《水产品中13 种邻苯二甲酸酯单酯的液相色谱-质谱 质谱检测方法》编制说明

-1-《水产品中13种邻苯二甲酸酯单酯的液相色谱-质谱/质谱检测方法》编制说明-2-品中13种邻苯二甲酸酯单酯的液相色谱-质谱/质谱检测方法》团体标准制定计开展与专业技术人员进行调研、交流，广泛征求标2024年3月根据在各单位反馈意见基础上，形成了标准征求意见稿并由中国国-3--串联质谱法测定。根据化合物的保留时间和特征离子峰本文件适用于水产品中邻苯二甲酸单甲酯（MMP）、邻苯二甲酸单乙酯90min。此过程结束后立即加入10mLACN：甲醇（MeOH5:5，v/v然后（2%FA，5:5，v/v）洗脱小柱，并于45°C下，使用氮1.0mLMeOH复溶，并用0.2萃取柱、固相萃取柱的活化、洗脱试剂以及-4-葡萄糖醛酸缀合物，这给MPAEs的直接提取带时间和pH等相关参数进行优化。当乙酸铵缓冲液的pH为6.5且酶解时间为90图2.1乙酸铵缓冲液的pH对去葡萄糖醛酸化效率的影响图2.2去葡萄糖醛酸化时间对提取效率的影响校准曲线中化合物的响应，评估表观回收率（Rapp）以选择最佳提取溶剂。结-5-较小提取溶剂，如EA和二氯甲烷（DCM）对目标物提取效果明显较差，同时这也说明MPAEs极性相对偏高。为提高MMP和MEP的提取效率，本标准用ACN和MeOH混合萃取以期取得较好的效果。达到95%和90%。因此，ACN:MeOH（5:5，v/v）被选为最优提取溶剂。同时图2.3提取溶液种类的优化图2.4ACN和MeOH混合提取溶液的比例优化积和超声提取时间进行了优化。结果显示，当混合提取溶剂的体积达到10mL时，整体目标物的提取效率相对较高，Rapp为72.6%~99.6%；且相对大体积溶-6-可能导致溶剂损失增加。考虑到更多溶剂损失和耗时的影响，分别选择10mL和20min作为最佳生物样品的提取溶剂体积和提取时间。图2.5提取溶液体积对提取效率的影响图2.6提取时间对提取效率的影响-7-MAXSPE柱是一种混合强阴离子交换柱，有利于弱酸干扰杂质的去除。相比之下，HLBSPE柱是一种通用的吸附柱，可广泛去除杂SPE柱，结果表明，PolySeryMAXSPE柱和Oas柱。本实验通过加标实验优化了生物样品复溶液的pH。结果表明，复溶液pH值达到10.5时（图2.7流出液中未检测到目标物，这意味着此时所有图2.7复溶溶液pH对提取效率的影响-8-图2.8洗脱溶剂对提取效率的影响图2.9洗脱液的酸度对提取效率的影响并对洗脱剂的体积进行了优化。当使用10mL2%-9-使用ACN和MeOH作为流动相时，灵敏度几乎没有明显差异。MeOH与ACNMPAEs结构和极性存在差异，利用梯度洗脱来实现最佳分离，并在梯度比例运行后，流动相A和流动相B在90:10此外，实验过程中对梯度洗脱程序最终调节时间（至少1.5min）进行优化，可表1液相色谱流动相线性梯度洗脱程序时间（min）流速（mL/min）流动相A(%)流动相B（%）00.35900.30.359010.352020.35903.50.3559540.359060.3590理想。选用WatersACQUITYUPLC®BEHPhenyl色谱柱，调节色谱条件后，分图10目标化合物标准工作溶液液相色谱-串联质谱色谱图质谱参数，确定最佳监测条件。13种邻苯二甲酸单酯及其内标物的多反应监测表3目标化合物的多反应监测条件化合物母离子(m/z)锥孔电压(V)子离子(m/z)碰撞电压(V)MMP77,107*MMP-D442MEP38MEP-D440MOP277.12MOP-D4281.146MiBP221.14077*,134.1MiBP-D4225.15280.9*,138.1MnBP221.177*,149.1MnBP-D4225.14671,81*MiNP291.248MiNP-D4295.248MCPP251.124MCPP-D4255.1102.9*,168.9MCHP247.14477,97*MCHP-D4251.15281,97*MBZP255.14277*,183.1MBZP-D4259.146MEHP277.138MEHP-D4281.25234,20MECPP307.140MECPP-D4311.130MEHHP293.1MEHHP-D4297.24MEOHP291.150MEOHP-D4295.148注：带*的为定量离子取一定量13种邻苯二甲酸单酯及其内标标准使用液于2mL进样瓶中，制的邻苯二甲酸单酯保留时间与标准样品中邻苯二甲酸单酯的保留时间相对标准Ksam=×100%..........Ksam—样品中邻苯二甲酸单酯定性离子的相对丰度，%；A2—样品中邻苯二甲酸单酯定性离子对的峰面积（或峰高Kstd=×100%............Kstd—标准溶液中邻苯二甲酸单酯定性离子的相对丰度，%；Astd2—标准溶液中邻苯二甲酸单酯定性离子对的峰面积（或峰高表4定性确认时相对离子丰度的最大允许偏差KstdKstd＞5020＜Kstd≤5010＜Kstd≤20Kstd≤10Ksam相对于Kstd的最大允许偏差±20%±25%±30%±50%该方法中标准工作溶液和样液中邻苯二甲酸单酯的响应值均应在仪器的检X=..................(3)X—样品中邻苯二甲酸单酯的含量(μg/LCi—样品制备液中邻苯二甲酸单酯的含量(μg/L表5方法的精密度和准确度MPAEs加标浓度5μg/kg加标浓度20μg/kg加标浓度80μg/kg平均回收率（%）RSD（%）平均回收率（%）RSD平均回收率RSDMMP98.97.53.592.95.3MEP95.898.691.85.7MiBP95.25.496.498.17.3MnBP97.13.396.02.691.07.8MCHP99.53.46.599.8MCPP99.85.995.09.797.87.2MBZP90.86.93.595.4MOP99.899.72.62.4MEHP99.398.96.694.85.2MiNP95.48.697.14.489.67.8MEOHP99.44.099.397.9MEHHPMECCP95.497.73.27.896.299.82.32.187.795.28.96.2对水产养殖生物进行加标回收实验，加标浓度分别为5μg/kg、20μg/kg和表6方法的检出限和定量限MAPEs相关系数基质效应检出限(μg/kg）定量限(μg/kg）MMP0.99790.990.882.93MEP0.99920.812.70MOP0.99970.930.230.78MiBP0.99900.41MnBP0.99940.990.31MiNP0.99980.210.69MCPP0.99950.53MCHP0.99950.180.62MBZP0.99700.930.51MEHP0.99960.990.170.58MECPP0.99870.070.24MEHHP0.99990.48MEOHP0.99990.080.27