血凝的基本知识

关于血凝的基本知识2024/3/30112024/3/3012血凝的基本知识血液凝固（凝血）：形态：血液由液体状态——凝胶状态。本质：纤维蛋白原——纤维蛋白。基本学说——凝血瀑布学说。第2页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3013凝血瀑布学说血液凝固是一系列凝血因子酶反应过程；每个凝血因子都被其前一因子所激活；最后激活凝血酶原生成凝血酶凝血酶使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，生成纤维蛋白凝块。第3页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3014血凝试剂的基本原理及临床应用凝血功能的一些检测手段常规筛选检测(检测凝血功能是否正常）PT——凝血酶原时间测定。APTT——活化部分凝血活酶时间测定。TT——凝血酶时间测定。●特殊物质检测（检测引起凝血功能异常的原因）纤维蛋白原测定纤维蛋白降解产物D－二聚体凝血因子检测发色底物测定（如蛋白C，蛋白S，等）第4页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3015血凝常规四项检测PT---凝血酶原时间测定APTT---活化部分凝血活酶时间测定TT---凝血酶时间测定FBG---纤维蛋白原测定第5页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3016PT测定PT试剂中主要含组织因子（TF）和ca离子，试剂中加入血浆后，TF和ca离子与血浆中Ⅶ因子，形成TF－Ⅶ－ca离子复合物，启动外源性凝血途径；最后使凝血酶原形成凝血酶，凝血酶可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白。纤维蛋白的交联，聚合成凝胶状态；血浆从流动状态变成凝固状态这个过程短时间内完成，可用仪器检测。这段时间即为凝血酶原时间PT，一般以秒表示。第6页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3017PT检测临床应用（2）

监控口服抗凝药病人的凝血功能口服抗凝药治疗时间比较长，治疗过程需要监控；剂量增加或减少，会引起出血或凝血；口服抗凝药治疗病人的治疗剂量，治疗时间由PT检测决定，一般要控制在INR2.0-3.0之间。第7页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3018INR－国际标准化比值

INR＝（正常人血浆PT平均值—每一实验室取20个以上正常人血浆测得的PT秒数平均值。

不能用质控血浆或参值作为正常人比血浆PT血浆PT平均值—不准确ISI－国际敏感指数第8页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/3019PT的ISI值

ISI——国际敏感指数ISI值是生产厂商生产的PT试剂与国际标准PT试剂测值相比的值，凡出厂的PT试剂必须标明其正确的ISI值。

若ISI＝1则表示该试剂敏感度与国际标准试剂值一致若ISI值越大，则表明该试剂越不敏感。第9页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30110各种ISI值的PT试剂ISI值试剂敏感度建议使用试剂ISI值1.0-1.2敏感如长岛液体PT试剂太平洋PT试剂DadeBehringPT试剂ISI值1.2-1.4比较敏感如库尔特PT试剂StagoPT试剂ISI值1.6以上不敏感不建议使用第10页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30111不同ISI值的PT试剂的INR计算举例

同一种标本，同一仪器，用不同ISI值试剂测定，INR值应相同。ISI值：1.02

在库尔特仪器上正常人平均值=11.8秒长岛液体PT异常病人标本测得PT值试剂＝39秒病人ISI值：1.36

在库尔特仪器上正常人

ACL平均PT值＝12秒库尔特原装异常病人标本测得PT值PT＝29.8秒试剂病人第11页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30112PST试剂ISI值正确标识的重要性国内有些试剂生产厂商，生产的PT试剂试剂ISI值只有1.8左右，甚至2.0以上，但他们提供给客户的ISI值却是1.22。举例：国内某公司生产的血凝试剂，正常人PT平均测值为12秒，测得口服抗凝药病人血浆PT＝22秒，标示的ISI值为1.22，而实际ISI却为1.8。计算：INR（标本值）＝

INR（标本值）＝☆PT结果不准确，会导致异常的病人有可能被认为正常；☆误导口服抗凝药病人用药，严重的会引起出血。实际INR》3.0应减少用药，但按标识的ISI值计算结果永远《3.0.第12页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30113第13页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30114部分厂商提供不真实ISI值的原因※原因：★技术水平达不到生产ISI<1.6的PT试剂，如标识真实ISI值（1.8)，试剂不能被市场接受。※后果：★误导用药，引起医疗事故。※建议：★对目前使用的国产PT试剂的ISI值进行简单的鉴别。第14页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30115鉴别PT试剂ISI值的简单方法用异常质控血浆鉴别PT试剂真实ISI值的简便方法PT的ISI值正常质控血浆异常质控血浆敏感性1.0-1.210.5-13.5(秒）30.0-44.0(秒）高1.2-1.410.5-13.5(秒）26.0-30.0(秒）较高1.4-1.610.5-13.5(秒）22.0-26.0(秒）中1.6以上10.5-13.5(秒)18.0-22.0(秒）低第15页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30116选择PT试剂的要点（1）※（敏感度）（ISI值）：ISI＝1.0-1.2最好ISI＝1.2-1.4一般ISI>1.6建议不予使用※对枸橼酸浓度不敏感（3.2%或3.8%）※对凝血因子的敏感第16页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30117选择PT试剂的要点（2）◆试剂的成分来源：重组组织因子（基因工程方法）最好如长岛液体PT试剂、DadeBehringPT试剂（Inovin)人胚胎组织：如DadeBehringPT试剂新鲜兔脑粉：如库尔特PT试剂、StagoPT试剂陈旧兔脑粉：大多数国产的PT冻干试剂（ISI>1.6)◆开瓶后的稳定性：长岛液体PT试剂：开瓶后，37℃，稳定30天以上。其他PT试剂：开瓶后，37℃,稳定8小时。第17页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30118PT检测的结果评估

美国CLIA-88提出PT指标的允许误差有国际标准，以INR表示;不同厂家根据自己的试剂给出一个正常范围，一般正常范围为：10.5-14.5秒；同一个标本用不同试剂，在同一仪器上检测，INR值应相同。PT总允许误（Tea）靶值±15%精密度（CV％)批内变异<2同一天批间变异<3天间变异<4第18页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30119APTT检测临床应用（2）

监控静脉滴注肝素抗凝治疗的病人的凝血功能临床上对静脉滴注肝素抗凝治疗的病人必须进行APTT检测以便监控。APTT的值应控制在1.5-2.5x基础秒数基础秒数---肝素治疗前的APTT秒数；不同的APTT试剂，对肝素敏感性不同，建议使用对肝素敏感的APTT—白陶土试剂。第19页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30120国内APTT白陶土试剂现状※国内市场（除长岛能提供液体型APTT白陶土试剂外）尚无稳定的APTT白陶土试剂。※长岛液体型APTT白陶土优势：对肝素敏感；非常稳定：常温保存，稳定30天以上；技术国际领先。第20页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30121不同APTT试剂，对肝素敏感性不同第21页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30122选择APTT试剂的要点对肝素的敏感性，对肝素越敏感越好－APTT白陶土首选；对凝血因子的敏感性；对LA－抗凝物的敏感性开瓶后的稳定性长岛液体型APTT白陶土试剂：37℃，30天以上；库尔特APTT试剂：37℃，3天左右；StagoAPTT试剂：37℃，3天左右。第22页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30123APTT检测的结果评估

美国CLIA-88提出APTT指标的允许误差没有国际标准；生产厂家根据自己的试剂给出一个正常范围值；各个厂家不同试剂的正常范围值均不相同；评价时，应以超过正常对照的10秒视为异常。APTT总允许误（Tea）靶值±15%

精密度（CV％）批内变异<3同一天批间变异<3天间变异<3第23页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30124凝血酶时间测定ThrombinTime（TT）ThrombinTime（TT）测定原理原理TT试剂（凝血酶）纤维蛋白原（血浆）纤维蛋白第24页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30125TT检测临床应用第25页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30126选择TT试剂的要点开平后的稳定型长岛液体TT试剂，37℃稳定30天以上建议使用长岛液体试剂，无需复溶，使用方便，测值稳定第26页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30127TT检测的结果评估没有国际标准生产厂家根据自己的试剂给出一个正常范围值检测时，试剂与血浆的比例，不同厂家，所加比例有所不同，正常值范围也不同，应以说明书为准第27页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30128纤维蛋白原测定Fibrinogen纤维蛋白原含量测定（Fib）的原理原理过量凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白凝固其凝固时间的长短与纤维蛋白原量呈反比关系第28页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30129纤维蛋白原含量测定（Fib）－直接法标准曲线制备取已知靶值纤维蛋白原参比血浆，用缓冲液稀释成不同浓度，测定各浓度的凝固时间。然后在双对数纸上作图，横坐标为浓度，纵坐标为凝固时间，应为一直线。样品测定1/10稀释血浆（1份血浆＋九份缓冲液）测得凝固时间，在曲线上从纵坐标上找出凝固时间，从此点画一平行于横坐标的直线与曲线相交，此交点垂直于横坐标的交点，此即为该样的Fib浓度。第29页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30130纤维蛋白原含量测定（Fib)--衍算法PT衍算Fib也称间接法测定Fib(Derived)。具体方法是，对标本进行PT测定的同时，即能得出Fib的含量。测定时不需用Fib的试剂（凝血酶试剂），只用PT试剂。

PT衍算Fib在测定前也需先定标，一般是用Fib含量准确性的质控血浆，用生理盐水进行稀释（如100%,75%，50%，25%）得到不同浓度的Fib的标准系列，再对其进行PT的凝固时间测定及△E（光密度变化）测定，然后把Fib浓度含量降低，其凝固的OD值也会降低，并呈线性相关，以此达到Fib定量的目的。第30页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30131有关PT衍算Fib应避免的误解：误区一：PT衍算Fib是通过PT结果“算”出来的。实际上是依据不同量Fib凝块光密度不同，而测定出来的。误区二：衍算时PT结果一定与法Fib含量相关。其实有的样本PT正常但Fib可能不正常，或者Fib正常的标本PT有可能不正常。误区三：PT衍算Fib方法简简便，准确。实际上，超过正常Fib含量的标本，误差很大。PT衍算法不准确，估算值，国外已淘汰第31页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30132选择Fib的要点标准曲线的相关性：

r>0.995开平后试剂的稳定型：长岛液体Fib试剂：37℃，稳定20天以上；其他国产Fib冻干粉试剂：37℃，稳定24小时。第32页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30133Fib检测的注意点尽量不用衍算法，不准确；标本中纤维蛋白原含量如超出所用所用试剂的线性范围，必须作适当的稀释后再进行测定，不然对结果影响较大。当血浆中有肝素或纤维蛋白降解产物（FDP）时，会导致测值偏低。第33页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30134第34页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30135Fib检测的结果评估

美国CLIA-88提出Fib指标的允许误差为血凝四项检测中的定量检测；有国际标准：WHO标准品98/612；可追溯性正常值范围：2-4g/L；美国临床实验室改进修正案CLIA-88允许误差范围为20%。Fib总允许误（Tea）靶值±15%精密度（CV％）批内变异<2同一天批间变异<3天间变异<4第35页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30136血凝试剂常见的问题APTT、PT延长及缩短TT延长Fib含量过高及过低第36页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30137标本的原因抗凝剂与血液比例不对，如大于1：9；抗凝剂配制错误，如枸橼酸钠含2个结晶水仍按3.8%配制；抗凝剂应用枸橼酸钠溶液，不能用干燥品，或其他抗凝剂；抗凝剂与血浆混合时摇匀过于剧烈，使凝血因子被破坏；血细胞比容积大于55%，抗凝剂比例没变（仍按1:9）；标本陈旧，超过2小时甚至更长；口服抗凝药或凝血因子异常；采血不顺利，有郁滞现象；标本运输未加盖，致使CO2升高PH升高；血浆分离应3000rpm，10分钟；临产妇FBG含量较高，可能会超过正常值；质控标本2-8℃超过8小时或失效;第37页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30138第38页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30139复溶用蒸馏水及材料的原因复溶蒸馏水质量差；未用塑料或硅化玻璃管；实验器材污染；仪器本身有问题，如灵敏度不够（仪器可用手工操作排除、或凝固终点不对（一般凝固终点在50%有时需根据试剂不同作相应调整到30%甚至20%。第39页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30140试剂本身的原因复溶后试剂反复使用。如整瓶复溶好的试剂放入预温槽预温，测试完成后，剩余放回冰箱。反复如此试剂在37℃的时间过长；复溶后试剂使用时间过长；试剂储存、运输温度过高，未注意冷藏运输。中间公司未换冰袋；试剂超过有效期；购入冒牌试剂；质控品过期第40页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30141操作的原因APTT、PT延长APTT试剂与标本预温少于3分钟，白陶土最好5分钟；APTT（白）是混浊液，加前未混匀；实验测试温度（标本、试剂）未预温至36.5-38℃的范围；PT血浆与试剂比例不对；试剂位误搅拌功能的血凝仪（CA-500）APTT要用鞣化酸；血凝仪能用半量的最好用半量否则试剂和血浆不易混匀；枪头和取液器之间要拧紧，不能有空隙。第41页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30142操作的原因（2）TT延长血浆与试剂比例不对；不同类别专用试剂参考正常值不同（DB专用为14-21秒，太平洋为8秒-14秒）；可能出现对应错误；试剂不应预温而预温时间较长。第42页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30143操作原因（3）Fib含量过高或过低换新试剂或新批号试剂未重新定标；虽然重新定标，但新定标曲线未输入仪器，原标准曲线未被修改。定标时，画标准曲线，横坐标浓度计算错误。第43页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30144Traceability（溯源性）的定义定义：溯源性是测量结果或标准的值通过连续的比较链与一定的参考标准相联系的属性，参考标准通常是国家或国际标准，比较链中的每一步比较都有给定的不确定度。第44页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30145溯源性－定量检验结果的描述溯源性主要用于定量检验结果的描述，不适用于定性检验结果。血凝四项中，只有Fib检测是定量检验，所以Fib检测具有溯源性。第45页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30146长岛Fib检测试剂的溯源性以WHO国际标准品编号98/612的纤维蛋白原标准品为参考，我们对长岛FIB试剂盒进行准确性研究实验。连续三批小量生产FIB试剂盒（批号：020708、020805、0208260），每批随机抽取一盒FIB试剂盒，利用CA-530血凝仪（日本Sysmex公司产品）测定WHO98/612纤维蛋白标准品的纤维蛋白原含量和，所得结果在WHO98/612纤维蛋白原标定含量的±10%范围内。第46页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30147对可追溯性理解的缪误部分人认为进口仪器一定要配原装试剂，才具有可追溯性－这其实是错误的理解。由于经济上或其他原因选择不配套的试剂，认为只要说明校准品的来源，经过实验标明该检测系统的不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、分析灵敏度、分析特异性、参考范围，就具备溯源性。第47页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30148第48页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30149长岛血凝试剂长岛公司生产的各类血凝仪专用试剂所组成的新的检测系统（原仪器、方法、检测程序加上长岛公司的试剂和标准品），对原系统进行校准，从而使病人样本的检测结果和原配套检测系统的病人样品结果具有可比性。第49页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30150长岛血凝试剂特点血凝四项（PT、APTT、TT、Fib）全套为液体试剂；测值稳定；PT试剂ISI值接近1.0;APTT白陶土－对肝素敏感；能提供各类全自动血凝仪配套试剂。第50页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30151全套液体试剂

长岛血凝四项试剂，全部为液体试剂液体试剂，无需复溶，避免了因复溶用水质量不合格及复溶体积不准确而造成的测定偏差；液体试剂，开瓶即用，免去复溶步骤，使得检测更为简便。第51页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30152出众的试剂稳定性长岛血凝试剂，采用专利稳定系统，拥有异常出众的稳定性。长岛液体PT试剂37℃30天以上长岛液体APTT试剂37℃30天以上长岛液体TT试剂37℃30天以上长岛Fib试剂37℃20天以上

试剂一经开启使用，无需再从试剂位拿出来放回冰箱，直到用完，测值非常稳定，使用极为简单。第52页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30153ISI值接近1.0的PT试剂长岛液体PT试剂，ISI值接近1.0；长岛PT试剂的成分来源为：重组组织因子（基因工程方法），技术国际领先。第53页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30154对肝素敏感的APTT白陶土试剂长岛液体APTT白陶土对肝素敏感；国内市场上唯一能提供稳定的液体APTT白陶土试剂的生产厂商。第54页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30155各类全自动血凝仪配套试剂-日本东亚CA

长岛提供日本东亚CA血凝仪专用试剂性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下)ISI值试剂成分来源长岛PT试剂液体30天以上1.02重组组织因子原装PT试剂冻干粉8小时1.04人胚胎组织性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下）长岛APTT鞣化酸试剂液体30天以上原装APTT鞣化酸试剂液体30天左右长岛TT试剂液体30天以上原装TT试剂冻干粉3天左右长岛Fib试剂液体20天以上原装Fib试剂冻干粉3天左右第55页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30156各类全自动血凝仪配套试剂-美国库尔特ACL

长岛提供美国库尔特ACL血凝仪专用试剂性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下）ISI值试剂成分来源长岛PT试剂液体30天以上1.02重组组织因子原装PT试剂冻干粉8小时1.36兔脑粉性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下)长岛APTT白陶土试剂液体30天以上原装APTT试剂冻干粉3天左右长岛TT试剂液体30天以上原装TT试剂冻干粉3天左右长岛Fib试剂液体20天以上原装Fib试剂冻干粉3天左右第56页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30157各类全自动血凝仪配套试剂-德国BE

长岛提供德国BE血凝仪专用试剂性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下）ISI值试剂成分来源长岛PT试剂液体30天以上1.02重组组织因子原装PT试剂冻干粉8小时1.1兔脑粉性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下）长岛APTT白陶土/鞣化酸试剂液体30天以上原装APTT试剂冻干粉3天左右长岛TT试剂液体30天以上原装TT试剂冻干粉3天左右长岛Fib试剂液体20天以上原装Fib试剂冻干粉3天左右第57页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30158各类全自动血凝仪配套试剂-法国思达高STA

长岛提供法国思达高STAGO血凝仪专用试剂性状开瓶，复溶后的稳定型（37℃条件下）ISI值试剂成分来源长岛PT试剂液体30天以上1.02重组组织因子原装PT试剂冻干粉8小时1.32兔脑粉性状开瓶，复溶后的稳定性（37℃条件下）长岛APTT白陶土试剂液体30天以上原装APTT试剂冻干粉3天左右长岛TT试剂液体30天以上原装TT试剂冻干粉3天左右长岛Fib试剂液体20天以上原装试剂冻干粉3天左右第58页,共62页，2024年2月25日，星期天2024/3/30159血凝仪