

primarystructure 一级结构：氨基酸序列

secondarystructure二级结构：α螺旋，β折叠

tertiarystructure 三级结构：所有原子空间位置

quanternarystructure四级结构：蛋白质多聚体

1969年正式将一级结构定义为氨基酸序列介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构（二级结构的组合）和结构域（在空间上相对独立）这两个层次。

蛋白质的结构层次第10页,共109页，2024年2月25日，星期天第11页,共109页，2024年2月25日，星期天第12页,共109页，2024年2月25日，星期天第13页,共109页，2024年2月25日，星期天二肽肽和肽键的结构肽的理化性质天然存在的活性肽第14页,共109页，2024年2月25日，星期天第15页,共109页，2024年2月25日，星期天概念二肽寡肽多肽氨基酸残基氨基酸残基与水分子的关系第16页,共109页，2024年2月25日，星期天肽链书写方法游离的ɑ-氨基在左边，游离的ɑ-羧基在右边，氨基酸间用“-”表示肽键三肽+H3N-丝氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-COO-，简写为Ser-Leu-PheSer-Gly-Tyr-Ala-LeuLeu-Ala-Tyr-Gly-Ser第17页,共109页，2024年2月25日，星期天第18页,共109页，2024年2月25日，星期天肽基的C、O和N原子间的共振相互作用共振产生的重要结果：

限制绕肽键的自由旋转

形成酰胺平面

产生键的平均化

肽键呈反式构型sp2sp2sp2sp3共振杂化体第19页,共109页，2024年2月25日，星期天第20页,共109页，2024年2月25日，星期天第21页,共109页，2024年2月25日，星期天肽的理化性质晶体熔点高酸碱性质取决于游离的氨基、游离的羧基以及侧链R-基上的可解离功能团第22页,共109页，2024年2月25日，星期天双缩脲反应肽和蛋白质特有的反应，氨基酸没有。含有一个或两个以上肽键的化合物与硫酸铜碱性溶液发生双缩脲反应，得到紫红色或蓝紫色复合物第23页,共109页，2024年2月25日，星期天双缩脲法的原理:双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物，这一反应称为双缩脲反应。因为蛋白质中有多个肽键，也能与铜离子发生双缩脲反应，且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律(光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目)，所以可用双缩脲法测定蛋白质的含量。

第24页,共109页，2024年2月25日，星期天双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是灵敏度差、所需样品量大。第25页,共109页，2024年2月25日，星期天天然存在的活性肽（activepeptide）具有特殊的生物学功能（多种人体代谢和生理调节功能），易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。

第26页,共109页，2024年2月25日，星期天大豆肽大豆肽是大豆蛋白质经酸法或酶法水解后分离、精制而得到的多肽混合物，以3～6个氨基酸组成的小分子肽为主，还含有少量大分子肽、游离氨基酸、糖类和无机盐等成分大豆肽的蛋白质含量为85％左右，其氨基酸组成与大豆蛋白质相同，必需氨基酸的平衡良好，含量丰富。与大豆蛋白相比，具有消化吸收率高、提供能量迅速、降低胆固醇、降血压和促进脂肪代谢的生理功能以及无豆腥味、无蛋白变性、酸性不沉淀、加热不凝固、易溶于水、流动性好等良好的加工性能，是优良的保健食品素材。第27页,共109页，2024年2月25日，星期天乳铁素B(牛乳铁蛋白活性肽)牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后得到的最重要的抗菌肽，具有较强抗菌活性.研究表明，乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为0.5mg/mL，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.4mg/mL；第28页,共109页，2024年2月25日，星期天葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素、硫酸铵在0～10mg/mL，乳糖、可溶性淀粉在0～4mg/mL的质量浓度范围内，对乳铁素B的抗菌活性影响不大；当NaCl或KCl的浓度为25～100mmol/L，MgCl2或CaCl2的浓度为1.0～5.0mmol/L时，乳铁素B的抗菌活性就会大大降低；随着缓冲盐浓度和有机酸浓度（25～100mmol/L）的增大，乳铁素B的抗菌活性呈下降趋势，在微碱性环境下乳铁素B表现出较强的抗菌活力.

第29页,共109页，2024年2月25日，星期天第30页,共109页，2024年2月25日，星期天谷胱甘肽的作用加强人体免疫系统的免疫活性,抗氧化剂和自由基清除剂机体内新陈代谢产生的许多自由基会损伤细胞膜，侵袭生命大分子，促进机体衰老，并诱发肿瘤或动脉粥样硬化的产生

调节其他抗氧化剂，保护身体免受疾病.中和解毒作用。GSH能与进入机体的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促其排出体外，起到中和解毒作用

第31页,共109页，2024年2月25日，星期天

谷胱甘肽有还原型（G-SH）和氧化型（G-S-S-G）两种形式，在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多数。谷胱甘肽还原酶催化两型间的互变。该酶的辅酶为磷酸糖旁路代谢提供的NADPH。

第32页,共109页，2024年2月25日，星期天由于还原型谷胱甘肽本身易受某些物质氧化，能够保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基不被如自由基等有害物质氧化，从而发挥其生理功能。第33页,共109页，2024年2月25日，星期天人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多，对保护红细胞膜上蛋白质的巯基处于还原状态，防止溶血具有重要意义，还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基等氧化而持续正常在发挥运输氧的能力。第34页,共109页，2024年2月25日，星期天红细胞中部分血红蛋白在过氧化氢等氧化剂的作用下，其中二价铁氧化为三价铁，使血红蛋白转变为高铁血红蛋白，从而失去了带氧能力。还原型谷胱甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。

第35页,共109页，2024年2月25日，星期天人工已研制开发出了谷胱甘肽药物，广泛应用于临床，除利用其巯基以螯合重金属、氟化物、芥子气等毒素中毒外，还用在肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白内障和视网膜疾病等，作为辅助治疗的药物第36页,共109页，2024年2月25日，星期天第37页,共109页，2024年2月25日，星期天历史上第一个被确定

氨基酸序列的蛋白质

胰岛素

insulin第38页,共109页，2024年2月25日，星期天胰岛素的历史第一个生化药物动物胰腺ß细胞分泌的一种激素,运输糖、氨基酸、K+；最小的蛋白质，由A链(21AA)和B(30AA)组成；1921年Banting&Best从胰腺中抽提出了有活性的胰岛素，1923年Banting&Macleod获Nobel医学奖；1943－53年，Sanger确定了牛胰岛素的一级结构，1958年获得Nobel化学奖；1981年，Berg（因DNA重组技术得奖）在大肠杆菌中表达了人胰岛素.第39页,共109页，2024年2月25日，星期天一级结构测定对样品的要求均一，纯度97%以上相对分子量已知第40页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质一级结构测定的步骤1、蛋白质的分离纯化

2、测定蛋白质分子中多肽链的数目3、亚基分离4、二硫键的拆分与保护5、分析每一多肽链的氨基酸组成6、鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基7、多种方法的部分水解8、测序9、重叠10、二硫键位置的确定一级结构测定策略蛋白质一级结构测定步骤第41页,共109页，2024年2月25日，星期天1.蛋白质的分离纯化（1）根据溶解度不同的方法盐析、等电点沉淀法、低温有机溶剂沉淀法（2）根据蛋白质分子大小不同的方法透析与超滤、凝胶过滤法（3）根据蛋白质带电性质进行分离的方法电泳、离子交换层析（4）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法

第42页,共109页，2024年2月25日，星期天透析——只用于除盐类和小分子杂质第43页,共109页，2024年2月25日，星期天第44页,共109页，2024年2月25日，星期天超过滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质加压蛋白质溶液半透膜支持膜的栅板超滤液第45页,共109页，2024年2月25日，星期天凝胶层析第46页,共109页，2024年2月25日，星期天第47页,共109页，2024年2月25日，星期天亲和层析法（afinitychromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合。第48页,共109页，2024年2月25日，星期天基本原理：蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离（Separation），提纯（Purification）和鉴定（Characterization）是生物化学中的重要的一部分，至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。第49页,共109页，2024年2月25日，星期天2、测定蛋白质分子中多肽链的数目

通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。第50页,共109页，2024年2月25日，星期天多肽链的拆分

由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).第51页,共109页，2024年2月25日，星期天4、二硫键的拆分与保护

几条多肽链通过二硫键交联在一起。可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的

-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。通过加入盐酸胍方法解离多肽链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。第52页,共109页，2024年2月25日，星期天

★巯基的保护④测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比；⑤分析多肽链的N-末端和C-末端

★末端氨基酸的测定：多肽链端基氨基酸分为两类，N-端氨基酸和C-端氨基酸。在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。末端氨基酸测定的主要方法有：第53页,共109页，2024年2月25日，星期天5、分析每一多肽链的氨基酸组成第54页,共109页，2024年2月25日，星期天N端的测定方法1、Sanger（二硝基氟苯）法2、丹磺酰氯法3、Edman法4、酶降解法第55页,共109页，2024年2月25日，星期天氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应

（sanger反应）DNFB（dinitrofiuorobenzene）DNP-AA(黄色)++HF弱碱中氨基酸第56页,共109页，2024年2月25日，星期天Sanger试剂(FDNB)标记N末端Sanger试剂标记反应第57页,共109页，2024年2月25日，星期天H2N—CH—COOH+

RNCH3CH3O=S=OCl5-二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）pH9.740℃NCH3CH3O=S=OHN—CH—COOH

RDNS-氨基酸取代DNFB测定蛋白质N端氨基酸，灵敏度高酰化反应第58页,共109页，2024年2月25日，星期天氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应

（Edman反应）PITC（phenylisothiocyanate）+苯乙内酰硫脲衍生物(PTH-AA)（phenylisothiohydantion-AA）弱硷中(400

C)(硝基甲烷400

C)H+第59页,共109页，2024年2月25日，星期天Edman降解法(I)DABITC:有色Edman试剂在Edman试剂上加发色基团Edman降解法1第60页,共109页，2024年2月25日，星期天Edman降解法(II)Edman降解法2第61页,共109页，2024年2月25日，星期天无冕英雄PehrVictorEdman

瑞典人,1916.4.14-1977.3.191946-47年在美国留学时想到改进1930年Abderhalden&Brockmann发明的

PITC试剂的反应,50年发明Edmandegradation反应.ActaChemScand4:283(1950)1957年移居墨尔本,远离国际学术中心开始过隐居生活,1967年研制的自动化仪器可以达到每小时一个氨基酸的速度;他坚持不申请专利,给了美国公司得以随便开发仪器的方便.1972年到德国,77年因脑瘤过世.第62页,共109页，2024年2月25日，星期天由于Edman降解产物需要在紫外域进行检测,只有HPLC和相应的紫外检测手段进步后才得到普及;60年代后期Moore&Stein利用该反应测定了RNase的一级结构,遗憾的是Edman没有和他们分享Nobel化学奖.第63页,共109页，2024年2月25日，星期天1、肼法2、还原法3、酶降解法C端的测定方法第64页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质与无水肼加热

-------NH-CH-CONH-CH-COOH

|

|

Rx

Ry

--+--+NH-CH-CONH-NH2

+

NH2-CH-COOH

|

|

Rx

Ry肼(hydrazine)法测定＋NH2NH2，100℃，5～10h溶于有机溶剂而被除去多种方法确定肼法C端测定第65页,共109页，2024年2月25日，星期天还原法碳末端氨基酸通过硼氢化锂还原为氨基醇，水解后氨基醇可以进行鉴别第66页,共109页，2024年2月25日，星期天羧肽酶法：

羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。第67页,共109页，2024年2月25日，星期天常用的羧肽酶羧肽酶A：释放除了Pro、Arg、Lys之外的所有C-末端残基羧肽酶B：仅能水解Arg、Lys为C-末端的氨基酸残基二者混用羧肽酶Y：作用于任何一个C-末端残基第68页,共109页，2024年2月25日，星期天二硫桥的断裂过甲酸氧化法巯基化合物还原法注意

1暴露二硫键

2保护巯基第69页,共109页，2024年2月25日，星期天使用的还原剂有巯基乙醇、巯基乙酸、二硫苏糖醇（DTT）

-巯基乙醇H0－CH2CH2－SH巯基保护剂：碘乙酰胺、碘乙酸、3－溴丙胺等。第70页,共109页，2024年2月25日，星期天氨基酸组成的分析方法：酸水解，辅以碱水解表达方法每摩尔蛋白质中含有的氨基酸残基的摩尔数

100克蛋白质中含有的氨基酸的克数。第71页,共109页，2024年2月25日，星期天

利用外切蛋白水解酶(exo-peptidase)将肽链的氨基酸从N端

(aminopeptidase)或C端

(carboxypeptidase)一个接一个游离出来，

在不同时间取样进行分析，根据所游离的氨基酸判断氨基酸的排列顺序。酶解法末端测序酶解法末端测序第72页,共109页，2024年2月25日，星期天常

用

的

酶胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）嗜热菌蛋白酶胃蛋白酶第73页,共109页，2024年2月25日，星期天胰蛋白酶肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，是特异性最强的蛋白酶，在测定蛋白质的氨基酸排列中，是不可缺少的工具。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量为23300，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。第74页,共109页，2024年2月25日，星期天胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）属于肽链内切酶，主要切断多肽链中的芳香族氨基酸残基的羧基一侧断裂点邻近的基团为碱性，断裂能力增强；酸性断裂能力减弱第75页,共109页，2024年2月25日，星期天胃蛋白酶胃蛋白酶在对蛋白或多肽进行剪切时，具有一定的氨基酸序列特异性。断裂点两侧的残基都是疏水性氨基酸胃蛋白酶在酸性环境中具有较高活性，其最适pH值约为3。在中性或碱性pH值的溶液中，胃蛋白酶会发生解链而丧失活性。常用来确定二硫键的位置

第76页,共109页，2024年2月25日，星期天肽键的专一性水解(化学法)化学法:CNBr,H+,NH2OH,etc化学法专一性水解第77页,共109页，2024年2月25日，星期天溴化氰水解法(CNBr):切割Met

的羧基所形成的肽键。用羟胺断裂:它断裂－Asn-Gly-,但专一性不高。蛋白质中出现机率低，适于分子量大的蛋白质序列的测定。第78页,共109页，2024年2月25日，星期天消化道内几种蛋白酶的专一性（Phe.Tyr.Trp）（Arg.Lys）（脂肪族）胰凝乳蛋白酶胃蛋白酶弹性蛋白酶羧肽酶胰蛋白酶氨肽酶羧肽酶（Phe.Trp）第79页,共109页，2024年2月25日，星期天氨基酸的鉴定、分离纯化PTH-AA氨基酸的确定第80页,共109页，2024年2月25日，星期天肽段在多肽链中次序的决定资料：N-末端残基H,C-末端残基S;第一套肽段第二套肽段OUS

SEOPS

WTOUEOVE

VERLRLA

APSHOWT

HO第81页,共109页，2024年2月25日，星期天借助重叠肽确定肽段次序：末端残基HS末端肽段HOWT

APS

或

OUS第一套肽段：HOWT

OUS

EOVE

RLA

PS第二套肽段：HO

WTOU

SEO

VERL

APS推断全序列:

HOWTOUSEOVERLAPS第82页,共109页，2024年2月25日，星期天第83页,共109页，2024年2月25日，星期天二硫键的断裂：几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。可以通过加入盐酸胍方法解离多肽链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。第84页,共109页，2024年2月25日，星期天胰岛素

-巯基乙醇碘乙酸二硫键的断裂第85页,共109页，2024年2月25日，星期天确定原多肽链重二硫键的位置：

一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将每个肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。第86页,共109页，2024年2月25日，星期天1、为防止Cys跟Cys-Cys发生交换反应，先将自由SH基封闭;2、进行专一性部分水解;3、纸层析分离水解产物;4、气相过甲酸法切断S-S键，作第二相纸层析;5、将迁移率发生变化的多肽进行测序经典的二硫键位置的确定法二硫键位置确定第87页,共109页，2024年2月25日，星期天点样。水解后的混合肽段点在滤纸中央，PH6.5，进行一向电泳，肽段分离开滤纸在甲酸蒸气中暴露断裂二硫键。含二硫键的肽段被氧化成一对含磺基丙氨酸的肽。滤纸转90度在与第一向相同的条件下，进行二向电泳肽斑用茚三酮显色确定第88页,共109页，2024年2月25日，星期天对角线电泳示意图第89页,共109页，2024年2月25日，星期天现用蛋白质一级

结构分析方法第90页,共109页，2024年2月25日，星期天分离纯化蛋白质酶切部分水解后分离短肽对短肽进行测序构建cDNA文库根据序列设计探针筛选cDNA文库根据cDNA序列推测蛋白质的一级结构第91页,共109页，2024年2月25日，星期天

N末端和C末端的测序除了用于未知蛋白质的一级结构的研究以外，最常用于基因工程表达产物的末端分析。末端测序的用途第92页,共109页，2024年2月25日，星期天常利用蛋白质数据库//www.espasy.ch/swissmod///////pdb/第93页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质氨基酸顺序与生物功能

研究蛋白质一级结构与功能的关系主要：研究多肽链中不同部位的残基与生物功能的关系。进行这方面的研究常用的方法有：同源蛋白质氨基酸顺序相似性分析、氨基酸残基的化学修饰及切割实验等。第94页,共109页，2024年2月25日，星期天例1镰刀形贫血病

患者血红细胞合成了一种不正常的血红蛋白（Hb-S）它与正常的血红蛋白（Hb-A）的差别：仅仅在于β链的N-末端第6位残基发生了变化（Hb-A）第6位残基是极性谷氨酸残基，（Hb-S）中换成了非极性的缬氨酸残基使血红蛋白细胞收缩成镰刀形，输氧能力下降，易发生溶血这说明了蛋白质分子结构与功能关系的高度统一性第95页,共109页，2024年2月25日，星期天蛋白质一级结构的个体差异第96页,共109页，2024年2月25日，星期天第97页,共109页，2024年2月25日，星期天例2一级结构的局部断裂与蛋白质的激活

体内的某些蛋白质分子初合成时，常带有抑制肽，呈无活性状态，称为蛋白质原.蛋白质原的部分肽链以特定的方式断裂后，才变为活性分子.例：胰岛素，在刚合成时，是一个比成熟的胰岛素分子大一倍多的单链多肽，称为前胰岛素原第98页,共109页，2024年2月25日，星期天前胰岛素原的N-末端有一段肽链，称为信号肽.信号肽被切去，剩下的是胰岛素原。胰岛素原比胰岛素分子多一段C肽，只有当C肽被切除后才成为有51个残基，分A、B两条链的胰岛素分子单体.第99页,共109页，2024年2月25日，星期天例3同源蛋白

同源蛋白：是指在不同有机体中实现同一功能的蛋白质.同源蛋白中的一级结构中有许多位置的氨基酸对所有种属来说都是相同的，称为不变残基；其他位置的氨基酸称可变残基.不同种属的可变残基有很大变化.可用于判断生物体间亲缘关系的远近.第100页,共109页，2024年2月25日，星期天例：细胞色素C60个物种中，有27个位置上的氨基酸残基完全不变，是维持其构象中发挥特有功能所必要的部位，属于不变残基.可变残基可能随着进化而变异，而且不同种属的细胞色素C氨基酸差异数与种属之间的亲缘关系相关。亲缘关系相近者，氨基酸差异少，反之则多（进化树）.第101页,共109页，2024年2月25日，星期天第102页,共109页，2024年2月25日，星期天黄色：不变残基（invariableresidues）蓝色：保守氨基酸（conservativeresidues）未标记：可变残基（variableresidues）第103页,共109页，2024年2月25日，星期天不同生物来源的细胞色素c中不变的AA残基

14106100134323029271817675952514845413887848280706891GlyGlyPheCysGlyGlyGlyArgLysGlyCysLysPheHisPro