版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
摘要本次实验目的是利用MTT法来检测滑菇培养基菌丝与琥珀酸脱氢酶(SDH)活性之间的关系,从而推出滑菇培养基在不同酸碱度时的菌丝生物量。实验以滑菇5188菌种为实验材料,首先通过筛选找到合适的培养基配方和菌丝培养方法,其次将液体培养好的滑菇菌丝球分别称取0.05g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g利用MTT法检测出琥珀酸脱氢酶(SDH)与滑菇菌丝之间的标准曲线,以石灰(0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%)来调节固体培养基的酸碱度,然后以此曲线为标准得出滑菇固体培养基菌丝在不同酸碱条件下其菌丝生物量是否有变化。实验结果表明:石灰量为1%-3%的区间,菌丝生物量总体呈上升趋势,在石灰量为3%时达到最高。而当石灰量达到4%及以上时,菌丝生物量有所下降。所以,培养基石灰含量3%最适合菌丝生长。本次实验是为MTT法测定食用菌菌丝生物量提供理论参考。关键词:滑菇;MTT;菌丝生物量;琥珀酸脱氢酶 AbstractThepurposeofthisexperimentistousetheMTTmethodtodetecttherelationshipbetweenthemyceliumofthemushroommediumandtheactivityofsuccinatedehydrogenase(SDH),soastointroducethemycelialbiomassofthemushroommediumatdifferentpHlevels.Intheexperiment,5188strainsofslidingmushroomswereusedasexperimentalmaterials.First,thesuitablemediumformulationandmyceliumcultivationmethodwerefoundthroughscreening.Secondly,theliquidculturedslidingmushroommyceliumballswereweighed0.05g,0.1g,0.15g,0.2respectively.g,0.25g,0.3g,0.35g,0.4gusingtheMTTmethodtodetectthestandardcurvebetweensuccinatedehydrogenase(SDH)andthemushroomhyphae,withlime(0%,1%,2%,3%,4%,5%,6%)toadjustthepHofthesolidmedium,andthenusethiscurveasastandardtoobtainwhetherthemycelialbiomassofthemyceliaofthesolidmediumofthepleurotusostreatushaschangedunderdifferentacidandalkaliconditions.Theexperimentalresultsshowthat:intherangeof1%-3%oflime,themycelialbiomassgenerallyshowsanupwardtrend,reachingthehighestwhentheamountoflimeis3%.Whentheamountoflimereached4%andabove,themycelialbiomassdecreased.Therefore,themediumwithalimecontentof3%ismostsuitableformycelialgrowth.ThisexperimentistoprovideatheoreticalreferencefortheMTTmethodtodeterminethebiomassofediblefungusmycelium.Keywords:Pholiotanameko;MTT;Mycelialbiomass;Succinatedehydrogenase目录TOC\o"1-3"\h\u194971引言 MTT法检测滑菇培养基在不同酸碱度条件下菌丝生物量的研究1引言[1]中国具有非常悠久的食用菌栽培历史,现在食用菌是我国第五大种植农作物,并且还是世界食用菌最大生产国、出口国和消费国。伴随着食用菌的营养价值、化学成分、生物活性及其作用机制的不断发现,[2]它被营养学家推荐为十大健康食品之一。[2]中国农科院农业资源与农业区划研究所研究员,国家食用菌产业技术体系首席科学家张金霞认为:“食用菌是一种功能性食物它具有营养,美味,保健等几大特点,是我们饮食多样化的一种有益选择。”其中[3]滑菇(Pholiotanameko)(属于担子菌亚门(Basidiomycotina),伞菌目(Agaricales),丝膜菌科(Strophariaceae),鳞伞属(Pholiota),是一种冬、春季发生的菌盖粘滑的木腐菌,为人工主要栽培的食用菌之一。)是一种低热量、低脂肪的保健食品,它含有[4]氨基酸(15.78%)、粗脂肪(4%)、多量纤维素(10.13%)、以及多种矿物质元素,[5]能提高机体免疫功能,增进智力,改善视力,提高耐力等,还具[6]有降血压,[7]降低胆固醇的作用,而且[8]对于癌症和肿瘤有很好的抑制作用。[9]滑菇味道鲜美,口感极佳,具有滑、鲜、嫩、脆的特点,而且外观亮丽,表面呈淡黄色或黄褐色,成熟期为金黄色,边缘略淡,菌盖圆心较小,菌杆为柱形,菇体有小、中、大为丛生,因其表面含粘胶质,故而得名。[9]滑菇还是世界上五大人工栽培的食用菌之一,但是随着食用菌栽培技术不断的深入研究,[10]我们无法仅凭借肉眼来分辨和观察菌丝的生长状况,也无法用准确的数据来表达其生物量,通常只能以“菌丝浓密、稀疏、洁白、整齐”等非量化的词汇进行描述分析,却无法准确的用数据表达其生长状况,只能根据经验来判断菌丝的生长和成熟情况。[10]现如今研究菌丝生物量的检测方法大致有以下几种:1.DNA检测法(培养基会对菌丝生物量的测定产生干扰)2.ATP的测定(只能作为菌体量的粗略估计)3.免疫活性的测定(只能作为菌体量的粗略估计)4.几丁质分析法(这种方法过程复杂,检测时间超过24h)5.真菌麦角固醇法(不适用于固态培养的菌体量的测定)6.荧光素双醋酸盐染色法(会受到培养物的成分、环境等因素的影响,且不能以质量单位量化表示,也无法估测推断出结果的误差范围)7.胞外酶法(不适用于固态发酵)8.微生物活动代谢计量法(该方法相对不太准确)。为了能够准确、快速、简便的检测滑菇培养基在不同酸碱条件下菌丝生物量的变化,本次实验利用MTT法来检测滑菇液体培养基的菌丝生物量与琥珀酸脱氢酶(SDH)活性之间的关系,以此建立标准曲线,从而推算出滑菇固体培养基在不同酸碱条件下的菌丝生物量。[11]MTT(即“MTT法”,MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoli-umbromide,中文化学名3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,),是一种黄色染料,其原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶(SDH)能使外源性黄色的MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶--甲臢晶体(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞不产生琥珀酸脱氢酶(SDH),通过建立甲臢晶体生成量与活细胞数量的关系,从而获得活细胞数量的一种测量方法。在具体测量过程中,用二甲基亚砜(DMSO)溶解甲臢晶体,测量溶液在一定波长下的光吸度值,间接反映活细胞数量。通过研究表明,在一定细胞溶度范围内,光吸度值与活细胞数成正比。自MTT法建立以来,不断被改良具有以下[11]优势特点:1特异性强;2灵敏度高;3快速、准确、重复性好;4操作简便、节省材料、无同位素污染,便于实验室开展应用【19】。通过本次实验检测食用菌菌丝生物量参数,确定食用菌菌丝的琥珀酸脱氢酶(SDH)活性含量,进一步确定基质中食用菌菌丝的生物量。[10]一经检测确定可对相应培养模式或生长环境中的食用菌菌丝生物量进行长期、稳定的监测,这为MTT法测定食用菌菌丝生物量提供理论参考。2材料和方法2.1材料2.1.1供试菌种滑菇5188由福建省三明真菌研究所引进,由宁德师范学院生物实验中心食用菌研究室保藏。2.1.2主要实验原料土豆等均为市购。阔叶木屑、麦麸、石膏、石灰等购于福建省古田县食用菌辅料市场。2.1.3主要药品试剂5mg/mlMTT溶液、二甲基亚砜(DMSO)、葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨、蔗糖、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、维生素B1。2.1.4仪器设备MC电子天平(YP802N),上海天美科学仪器有限公司;立式自动压力蒸汽灭菌器,致微(厦门)仪器有限公司;生化培养箱(BSP-400),上海博迅实业有限公司;鼓风干燥箱(DHG-9070A),上海飞越实验仪器有限公司;超净工作台(SW--CJ--2D型),苏州净化设备有限公司;摇床(ZQTY-70S),上海知楚仪器有限公司;离心机(TGL-15B),上海安亭科学仪器厂;紫外可见分光度计(T6新世纪),北京普析通用仪器有限责任公司;海尔医用冷藏箱(HYC-356),青岛海尔特种电器有限公司;电热恒温水槽(DK-600型),上海飞越实验仪器有限公司;电磁炉;煮锅;酒精灯;打孔器;接种钩;镊子;玻璃棒;烧杯;培养皿;25*200试管;50ml离心管;250ml锥形瓶。2.2方法2.2.1培养基配方及制作本次实验设计三个培养基配方:固化(PDA)培养基、液体培养基、固体培养基。(1)固化(PDA)培养基配方及制作:表2-1[12]固化(PDA)培养基配方成分含量马铃薯(g)葡萄糖(g)琼脂粉(g)水(ml)20020201000制作步骤:①马铃薯洗净去皮后切成3-4cm的小块,再称取200g;②在煮锅中加入1000ml水,将水烧开后将土豆块放入锅中,边煮边搅拌,煮20-30分钟左右,能被玻璃棒戳破即可;③过滤(用八层纱布过滤);④将过滤的滤液加热(温火),加入琼脂20g,不断搅拌至完全溶解(注意大火时加入的琼脂会结块而溶解变慢或者不溶解);⑤加入葡萄糖20g,搅拌均匀;⑥冷却、定容,(加水定容至1000ml);⑦关火、分装;灭菌时,用500ml锥形瓶装,用于倒皿;试管培养基,直接封装好之后进行灭菌,标准是倾斜时培养基能达到试管的2/3处,塞上橡胶塞;⑧灭菌,灭菌是121℃,20min;⑨倒皿,一般在12-15ml,铺满培养皿底部即可放入超净工作台备用。(2)液体培养基配方及制作:表2-2[13]液体培养基配方成分含量的比例葡萄糖(%)七水硫酸镁(%)蛋白胨(%)磷酸二氢钾(%)维生素B1(%)40.080.20.050.008制作步骤:①将烧杯内加入500ml水,再依次加入葡萄糖20g、七水硫酸镁0.4g、蛋白胨1g、磷酸二氢钾0.25g、维生素B10.04g,搅拌至完全溶解;②取干燥洁净的250ml锥形瓶分装发酵液,每瓶装入100ml发酵液。在瓶口用封口膜封好并用橡皮筋捆好,再在封口膜外包上一层报纸并用橡皮筋捆好;③取张干净报纸包好打孔器(5mm)、镊子等接种器具;④一起放入高压灭菌锅中,121℃下灭菌20min;⑤将灭菌好的接种器具放入60℃的烘干箱烘干,并将灭菌好的发酵液冷却备用。(3)固体培养基配方及制作:表2-3固体培养基配方成分含量的比例配方木屑(%)麦麸(%)石膏(%)蔗糖(%)水(%)石灰(%)CK782011600177201160127620116023752011603474201160457320116056722011606制作步骤:①取20根25*200的试管洗净晾干备用;②将阔叶木屑、麦麸分别用粉碎机(40目)粉碎;③将木屑加入少量水预湿半小时,后加入麦麸、石膏、蔗糖搅拌均匀,再把石灰(利用石灰调节PH)溶于水倒入料中继续搅拌均匀,要使配料的含水量控制在60%;④一根试管共装入50g培养料,分(10g、20g、10g)三次将培养料装入规格25*200试管,用木棒捅实,要使每一根试管的装料高度和松紧度尽可能一致;⑤将装完管的固体培养基试管贴好标签,与包好的打孔器一起放入高压灭菌锅内121℃高压灭菌150min;⑥将灭菌后的固体培养基自然冷却备用,打孔器放入烘干机60℃烘干备用。2.2.2菌种的活化接种前需要先将滑菇5188食用菌种进行活化,将菌种从4℃的冰箱中取出,然后放入25℃恒温培养箱中或者放在室内常温活化24—48h。2.2.3接种及培养(1)固化(PDA)培养基的接种将已经倒好皿的培养基和接种仪器置于超净工作台,紫外灯照消毒30min,然后用滑菇5188菌种对培养基进行接种,用内直径为4mm的无菌打孔器,接种量为一个,接种时要注意应将其接在培养皿的正中央。将接完种的培养皿贴上标签置于25℃恒温培养箱中培养,15-18d左右备用。(2)液体培养基的接种将已经冷却好的的液体培养基和接种仪器置于超净工作台,紫外灯照消毒30min,然后用滑菇5188菌种对液体培养基进行接种,用内直径为5mm的无菌打孔器,接种量为3个,将接完种的锥形瓶贴上标签移入摇床中,在22℃,120rpm/min的摇床里培养,14d左右备用。(3)固体培养基的接种将冷却好的固体培养基试管以及已经灭菌的接种工具置于超净工作台,紫外灯照消毒30min,然后用滑菇5188食用菌,对每个不同pH的固体培养基进行接种,用内直径为8mm的无菌打孔器。接种量为一个要接种到各试管培养基正中央。共做7个处理,每个处理设置4个重复,将接种好的培养基贴上标签,置于25℃恒温避光培养约40d左右备用。2.2.4MTT的测定(1)液体培养基MTT测定:①分别取0.05g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g的菌丝球于无菌离心管中,加入5ML马铃薯葡萄糖液体培养基,再加入0.5mlMTT溶液,将这些离心管置于35℃水浴槽静置3h;②静置好后取出样品,放入离心机内3600rpm10分钟,弃上清液,加入5mlDMSO,摇匀,置于25℃水浴槽内静置3h;③静置好后取出样品放入离心机内3600rpm10分钟,取上清液在波长为570nm处测量吸光度值(盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可);④DMSO作为空白。(2)固体培养基MTT的测定:①取距离试管底部还有3-4cm的菌丝1g于50ml无菌离心管中;②加入5ml马铃薯葡萄糖液体培养基;加入0.5mlMTT溶液;③将这些离心管置于摇床230rpm/min,35℃,培养4h取出;④取出样品后,放入离心机内3600rpm10分钟;⑤弃上清液,加入8mlDMSO摇匀,再置于25℃水浴槽内静置3h;⑥静置好后取出样品放入离心机内3000rpm10分钟,取上清液在波长为570nm处测量吸光度值(盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可);⑦DMSO作为空白。2.2.5标准曲线的建立按照2.2.5(1)测量方法,对液体发酵培养液的菌丝进行标准曲线建立,以菌丝浓度为横坐标,对应的吸光值为纵坐标绘制标准曲线。2.2.6固体培养基酸碱度测量在固体培养基灭菌前后,要取4个不同位置的物料1g,加入5ml的去离子水,充分混合,静置10min用pH计测量酸碱度。2.2.7菌丝日均生长速度测量固体培养基菌丝每天生长速度采用直线测量法,并观察记录其长势。菌丝日均生长速度(mm∙d−1)=划线总长度mm/总划线天数(d)。2.2.8液体菌丝浓度的计算液体菌丝浓度(g/ml)=取样液体菌丝质量(g)/加入二甲基亚砜量(ml)。2.2.9菌丝量的测定与计算固体菌丝每天生长量式中:为固体菌丝每天生长量,为试管培养料体积,为试管菌丝每天生长长度,试管培养基总重量,为测定时采样重量(实验所采取样品为1g),为采样样品菌丝重量(单位为g),r为试管半径11.5mm(本试验所用试管规格25*200mm),π为圆周率3.14。2.2.10数据分析方法数据采用DPS7.05软件处理,统计方法为单因素方差分析,差异显著后进行LSD多重比较。3结果与分析3.1菌丝生物量标准曲线的建立实验结果表明:表3-1(DMSO=8ML)为不同菌丝浓度所对应的不同吸光值,从中所测得的OD值可知每g菌丝中的浓度,所以由此可知当菌丝浓度越高时,所对应的吸光值也越高。下图3-1、图3-2、图3-3、图3-4、图3-5为不同DMSO含量的标准曲线图,从图中可知菌丝浓度与琥珀酸脱氢酶(SDH)活性之间存在着良好的线性关系。下图3-4中二甲基亚砜(DMSO)的量为8ml时,菌丝浓度与琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的线性关系最好,相关系数大于0.9921。表3-1液体发酵的不同菌丝浓度及对应的吸光度菌丝/g重复1重复2重复3重复4吸光度平均值/Abs菌丝浓度g/ml0.050.2750.2530.2330.3310.2730.0060.10.4470.4140.4770.4550.448250.0130.150.7010.6980.7110.6960.70150.0190.20.8660.8940.8960.8620.87950.0250.250.9771.5040.8740.9721.081750.0310.31.5261.3031.2251.5471.400250.0380.351.8761.8351.7731.8021.82150.0440.42.7913.0642.9082.8212.8960.05图3-1DMSO=5ml对应标准曲线图图3-2DMSO=6ml对应标准曲线图图3-3DMSO=7ml对应标准曲线图图3-4DMSO=8ml对应标准曲线图图3-5DMSO=9ml对应标准曲线图3.2固体培养基酸碱度对菌丝活性的影响3.2.1固体培养基酸碱度从表3-2可以知道,在灭菌前,根据配方中石灰含量的不同,酸碱度也会有所不同。但灭菌后,酸碱度都有所降低。CK组与配方1、2、3、4、5、6灭菌前后的PH值明显不同,这就说明配方中加入不同含量的石灰能改变酸碱度,加入的石灰量越多,酸碱度则增大,而且灭菌前后的酸碱度也有差别。灭菌前的PH区间值为5.8-9.7,灭菌后的PH区间值为5.0-7.0。表3-2固体培养基酸碱度配方酸碱度重复1重复2重复3重复4平均值CK灭菌前5.855.815.865.825.835灭菌后75.055.0931灭菌前6.586.646.656.626.623灭菌后5.765.455.445.415.5152灭菌前7.87.677.737.747.735灭菌后5.855.845.815.785.8203灭菌前08.128.133灭菌后6.076.016.066.026.044灭菌前8.368.338.348.318.335灭菌后6.516.496.536.556.525灭菌前8.948.998.988.948.963灭菌后6.846.816.956.836.8586灭菌前9.669.699.729.759.705灭菌后67.037.0883.2.2固体培养基总质量从表3-3可知,从CK组与配方1、2、3、4、5、6可以看出培养基之间的总质量相差不大,其中CK组固体培养基总质量最多,配方2固体培养基总质量最少,两个之间相差1.078g。这就说明在配方中加入不同含量的石灰对固体培养基的总质量没有太大影响。培养基总质量从高到低为:CK组→配方6→配方1→配方5→配方3→配方4→配方2。表3-3固体培养基总质量(g)配方重复1重复2重复3重复4平均值Ck96.9697.8598.6697.9297.848197.3896.5898.3698.5497.715297.2697.2495.3197.2796.77397.0697.4897.0698.3197.478496.5397.7696.3197.0396.908596.6297.4498.6597.997.653697.3797.8397.5498.1597.7233.2.3固体培养基菌丝每天生长速度从表3-4可知,CK组与配方1、4、5、6呈极显著差异,CK组与配方3呈显著差异,CK组与配方2差异显著性不大,配方1与配方4差异显著性不大。由此证明了在培养基中加入不同石灰量对菌丝生长速度有所影响,而且培养基菌丝生长速度差距明显,其中配方3的菌丝生长速度最好为3.475(mm∙d−1),较CK组增长了0.15(mm∙d−1);配方6菌丝生长速度最差为2.490(mm∙d−1),较CK组降低了0.835(mm∙d−1),较配方3降低了0.985(mm∙d−1)。这说明了滑菇在石灰含量为3%,PH为6.0时菌丝生长速度最好。当石灰量为6%,PH为7.0时菌丝生长速度最慢。所以并不是石灰含量越高,菌丝生长速度就会越快。从高到低为:配方3→CK组→配方2→配方1→配方4→配方5→配方6。表3-4不同酸碱度培养基菌丝生长速度菌丝生长速度(mm∙d−1)差异显著性配方重复1重复2重复3重复4平均值F0.05F0.01CK3.313.223.423.353.325±0.0835bAB12.872.942.892.912.9025±0.0299cC53.353.220±0.1023bB33.483.463.373.593.475±0.0904aA42.842.772.762.812.795±0.037cC52.662.682.642.532.628±0.067dD62.522.432.412.602.490±0.0876eD3.2.4固体培养基菌丝SDH活性从表3-5可知,CK组与配方1、2、3的差异显著性不大,与4、5、6呈极显著差异。其中配方3的菌丝SDH活性最好,为1.239较CK组高出0.07;配方6的菌丝SDH活性最差,为0.6908较CK组低了0.4782,又较配方3低了0.5842。所以配方3与配方6之间呈极显著差异。由此可知在配方中加入不同含量的石灰对菌丝SDH活性有所影响,所以滑菇固体培养基的石灰量为3%,PH为6.0时菌丝SDH活性最好,当石灰量为6%,PH为7.0时菌丝SDH活性最差。菌丝SDH活性从高到低为:配方3→CK组→配方1→配方2→配方4→配5→配方6。表3-5不同酸碱度培养基滑菇菌丝SDH活性(OD值)菌丝SDH活性(OD值)差异显著性配方重复1重复2重复3重复4平均值F0.05F0.01CK1.251.3021.0221.1021.169±0.1295abAB11.1131.1471.1210.9841.091±0.073bcABC21.0581.0311.1010.9831.043±0.0494cBCD31.2471.2551.3231.1291.239±0.0806aA40.940.921.051.020.983±0.0624cdCD50.8870.8180.9350.9260.8915±0.0532dD60.6950.7120.6250.7310.6908±0.0462eE3.2.5固体培养基每天菌丝生物量从表3-6可知,CK组与配方1、2、3呈显著差异,与配方4、5、6呈极显著差异,配方1与配方2之间差异不显著,配方4与配方5之间呈显著差异与配方6呈极显著差异。由此可知培养基中加入不同含量的石灰对菌丝日均生物量有较大的影响,其中菌丝生物量增长最好的是配方3,为0.3814(g∙d−1)较CK组增长了0.0376(g∙d−1)但两种配方菌丝生物量相差不大。增长最差的是配方6,为0.1439(g∙d−1),较CK组降低了0.1999(g∙d−1),较配方3相比降低了0.2375(g∙d−1)。菌丝生物量从高到低为:配方3→CK组→配方2→配方1→配方4→配方5→配方6。表3-6不同酸碱度培养基菌丝生物量菌丝生物量(g∙d−1)差异显著性配方重复1重复2重复3重复4平均值F0.05F0.01CK0.365520.374910.308860.326000.3438±0.0315bA10.280760.294710.287800.251800.2788±0.0189cB20.292180.280390.307540.285820.2915±0.0117cB30.383700.385790.395940.360090.3814±0.0152aA40.228900.220800.250620.249040.2373±0.0148dC50.201240.186810.216180.203410.2019±0.012eC60.145940.145350.123680.160780.1439±0.0153fD从表3-2、3-4、3-5、3-6发现不同石灰量对滑菇固体培养基的酸碱度、菌丝生长速度、菌丝SDH活性和菌丝生物量影响较大,而表3-2中发现不同石灰量对滑菇固体培养基总质量影响不大。其中从表3-4、3-5、3-6中可以看到配方3的菌丝生长速度、菌丝SDH活性和菌丝生物量是最好的,而配方6的菌丝生长速度、菌丝SDH活性和菌丝生物量最差,这就说明滑菇固体培养基最适PH值为6.0。4结论与讨论本次实验通过利用MTT法检测出琥珀酸脱氢酶(SDH)与滑菇液体培养基菌丝之间的关系,有此来建立标准曲线。然后以此曲线得出滑菇固体培养基菌丝在不同酸碱度条件下其菌丝生物量是否有变化。实验数据显示:滑菇液体培养基菌丝浓度与琥珀酸脱氢酶(SDH)活性之间存在着良好的线性关系,当DMSO=8时,相关系数大于0.9921,所以二甲基亚砜(DMSO)的量为8ml时最为合适。同时从表3-2、3-3、3-4、3-5、3-6可知,在固体培养基中加入不同含量的石灰会对培养基的酸碱度、菌丝生长速度、菌丝SDH活性和菌丝生物量有较大影响,而固体培养基中加入不同石灰量对滑菇固体培养基总质量影响不大。实验结果显示:通过每次1%的石灰量改变可以发现,在石灰量为1%-3%的区间,菌丝生物量总体呈上升趋势,在石灰量为3%时达到最高。而当石灰量达到4%及以上时,菌丝生物量有所下降,这表明了石灰量与菌丝生物量之间呈类二次函数关系。通过3%石灰量与CK组之间对比可发现,适量的石灰对菌丝生物量有明显提升。所以,培养基石灰含量3%最适合菌丝生长。而石灰含量3%所代表配方的PH值为6.0,则得出结论:PH值6.0时菌丝生物量最多也是菌丝最佳生长环境。也由此可知培养基石灰量增加越多时,滑菇菌丝生长速度、菌丝SDH活性和菌丝生物量并没有明显的增涨,反而下降,这也表明了培养基中石灰的含量并不是越多越好。本次实验表明了,MTT法是可用于检测食用菌菌丝生物量,[11]而且该方法不仅操作简便、节省材料、无同位素污染还便于实验室开展应用,现已广泛应用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等,但是MTT法在检测食用菌菌丝方面上应用的还是相对较少。希望能通过这次实验可以为MTT法测定食用菌菌丝生物量提供理论参考。参考文献[1]庄海宁,张劲松,冯涛,杨焱,冯杰.我国食用菌保健食品的发展现状与政策建议[J].食用菌学报,2015,22(03):85-91.[2]顾可飞,周昌艳,李晓贝.食用菌的营养价值及药用价值[J].食品工业,2017,38(10):228-231[3]陈晓宁,肖淑霞,林程,魏奇,江玉姬,钟咏汕,黄琳翔,褚秀丹.滑菇胞内多糖的提取及其抗氧化活性研究[J].热带作物学报,2018,39(03):600-605.[4]刘云派,刘小珍,吴莉宇.革质红菇营养成分分析[J].光谱实验室,2001(05):637-639.[5]蔡同一.对21世纪食品发展的展望.食品工业科技.2001,22(1):11~12[6]李秀康,戴晓梅,周正东等.食用菌的功能性成分与利用.农牧产品开发.2000,10:28~29[7]吴锦文.食用菌的医疗保健作用及发展趋势[J].中国食物与营养,2001(03):20-22.[8]吴疆.防癌抗癌的植物大军.药膳食疗研究.1997,3:43~45[9]姚星宇.滑菇营养成分及化学成分研究[D].昆明理工大学,2017.[10]余昌霞.DNA检测法评价基质中食用菌菌丝的相对生物量[D].上海海洋大学,2010.[11]李上标,裴淑艳,蒋超,马玉,郭忠.MTT比色法研究应用进展[J].西北民族大学学报(自然科学版),2013,34(03):68-73+91.[12]冮洁,李文静.滑菇菌丝体和子实体蛋白质营养价值的评价[J].食品科学,2013,34(21):321-324.[13]张福元,张淑芝.滑菇液体深浅层培养的研究[J].食用菌,1998(01):18-20.致谢光阴似箭,短短四年的读书生活在这个季节即将划上一个句号,而于我的人生却只是一个逗号,我将面对又一次征程的开始。在这四年的学习期间,我得到了许多老师、同学以及朋友的关怀和帮助。这一路走来也是收获满满,在这里我要向在这期间给予我支持、帮助和鼓励的人表示我最真诚的谢意。首先,我要感谢我的指导老师张维瑞老师,我不是您最出色的学生,而您却是我最尊敬的老师。您治学严谨,学识渊博,对学术的钻研精神和认真的工作态度,对我影响深刻,受益匪浅。授人以鱼不如授人以渔,张老师在论文的选题、构思、撰写和到最后的定稿,给了我悉心的指导和热情的帮助,经由您悉心的点拨,再经思考后的领悟,常常让我有“山重水复疑无路,柳暗花明又一村”。其次,我要感谢我的父母,感谢他们为我所做的一切,因为有他们的关爱和鼓励我才能安心学习顺利完成学业;我还要感谢16食科班的同学、315的舍友及实验室的小伙伴们,是你们在我失败时给我鼓励,在我彷徨时指引我方向。我将珍惜彼此的这份友谊,感谢宁师使我们相遇。最后,我要感谢生科院的领导老师们,在这学习期间是你们的悉心教导让我不仅学会了专业知识,同时也教会了我做的人道理,为步入社会打下坚实基础。感谢这四年的所有帮助过我,鼓励过我的人,使我收获满满。四年的时光总是转瞬即逝,又到了人生的转折点,我将铭记师长们的教诲,继续努力回报那些帮助过我的人。最后再次感谢张维瑞老师对论文的悉心指导,不足之处还请多多指教。
电脑无法识别U盘该怎么办HYPERLINK电脑无法识别U盘怎么办?打开我的电脑上单击右键,在快捷菜单里,选择“管理”,打开“计算机管理”窗口。在计算机管理窗口里,选择“存储”下面的“磁盘管理”,如果看得到没有盘符的U盘,那么在这个U盘上按鼠标右键,选择“更改驱动器名称和路径”选项,就打开了“更改……的驱动器号和路径”对话框。再点击“更改”按钮,打开“更改驱动器号和路径”的对话框,在“指定以下驱动器号”的右边下拉列表里,选择你希望分配给U盘的驱动器号,尽可能靠后选择,比如X、Y、Z,选择好后,单击确定按钮,回到上一次“更改……的驱动器号和路径”对话框窗口,再一次单击确定,就回到“计算机管理”窗口。至此,如果一切正常,就给U盘单独设置了一个长久使用的驱动器号,并却,不受虚拟驱动器的影响了。建议将U盘插到电脑上,看任务栏中是否显示图标,如果显示,在我的电脑点右键查看属性——高级——硬件——设备管理器——查看里面是否有问号的设备,在问号设备上点右键——更新驱动程序然后下一步——否暂时不连接到网络——下一步自动安装软件(推荐)就可以了另外:系统不认U盘的几种处理方法1.禁用主板usb设备。管理员在CMOS设置里将USB设备禁用,并且设置BIOS密码,这样U盘插到电脑上以后,电脑也不会识别。这种方法有它的局限性,就是不仅禁用了U盘,同时也禁用了其他的usb设备,比如usb鼠标,usb光驱等。所以这种方法管理员一般不会用,除非这台电脑非常重要,值得他舍弃掉整个usb总线的功能。但是这种屏蔽也可以破解,即便设置了密码。整个BIOS设置都存放在CMOS芯片里,而COMS的记忆作用是靠主板上的一个电容供电的。电容的电来源于主板电池,所以,只要把主板电池卸下来,用一根导线将原来装电池的地方正负极短接,瞬间就能清空整个CMOS设置,包括BIOS的密码。随后只需安回电池,自己重新设置一下CMOS,就可以使用usb设备了。(当然,这需要打开机箱,一般众目睽睽之下不大适用~~)2.修改注册表项,禁用usb移动存储设备。打开注册表文件,依次展开"HKEY_LOCAL_MACHINE\SYSTEM\CurrentControlSet\Services\usbehci”双击右面的“Start”键,把编辑窗口中的“数值数据”改为“4”,把基数选择为“十六进制”就可以了。改好后注销一下就可以看见效果了。为了防止别人用相同的方法来破解,我们可以删除或者改名注册表编辑器程序。提示:“Start”这个键是USB设备的工作开关,默认设置为“3”表示手动,“2”是表示自动,“4”是表示停用。3.在computermanagement里将removablestorage的使用权限禁止。computermanagement是一个windows管理组件,可以在控制面板——管理工具——计算机管理打开。在该工具窗口中storage——removablestorage——property中,general项,可以控制系统托盘是否显示security则可以管理移动存储设备的使用权限。在security中将普通用户的使用权限降低,就可以达到禁用u盘的目的。破解的方法也很简单,管理员降低普通用户移动存储设备的使用权限,但未必禁用computermanagement的使用权限。普通用户可以通过这个工具解除usb移动存储设备的使用权限限制。另外,值得一提的是,如果u盘插到电脑上后可以驱动,但是我的电脑里却没有盘符,很有可能是管理员改动了u盘的默认盘符,使得我的电脑不能识别。这种情况,可以在movablestorage中看到u盘驱动器。可以在u盘驱动器属性设置里为u盘重新分配一个盘符,再重新插拔一次u盘,就可以在我的电脑里看到u盘的盘符了。一、首先可以将该U盘换到别的机器上,看使用是否正常。如果排除了硬件损坏的可能,一般就是软件方面有问题。在WindowsXP+SP1操作系统下,有些USB2.0设备的确常常出现工作不稳定的问题,可以试试安装设备自带的USB2.0驱动程序。另外最好不要使用USB延长线,防止因为供电不足而造成不稳定现象。如果仍无效,可以在主板BIOS设定中,将USB接口强行设置为USB1.1传输速率。二、(适用于WIN98)启动计算机,进入主板BIOS设置,检查BIOS中USB的相关选项是否已经打开:OnChipUSB设定为Enabled;USBController设定为Enabled;PNPOSInstalled设定为Yes;AssignIRQForUSB设成Enabled。要正常使用USB设备首先要开启USB接口,在主板BIOS里可以进行此项工作,一般来说只需在BIOS中进入ChipsetFeatures设置,并将USBKeyborad/MouseLegacy选项设定为Enable,就能够保证在操作系统下使用USB键盘了。这些选项的作用是打开主板芯片组对USB设备的完全支持,为系统识别USB设备做准备工作。三、USB口接触不好处理办法:拔下,等十秒钟再插上USB口,使接触完好;五、闪存盘驱动程序没有安装完成(WIN98系统下)处理办法:鼠标点“我的电脑”,选择属性找到“通用串行总线”,删除其中的USBMASSSTORAGE项,再点击“刷新”,然后按照提示重新安装一次驱动程序。六、接其它USB设备(如扫描仪、打印机、数码相机)时可以正常使用,接优盘时闪指示灯不亮,不能够使用。1、检查优盘与电脑的联接是否正常,并换用其它USB接口测试。2、检查设备管理器,看是否出现”通用总线设备控制器”条目,如果没有,请将电脑主板BIOS中USB接口条目*激活(ENABLE)。3、如果电脑安装过其它类型USB设备,卸载该设备驱动程序,并首先安装优盘驱动程序。4、到其它电脑试用此优盘,确认是否优盘不良。七、启动型优盘在的电脑上无法实现启动,可能是主板型号不支持。如何判断一块主板是否支持闪存盘启动系统启动型优盘是采用模拟USB软驱和USB硬盘的方式启动电脑的。只要电脑主板支持USB设备启动,即BIOS的启动选项中有USB-FDD、USB-HDD或是其它类似的选项,就可以使用启动型优盘启动电脑。八、第一次在电脑上使用优盘,未出现提示发现新硬件的窗口,驱动程序无法安装的原因可能是:1、主板usbcontroller未启用解决办法:在电脑主板BIOS中启用此功能。2、usbcontroller已经启用但运行不正常解决办法:在设备管理器中删除”通用串行控制器”下的相关设备并刷新。3、优盘被电脑识别异常,在设备管理器中表现为带有黄色?或!的”其它设备”或“未知设备”。解决办法:删除此设备并刷新。九、大容量的U盘(例如兼具MP3播放器或录音功能的U盘)或移动硬盘在电脑上无法正常使用,虽然系统提示找到了未知的USB设备,但无法正确识别U盘或移动硬盘。原因可能是:1.USB接口供电不足:系统为每个USB接口分配了500mA的最大输出电流,一般的U盘只需要100mA的工作电流,因此在使用过程中不会出现什么问题。大多数移动硬盘所使用的是普通的2.5英寸硬盘,其工作电流介于500mA~1000mA之间,此时假如仅仅通过USB接口供电,当系统中并无其他USB设备时,那么还是可以勉强使用的,但如果电压不稳的话,就随时可能出现供电不足的问题。特别是使用支持USB2.0的移动硬盘时,情况最为严重。另外,如果你的笔记本电脑使用电池供电,那么USB接口所分配的电量就更小了。2.使用了外接的USB扩展卡:在笔记本电脑中使用USB2.0的U盘或移动硬盘时,如果笔记本电脑不支持USB2.0技术,一般必须通过PCMCIA卡转USB2.0的扩展卡来间接实现支持,这些扩展卡基本上都采用NEC公司的D720100AGMUSB控制芯片,少则提供两个USB2.0接口,多则提供五个USB2.0接口,对一般用户而言足够使用了。由于PCMICA接口提供的电源功率比板载USB接口要小,这样就会由于供电不足而导致移动硬盘工作的出现问题。解决方案:1.它从USB连接线上接移动硬盘的一端引出一根转接线,可以插入电脑背后的PS/2接口取电,这里可以比USB接口提供更大的电流输出。2.利用电源补偿线(也称“键盘取电线”),如果U盘或移动硬盘的包装盒中提供了选配的电源适配器,你就可以直接使用外接电源,这样就可以从根本上避免供电不足的情况发生了前置USB线接错。当主板上的USB线和机箱上的前置USB接口对应相接时把正负接反就会发生这类故障,这也是相当危险的,因为正负接反很可能会使得USB设备烧毁。所以尽量采用机箱后置的USB接口,也少用延长线.也可能是断口有问题,换个USB端口看下.USB接口电压不足。当把<ahref="mobileharddisk">移动硬盘</a>接在前置USB口上时就有可能发生系统无法识别出设备的故障。原因是<ahref="">移动硬盘</a>功率比较大要求电压相对比较严格,前置接口可能无法提供足够的电压,当然劣质的电源也可能会造成这个问题。解决方法是<ahref="">移动硬盘</a>不要接在前置USB接口上,更换劣质低功率的电源或尽量使用外接电源的硬盘盒,假如有条件的话。主板和系统的兼容性问题。呵呵这类故障中最著名的就是NF2主板与USB的兼容性问题。假如你是在NF2的主板上碰到这个问题的话,则可以先安装最新的nForce2专用USB2.0驱动和补丁、最新的主板补丁和操作系统补丁,还是不行的话尝试着刷新一下主板的BIOS一般都能解决。系统或BIOS问题。当你在BIOS或操作系统中禁用了USB时就会发生USB设备无法在系统中识别。解决方法是开启与USB设备相关的选项。就是开机按F2或DEL键,进入BIOS,把enableusbdevice选择enable。拔插要小心,读写时千万不可拔出,不然有可能烧毁芯片。XP中任务栏中多出USB设备的图标,打开该图标就会在列表中显示U盘设备,选择将该设备停用,然后你再拔出设备,这样会比较安全。
其实判断软件硬件问题很简单,在别的机器或换个系统试试就可以了.有些小的问题不妨先用专门软件格式化下.还有提醒大家WINDOWS下格式化时要选择FAT,不要选FAT32。
提示无法识别的USB设备维修
故障提示如图:
无法识别的USB设备:UnknownUSBDevice.很多人都遇到过的一个问题,所谓“无法识别”对于操作系统来说,或者是驱动程度有问题,或者是USB设备出现了问题,或者是计算机与USB设备连接出现了故障,解决问题的方法也是从这几处着手。
对于不同的设备会有不同的处理方法,了解USB设备正常工作需要的条件以及一些可能影响USB设备正常工作的因素,会有助于解决问题。
下面是保证USB设备可以正常工作的一些条件:(1)USB设备本身没有任何问题——可以通过在其它计算机上进行测试,保证能正常工作;(2)USB接口没有任何问题——可以通过连接其它的USB设备在此接口上进行测试;(3)USB设备的驱动程序已经正确安装,如果有详细说明书的USB设备,一定要仔细查看相应的说明文件,按照说明安装相应的驱动程序;Windows2000以后的操作系统以识别大部分的USB设备,Windows98以前的操作系统可以安装USB设备自带的驱动或者安装通用的USB设备驱动程序。下面是可能影响USB设备正常工作的一些情形:(1)USB设备已经出现了故障(同样的条件以前可以正常使用,现在出现了问题);(2)USB接口有问题,比如a.USB前置接口极性接反,这可能导致USB设备烧毁,所以一定要仔细看一下主板说明书,防止接错;b.接口电压不足,一些<ahref=".com/mobileharddisk">移动硬盘</a>常会有这样的问题,主机后面的USB接口往往会比前置USB接口更可靠一些;c.主板与操作系统兼容性有问题,安装最新的主板驱动程序可以最大程度地避免此类问题;d.Bios中禁止了USB设备,可能通过更改BI
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 山间步道石板施工方案
- 装修施工方案下载
- 2025年度不锈钢门禁系统集成与维护服务合同2篇
- 2025年度民房买卖合同(含合同解除程序)3篇
- 2024年财产分割协议
- 2025年节能门窗安装与节能减排合同范本3篇
- 2024年物联网解决方案定制合同
- 2025年度木材加工厂树木原材料供应合同3篇
- 2025年度校园餐饮服务与物业管理合作合同2篇
- 2024年超级计算中心施工合同
- 小学语文一年级上册看图写话练习(无答案)
- 建筑起重司索信号工共40页PPT课件
- 罗西尼亚那第二号,Rossiniana No.2;朱利亚尼,Mauro Giuliani(古典吉他谱)
- 小学英语单词大全(含中文翻译)
- 经颅多普勒超声(TCD)
- 激励约束考核实施细则
- 抽奖券模板(可修改)
- 高压蒸汽灭菌效果监测记录簿表(完整版)
- 编织密度自动计算
- 硝酸及液体硝酸铵生产行业风险分级管控体系实施指南
- 瑶医目诊图-望面诊病图解-目诊
评论
0/150
提交评论