25.3 自身免疫病检验讲解

第二十五章自身免疫病及免疫检验教学目标1.掌握：

自身抗体、自身免疫病的概念、基本特征（重点）；临床常见自身免疫病的自身抗体谱（重难点）。2.熟悉：自身免疫病的分类、自身抗体的实验室检测（重难点）。3.了解：自身免疫病的发病机制及病理损伤机制。知识目标技能目标思政-素质目标掌握RF、ANA、ENA抗体谱的检测；荧光显微镜使用及结果判读。责任心、质控及生物安全意识、临床思维自身免疫病的发病机制二自身免疫病检验三目录

自身抗体检测实验选择的原则四一概述抗核抗体（antinuclearantibody，ANA)

是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称；在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质，激发机体产生许多抗不同核成分的抗体。一、自身抗体的检测（一）抗核抗体检测自身免疫病检验三ANA的特性ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；将检出ANA作为AID存在的依据。

抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、抗H3、

抗H4抗体等

抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、抗SSA、

抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、AnuA、抗DNP、

抗DM53抗体、抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等

抗核仁抗体：抗PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、抗U3-RNP、

抗4-6-S-RNA抗体等1.ANA的类型和临床意义

ANA谱①抗天然DNA(nativeDNA,nDNA)抗体，又称抗双链DNA(doublestrandedDNA,dsDNA)

抗体。②抗变性DNA(denaturedDNA,dDNA)

抗体，又称抗单链DNA(singlestrandedDNA,ssDNA)抗体。对SLE有高特异性;SLE诊断标准之一缓解期降低70%～90%SLE活动期增高药物疗效抗dsDNA抗体抗DNA抗体

抗组蛋白抗体（anti-histonicantibody,AHA）：由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都有特异性抗体；AHA检出百分率抗dsDNA507090100药物诱导性狼疮只能检出此SLEAHAAHA抗组蛋白抗体

可提取性核抗原(extractablenuclearantigen，ENA)

是盐水可提取性核抗原的总称，是非组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量的RNA和多肽组成。抗ENA抗体对类风湿有特异诊断价值的ENA：

抗nRNP(nuclearRNP,nRNP)抗体；

抗Sm抗体；

抗SSA抗体；

抗SSB抗体；

抗Scl-70抗体；

抗Jo-1抗体；

抗核糖体抗体。核蛋白(DNP)由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性及可溶性两种，分别产生相应的抗体。检出百分率抗DNP20406080SLE非活动期

SLE活动期抗不溶性DNP抗体抗DNP抗DNP100RA滑膜液中抗DNP抗可溶性DNP抗体（1）抗DNP抗体

抗核小体抗体（anti-nucleosomeantibody，AnuA)核小体是细胞核染色质的基本组成单位;细胞凋亡致核小体大量蓄积，并诱导B细胞产生AnuAAnuA是SLE特异的标志性抗体。抗dsDNA抗体抗核小体抗体抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性率为60%～80%，特异性＞97%。（2）抗核小体抗体

常见AID的ANA阳性检出率疾病ANA（%）疾病ANA（%）SLE≥95SS70～80MCTD≥95PM/DM30PSS85～95RA20～302.ANA的检测方法

稀释患者血清可做定量检测，1:80稀释仍呈阳性对诊断SLE有较大参考价值。（1）间接荧光免疫法抗核抗体核型与相关疾病核型荧光图形抗体相关疾病周边型核周环状荧光抗dsDNASLE、慢活肝炎均质型核呈均质荧光抗DNA、AHA、AnuASLE、RA、PSS、慢性肝病斑点型核内颗粒状荧光抗ENAMCTD、SLE、PSS、SS、PM核仁型核仁有荧光抗核仁抗体PSS、雷诺现象、SLE着丝点型核浆细小相同颗粒荧光抗着丝点PSS、CREST综合征均质型抗核抗体核型着丝点型核仁型斑点型

用间接ELISA检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。（2）ELISA法SDS加待检血清形成分子大小不同区带

分离电转移PVDF膜或NC膜抗ENA与相应抗原特异结合抗人IgG·HRPENA—抗ENA—抗人IgG·HRP（3）免疫印迹法显色并判读结果

类风湿因子(rheumatoidfactor，RF):抗变性IgG的自身抗体，可为19S的IgM，也可为7S的IgG和IgA。可与人变性IgG结合，但不与正常IgG发生凝集。

RF可在RA患者检出，约70%～90%的血清、约60%的滑膜液可检出IgG类的RF；（二）类风湿因子测定IgG类抗体与相应抗原结合后发生变性；炎症过程亦可发生IgG变性，构成自身抗原，刺激机体产生各种抗IgG抗体；滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合可形成中等大小的免疫复合物，相比血清中的IgM类RF更易致病。RF检测方法最常采用的检测方法。以吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上的IgG作诊断试剂，与待检血清中的RF结合后，出现胶乳凝集颗粒。此法的灵敏度和特异性不高，且只能检出血清中的IgM类的RF。1.间接胶乳凝集试验胶乳颗粒人变性IgG致敏致敏胶乳NS凝集颗粒稀释待检血清至一定浓度后，加入定量的变性IgG诊断试剂，即用透射比浊或速率散射比浊仪，检测血清中的RF。此法快速、敏感性高、精密度高、稳定性好、可定量分析，但仍只能检测IgM类RF。2.免疫比浊法IgM、IgG和IgA类RF可用ELISA检测，临床上多采用双抗原夹心法或间接ELISA进行测定。3.ELISA法（三）其他自身抗体测定其他自身抗体的检测方法与临床意义自身抗体的类型检测方法临床意义抗甲状腺球蛋白抗体(A-TG)荧光免疫法、ELISA、RIA桥本甲状腺炎抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISAGraves

病,桥本甲状腺炎抗乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)ELISA、RIA重症肌无力抗平滑肌抗体(SMA)荧光免疫法、ELISA、RIA自身免疫性肝炎,慢性活动性肝炎,原发性胆汁性肝硬化抗线粒体抗体(AMA)荧光免疫法、ELISA、RIARA，SS，SLE，原发性胆汁性肝硬化,慢性活动性肝炎,持续性肝阻塞抗胃壁细胞抗体荧光免疫法恶性贫血抗胰岛素抗体（IAA）ELISA胰岛素依赖性糖尿病抗精子抗体（AsAb）ELISA、荧光免疫法不育症,不孕症抗红细胞抗体直接凝集试验、Coombs试验新生儿溶血,自身免疫性溶血性贫血抗血小板抗体ELISA法、ABC-ELISA法原发性血小板减少性紫癜、输血史抗心磷脂抗体（ACA）RIA、ELISASLE，血栓,自发性流产,血小板减少抗肾小球基底膜抗体(GBM-Ab)荧光免疫法Goodpasture综合征,狼疮肾炎二、细胞检查（一）淋巴细胞检测1．特异性致敏淋巴细胞2．淋巴细胞数量和比例如淋巴细胞转化试验或吞噬细胞移动抑制试验检测淋巴细胞的总数、T、B细胞分类与计数、CD4/CD8亚群比例等进行（二）狼疮（lupuserythmatosus，LE）细胞试验LE细胞为胞浆内含有大块状聚合DNA的中性