中国东北部汉族人群SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇遗传变异及基因表达与冠心病关系的研究

中国东北部汉族人群SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇遗传变异及基因表达与冠心病关系的研究第一部分SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇单核苷酸多态性与冠心病发病风险及血脂水平的关系目的：探索SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇上的rs9346816、rs2221750、rs3127596、rs9364559、rs1367211、rs6415085、rs9347438及rs9355296位点与中国东北部汉族人群冠心病发病风险及血脂水平的关系。方法：本研究采用病例对照研究方法。病例组和对照组分别为551例和544例。研究人群均为中国东北部汉族人群，且个体间无血缘关系。病例组人群筛选自2009年~2012年在吉林大学第一医院二部心血管内科确诊并进行住院治疗的冠心病患者。选择同期在吉林大学第一医院体检中心健康体检的正常人群为对照组。采用SequenomMassArray系统对位于SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇上的rs9346816、rs2221750、rs3127596、rs9364559、rs1367211、rs6415085、rs9347438及rs9355296位点进行基因分型，同时收集研究对象的流行病学资料。采用SPSS16.0统计软件对一般资料、等位基因及基因型与冠心病关系、SNPs和冠心病危险因素的关联分析及不同基因型人群间血脂水平的关系；采用SHEsis软件分析单倍型与冠心病的关系；采用Haploview软件进行连锁不平衡分析。采用多元线性回归分析校正混杂因素对结果的影响。结果：1.病例组中吸烟人数高于对照组，并且病例组中患有高血压病、糖尿病患者人数均多于对照组，病例组患者血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)水平高于对照组，并且以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。2.校正混杂因素后，SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇上rs9364559位点基因型与等位基因在病例组和对照组人群中的分布仍存在显著性差异（X2=7.126,P=0.028；X2=4.436,P=0.039）。3.单倍体型分析结果显示7个位点组成的单倍型中GAAAGTG和GGAAGTG与冠心病发病风险相关（P<0.05），携带GAAAGTG单倍型人群冠心病的发病风险可能降低，但携带GGAAGTG单倍型人群冠心病的发病风险可能增高。由6个SNP位点构成的单倍型中有14种单倍型与冠心病的发病风险相关（P<0.05），其中8种单倍型可能增加冠心病的发病风险，6种单倍型可能降低冠心病的发病风险。由5个SNP位点构成的单倍型中有39种单倍型与冠心病的发病风险相关（P<0.05），其中21种单倍型可能增加冠心病的发病风险，18种单倍型可能降低冠心病的发病风险。由4个SNP位点构成的单倍型中有49种单倍型与冠心病的发病风险相关（P<0.05），其中22种单倍型可能增加冠心病的发病风险，27种单倍型可能降低冠心病的发病风险。由3个SNP位点构成的单倍型中有39种单倍型与冠心病的发病风险相关（P<0.05），其中19种单倍型可能增加冠心病的发病风险，20种单倍型可能降低冠心病的发病风险。由2个SNP位点构成的单倍型中有9种单倍型与冠心病的发病风险相关（P<0.05），其中3种单倍型可能增加冠心病的发病风险，6种单倍型可能降低冠心病的发病风险。4.位于SLC22A3基因上的rs9346816位点不同基因型间LDL-C、TC水平存在显著差异（P<0.05），LPA基因上的rs6415085位点不同基因型之间Lp(a)、LDL-C水平存在显著差异（P<0.05）。结论：1．吸烟、高血压病、糖尿病、血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)水平可能与冠心病发病风险相关。2.SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇与中国东北部汉族人群冠心病发病风险及血脂水平相关。3.在中国东北部汉族人群中位于LPA基因上的rs9364559位点可能参与冠心病的发生与发展。4.多个SNPs位点同时存在可能对冠心病发病风险有不同的影响。第二部分中国东北部汉族人群SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇mRNA表达水平与冠心病发病风险的关系目的：分析SLC22A3,LPAL2和LPA基因mRNA表达水平与冠心病发病风险的关系；阐述SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇遗传变异对mRNA表达水平的影响。方法：选择2012年在吉林大学第一医院二部心血管内科确诊并进行住院治疗的92例冠心病患者为病例组，选择同期在吉林大学第一医院二部心血管内科进行诊治的非冠心病患者32例为对照组。采用实时荧光定量PCR方法对SLC22A3,LPAL2和LPA基因mRNA的表达水平进行测定。分析病例组与对照组之间及携带不同基因型病例组人群间目的基因mRNA表达水平的差异。以上统计学分析均采用SPSS16.0软件。结果：1.病例组中吸烟、高血压病人数均高于对照组，病例组患者低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)水平高于对照组，并且以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。2.与对照组人群相比，冠心病患者外周血中LPA和SLC22A3基因mRNA的表达水平显著增高（P<0.05）；两组间外周血中LPAL2mRNA表达水平无显著差异（P>0.05）。rs9346816、rs2221750、rs3127596、rs9364559、rs1367211、rs6415085和rs9347438位点不同基因型患者外周血SLC22A3、LPAL2和LPAmRNA表达水平均无显著差异（P>0.05）。结论：1.外周血LPA和SLC22A3基因mRNA表达水平升高可能与中国东北部汉族人群冠心病的发病风险相关。2.染色体6q26-27区域SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇上rs9346816、rs2221750、rs3127596、rs9364559、rs1367211、rs6415085和rs9347438位点的多态性与冠心病患者外周血中SLC22A3、LPAL2、LPA基因mRNA的表达水平无关，因此，上述SNPs位点可能不是通过影响基因转录水平参与冠心病的发生。第三部分SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇蛋白表达与冠心病发病风险的关系目的：研究SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇蛋白表达与冠心病发病风险的关系；阐明SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇遗传变异对其相邻基因蛋白表达水平的影响。方法：选择2012年在吉林大学第一医院二部心血管内科确诊并进行住院治疗的55例冠心病患者为病例组，选择同期在吉林大学第一医院二部心血管内科进行健康体检的正常人15例为对照组。采用westernblot方法对外周血SLC22A3基因蛋白表达水平进行测定。用QuantityOne软件对蛋白表达进行半定量分析。采用SPSS16.0统计软件包进行统计学分析。结果：1.冠心病患者外周血中SLC22A3蛋白表达水平明显高于对照组，具有显著差异（P<0.05）。2.位于SLC22A3-LPAL2-LPA基因簇上rs9346816、rs2221750、rs3127596、rs9364559、rs1367211、rs6415085和rs9347438位点不同基因型间SL