22《动物细胞工程》课件10

2024/3/2522《动物细胞工程》课件10动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液10代细胞部分细胞“癌变”，遗传物质改变，无限传代动物细胞培养不能最终培养成动物体50代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系1、过程：细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变几个有关概念：原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。1、无菌、无毒：

2、全部的营养物质：

3、适宜的温度和PH值：

4、必要的气体条件：（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）保证细胞顺利的生长增殖36.5+（-）0.5度,7.2-7.4O2和CO2（95%空气和5%CO2）2、条件：维持培养液的PH元贝驾考ybjx元贝驾考2016科目一科目四

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3、应用：大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据细胞的全能性细胞株、细胞系植株培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较1.动物细胞工程技术的基础是（）A、动物细胞融合B、胚胎移植C、动物细胞培养 D、核移植2.下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是（）A、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中D、培养至50代后的传代细胞称为细胞株CB

3.下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是（）A、用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B、将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D、动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡D

4.下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自

______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是

，然后用

酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是

（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有

_______________________________________等。幼龄动物或胚胎的组织或器官剪碎组织

胰蛋白

使细胞与培养液充分接触

葡萄糖、氨基酸、水、无机盐、促生长因子与微量元素和动物血清

在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第

代，到这时的培养称为_____________。⑷为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用

处理然后配置成

，再分装。⑸在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是

10原代培养胰蛋白酶

细胞悬液

细胞没有发生癌变

核移植技术和克隆动物

1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。核移植（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易用核移植的方法得到的动物称为克隆动物原理：动物体细胞核的全能性。取供体细胞取卵母细胞

供体细胞培养培养到MⅡ中期

卵母细胞去核

供体细胞注入去核的卵母细胞

供体核进入受体卵母细胞

重组胚胎

代孕母牛

生出与供体遗传物质基本相同的个体2.过程：3.克隆动物的研究意义：1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种3.治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物4．体细胞核移植技术存在的问题：1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。1.下列哪—项属于克隆（）A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系D2.（多选）美国杜克大学医疗中心的一个研究小组利用成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应器,成功地在实验室里培育出新的动脉血管，这种血管的外形和功能都与真的血管一样,这一研究成果是生物组织培养领域的重大进展。下列关于以上技术的叙述中，正确的是（）A．属于“克隆”B．可能要利用去核卵细胞C．关键是激发血管细胞的全能性D．关键是激发血管细胞发育成血管的潜能ABD3.从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状 （）A、难以预测B、像甲C、像乙D、像丙4.生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是（）A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体B

C

5.下图所示为用两栖动物卵所做的实验图解，据图回答下列问题：⑴蝌蚪肠上皮细胞核中含有青蛙发育所需的_________，重新组合的细胞相当于蛙的______

细胞，经过____________和________________形成组织和器官。全部基因

受精卵

细胞分裂细胞分化⑵本实验结果说明_____________________具有全能性，图中A过程采用的技术手段称做_______________。

动物体细胞核核移植技术动物细胞融合1.过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞2.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。3.应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体植物体细胞杂交和动物细胞融合比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、生物方法获得部分或完整植株主要用于制备单克隆抗体1、基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞A．AAaaB．AaBbC．AabbD．BBbb2、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是①诱导融合的方法完全相同②所用的技术手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成杂种细胞A.①② B.①③C.②④ D.③④3、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是A、融合的原理 B、融合的优点C、融合的诱导手段 D、融合的过程C

C

C

4.科学工作者用绿色和红色荧光材料，分别标记人和鼠的细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后，起初一半膜发出绿色荧光，另一半膜发出红色荧光，一段时间后，两种颜色的荧光点均匀分布，如图所示。请分析回答：⑴该实验结果说明了细胞膜

，这是因为⑵若在两个细胞融合成一个细胞后，将融合细胞置于0℃条件下再保持40min，则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧光，另一半膜发红色荧光，这说明具有一定的流动性

构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动的膜的流动性受温度影响，在低温下分子的运动受抑制单克隆抗体1.单克隆抗体制备过程诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的方法过程：B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体2、关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是A、可以制成诊断盒．用于疾病的珍断B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C、可以利用基因工程技术生产D、可以在生物体内生产，不能体外生产3、“生物导弹”是指A、单克隆抗体B、带有特定药物的单克隆抗体C、杂交细胞D、B淋巴细胞D

B

4.单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是 A．特异性强、灵敏度高B．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”C．体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体D．由效应B细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌C

5.下图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合）请据图回答：

I．若A、B是基因型分别为rrHH、RRhh两个烟草品种细胞的花粉，且这两对基因位于非同源染色体上，由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800勒克斯时，都不能生长。⑴实验开始时必须用

除去不利于原生质体融合的物质。⑵实验中除获得杂种细胞外，还有基因型为

的融合细胞。纤维素酶和果胶酶rrHH、RRhh

⑶设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，方法：

⑷将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础是

。II．若该过程是制备治疗“SARS”病毒的单克隆抗体，A为人B淋巴细胞（染色体组成为2A＋XX=46），B为鼠骨髓瘤细胞（染色体组成为2A＋XX=40）⑸用单克隆抗体制成“生物导弹”主要利用了抗体的

特性。⑹A细胞来自于

，杂种细胞C共有

个染色体组。⑺杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是培养基要用

培养基。（物理状态），培养基中除了添加必要的营养物质为还需加入

。置大于800勒克斯光照下培养，收集分化的细胞团细胞的全能性

抗体与抗原结合，发挥特异性免疫效应

非典患者

4

液体动物血清

6.右图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题：⑴给小鼠注射抗原的目的是__________________。⑵在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞