第2章 血型检测技术课件

第二章血型检测技术学习目标1.掌握ABO血型和Rh血型基本理论、鉴定原理、操作方法、方法学评价和质量控制；白细胞抗原系统抗原抗体的种类、HLA基因及其实验室检测；血小板抗原的基本理论知识及其检测技术。2.熟悉血型抗原与抗体、ABO亚型等基本理论知识；ABO正反定型不符的原因分析和处理措施；HLA分子国际命名原则；血小板血型系统分类及命名原则；红细胞、HLA、粒细胞和血小板抗原抗体的临床意义。学习目标3.了解特殊ABO血型及其他红细胞血型系统的基本理论；不同HLA分子的分布情况，粒细胞抗原抗体组成、命名；血小板血型基因的分子遗传多态性。4.能够运用ABO、Rh等红细胞血型，HLA、HPA的血型血清学基本知识，独立开展相关的实验室检查。5.具备一定的分析解决临床疑难血型鉴定和交叉配血的能力。第一节红细胞血型系统基础理论第二节红细胞血型鉴定技术第三节疑难血型鉴定与处理第四节白细胞抗原系统第五节白细胞抗原系统检测技术第六节血小板血型系统第七节血小板血型系统检测技术44一、红细胞血型系统分类及命名（一）传统分类如A、B表示ABO血型抗原。（二）器官和组织血型分类1.糖分子抗原：组织血型2.多肽抗原：器官血型（三）国际输血协会（ISBT）分类56表2-388（2）血型系统的ISBT命名1）血型基因和基因型表述：用斜体的大写字母和数字表示。Luα或表示为LU12）血型抗原表述：6位数字和字母/数字方式

004001，RH13）血型表型表述：KEL(K-k+)表示为KEL：-1，22.血型集合3.高频抗原和低频抗原二、红细胞血型抗原与抗体（一）红细胞血型抗原图2-1（一）红细胞血型抗原图2-1（二）红细胞血型抗体1.天然抗体与免疫抗体：区别见表。2.完全抗体与不完全抗体3.规则抗体与不规则抗体4.同种抗体与自身抗体5.外源凝集素1.天然抗体与免疫抗体天然抗体：机体未发生明显的免疫学反应，血清中却存在缺乏相应抗原的抗体，主要为IgM。免疫抗体：是机体经输血、妊娠、移植等特定抗原免疫刺激后产生的抗体，主要为IgG。2.完全抗体与不完全抗体完全抗体：在电解质或其他因素参与下，与抗原结合后能出现凝集、沉淀、补体结合等肉眼可见的反应。比如IgM。不完全抗体：在盐水介质中能致敏红细胞，但不能出现肉眼可见的凝集，需要通过抗人球蛋白、酶等介质增强反应的敏感性。类型为IgG。3.规则抗体与不规则抗体规则抗体：红细胞表面存在某种抗原，血清中规律性地存在着缺乏相应抗原的抗体，符合Landsteiner规则。不规则抗体：凡是不符合Landsteiner规则的血型抗体，也就是ABO血型系统以外的抗体，主要是通过输血、妊娠等免疫刺激产生。4.同种抗体与自身抗体同种抗体：是指同种属、不同个体之间因抗原刺激产生的抗体。自身抗体：是针对自身抗原产生的抗体，或者是外来物质与机体内某些成分结合后诱导机体产生的抗体，可引起自身免疫性疾病。5.外源凝集素某些植物含有抗体样物质，能与人红细胞发生凝集反应，称为植物血凝素。可用于红细胞血型抗原鉴定。表2-4表2-4三、ABO血型系统（一）ABO血型基因及其遗传（二）ABO抗原的合成（三）ABO血型定型（四）ABO血型抗体（五）ABO亚型（六）特殊的ABO型（一）ABO血型基因及其遗传

ABO血型的基因位点在第九号染色体长臂3区4带（9q34)该基因位点为三复等位基因，即A、B或/和O基因。其中A、B是显性基因，O基因为隐性基因。因此，共组成6个基因型，4个表现型。ABO血型基因2222

ABO血型的遗传为复等位基因显性遗传，其遗传原则为：

1、ABO血型是由两个遗传基因结合而成2、遗传时绝大多数情况下，这两个遗传基因必然分开。2323AiiBA型B型AB型ABA型AiO型iiB型Bi24（二）ABO抗原的合成4糖基的寡糖链经H基因作用4糖基的寡糖链岩藻糖H抗原4糖基的寡糖链岩藻糖乙酰氨基半乳糖A抗原4糖基的寡糖链岩藻糖半乳糖B抗原经A基因作用经B基因作用

ABO血型抗原的形成：2627（三）ABO血型定型正定型反定型

凡红细胞上具有A抗原者为A型,有B抗原者为B型,A抗原和B抗原都没有者为O型,A抗原和B抗原都有者为AB型。血型红细胞上抗原血清中抗体AA、H抗-BBB、H抗-AOH抗-A、BABA、B、H无2929

ABO血型抗原属完全抗原；ABH抗原在5～6周胎儿RBC已可测出，出生时抗原性只达成人的25%～50%，在生后18个月时才能充分表现出抗原性；20岁达高峰，老年人减弱。抗原性终身不变。ABO血型抗原的特点30（四）ABO血型抗体1.ABO血型抗体的特点（1）新生儿血型定型只做正定型出生后3-6个月才能检出自身产生的抗体，5-10岁达高峰，老年人抗体水平下降。（2）抗体类型：A、B型以IgM为主，O型以IgG为主，主要是抗A+B。2.ABO血型抗体的临床意义（1）ABO不相容的输血可以引起急性的血管内HTR，严重者可出现DIC、急性肾衰，甚至死亡。（2）ABO抗体可引起HDN（3）在器官移植和造血干细胞移植等方面均有意义。（五）ABO亚型1.A亚型（1）A1和A2（2）其他弱A亚型2.B亚型较A亚型少见在AB型中应有A1B和A2B亚型。我国人中A2和A2B型在A、AB型人中都不到1%。34其他弱A亚型：A3、Am、Ax、Ay、Ael、Aend等共同特点：RBC抗原数量明显减少，RBC与抗A反应后表现为弱凝集或者不凝集，可与抗AB有不同程度凝集，与抗H反应较强，某些人血清中有抗A135（六）特殊的ABO型1.B（A）和A（B）型2.顺式AB3.获得性B1.B（A）及A（B）表型B（A）表型特点：B细胞上有弱A抗原表达；RBC和抗B出现强凝集，和抗A出现弱凝集（<2+）；血清中有抗A，能够凝集A1及细胞；产生原因：基因突变。38双亲中一人为O型，一人为AB型，子女为AB型。A基因和B基因位于同一条染色体上。两个基因可同时继承和同时遗传。A抗原强度强于A2B，弱于A1B。B抗原弱，类似B3表型。与抗-A及抗-B血清反应很弱，H抗原性很强。392.顺式AB（cisAB）393.获得性B此类患者红细胞有B抗原，血清中含有抗B。只表现在A型红细胞上。无B基因。不是红细胞本身生成的，与疾病相关。自身血清与红细胞不发生凝集。可能为：细菌等微生物的脱乙酰酶将A抗原特异性单糖N－乙酰半乳糖胺转变为α－半乳糖，后者很像B型抗原决定族的半乳糖，此种获得性B称为“脱乙酰酶型”。4040四、Rh血型系统（一）Rh基因（二）Rh血型的命名（三）Rh抗原（四）Rh血型抗体及其临床意义（一）Rh基因控制Rh抗原的基因定位于lp36.13-p34.3。研究表明，Rh基因座位由二个紧密连锁的基因RHD和RHCE组成。RHD和RHCE基因都有10个外显子组成，长度为75kb。RHD和RHCE基因方向相反，两个3’端相邻，形成类发夹样结构，两者遗传物质容易通过基因转换进行交换，形成杂交基因。遗传控制：受控于1号染色体短臂上D和CE位点。D基因的产物为D抗原。CE基因的产物为C、c、E、e抗原，它们是同一结构基因的产物，但在转录过程中有1-2个外显子不同。若D位点上一对等位基因均发生突变或缺失，则为Rh(-)，其余为Rh(+)。43（二）Rh基因43（二）Rh血型的命名1、CDE命名法：又称为Fisher-Race命名法，将Rh抗原命名为C、D、E、c、e2、Wiener命名法：常被认为不合理3、现代命名法：将抗原按数字编号，D--RH1、C--RH2、E--RH3、c--RH4、e--RH5（三）Rh抗原1.Rh表型

至今已发现Rh血型系统的抗原50个，但涉及临床问题的主要有5个抗原，即D、C、c、E、e及其相应的特异性抗体。只存在于红细胞膜中，不存在于其他组织细胞膜上或体液中。2.D抗原Rh抗原的发育

Rh抗原在胎儿早期就充分发育并维持整个一生，脐带血或新生儿的红细胞Rh血型与成人一样强。

Rh血型抗原的免疫原性

Rh血型抗原的抗原性强度可能仅次于A和B抗原。Rh血型抗原中的免疫原性强弱顺序为D>E>c

>C>e。

Rh抗原都显示剂量效应。正常D抗原为1万～3万，弱D为0.2万～1万，增强为7.5万～20万。4646

根据红细胞上D抗原的有无可将人类红细胞分为Rh阳性和Rh阴性，即红细胞上缺乏D抗原的人是Rh阴性；红细胞有D抗原的人是Rh阳性。

Rh阴性分布频率：白种人15～20%

中国汉族0.34%4747

定义：与D抗原基本无区别，只是红细胞膜上的D抗原数量减少。特性：一般情况下，弱D红细胞与IgM类抗-D试剂反应呈阴性，抗球蛋白方法检测为阳性。弱D献血者和受血者在临床上意义不同。

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Du型（弱D）作为受血者：归RhD(-)Du型（弱D）作为献血者：归RhD(+)48483.4.部分D（partialD）定义：红细胞表面D抗原表达弱，同时在血清中可含有抗D抗体，称为部分D。D抗原表位部分缺失。原因：RHD基因部分被RHCE基因替代，产生了杂合基因。杂合蛋白不仅丢失了一部分的D抗原决定簇，还可能产生新的抗原。胞膜外的D抗原单个氨基酸发生改变。49495.放散D：红细胞上D抗原表达极弱，常规血清学检查为阴性，但红细胞上有极少量D抗原。6.增强D红细胞上D抗原明显增强，在盐水介质中能与IgG抗D发生凝集反应。7.C/C和E/e抗原易发生变异，导致抗原表达改变或减弱。复合抗原：ce、cE、Ce、CE变异体：RHCE基因突变导致C、c、E、e。（四）Rh血型抗体及其临床意义1.Rh抗原阴性个体因反复输血、妊娠等免疫刺激，可产生IgG抗体，引起严重的HTR和HDN。2.Rh血型抗体能封闭抗原，导致RhD阳性的新生儿鉴定为假阴性。3.临床因输血产生抗D较少见，产生抗E的概率远超过抗D。五、红细胞其他血型系统（一）H血型系统和Lewis血型系统1.H血型系统：命名H，序号018，只有一个H抗原。除孟买型，几乎人体所有组织和体液、分泌物均有H抗原。正常成人红细胞上H抗原表达强弱顺序依次为：O型＞A2型＞B型＞A2B型＞A1型＞A1B型（1）H基因及其抗原生化结构1）H基因和Se基因，形成红细胞上的H抗原和体液中的H抗原。2）红细胞表面表达II型H抗原，分泌型唾液中表达I、II型H抗原，非分泌型个体为se隐性基因，唾液中不表达H抗原。（2）抗原缺失表型1）孟买型基因型为hh、sese，不能产生H抗原或H物质。血清学特征：①红细胞上无ABH抗原，易误差为O型。②唾液中无ABH物质。③血清中存在抗A、抗B、抗H，能与所有红细胞凝集，引起HTR。④只能接收孟买型血液。2）类孟买型：不能检出H抗原，红细胞上弱表达A/B抗原，血清中存在抗A、抗B、抗H。2.Lewis血型系统命名为LE，序号007。有6个抗原，主要为Lea和Leb。表型有三种：Le(a-b+)、Le(a+b-)、Le(a-b-)可存在于体液、红细胞表面及血小板等细胞上（1）基因及其抗原生化结构Le基因与Se基因图2-3（2）Lewis抗原1）脐带血大多数表现为Le(a-b-)2）新生儿红细胞很少表达Lewis抗原，出生后首先合成Lea，5-6岁时与成人水平相同。3）Leb优于Lea吸附于红细胞表面且数量多，红细胞上一般只能检测到Leb。4）妊娠期间可出现一过性Le(a-b-)（3）Lewis抗体比较常见，可引起ABO血型定型困难，一般没有临床意义。对于有Lewis抗体的患者，选择37交叉配血相合的血液输注即可，一般不需要选择Lewis抗原阴性的供血者。（二）MNS血型系统命名为MNS，序号002，血型抗原有46个，常见的有M、M、S、s等1.基因及其抗原生化结构4号染色体上GYPA和GYPB基因编码糖蛋白A（GPA)和糖蛋白B(GPB)。MN抗原在GPA上，Ss抗原和少量N在GPB上。2.抗原抗体性质（1）抗原性质：不能用酶法检测抗原1）MN胚胎期可检测，Ss出生后才可检测2）MN十分稳定，耐高温、高压，可反复冻融。3）MNS系统抗原是补体、细菌、病毒的受体。4）MN抗原纯合子比杂合子抗原性强。5）M抗原具有类N特异性，抗N可与M型红细胞反应。6）人群中还有一些低频抗原和高频抗原。（2）抗体特性临床常见为抗M、抗N、抗S、抗s等。抗M与抗N多为IgM型，抗N较罕见。抗S与抗s可引起HTR和HDN抗MiⅢ可引起HTR和HDN（三）P1PK血型系统1.序号003，抗原有P1、P、Pk。表型有P1、P2、Pk、P、p五种P血型。系统只有一个P1，P1阴性时为P2。P1、Pk、P均缺失时为p。2.血型抗体抗P1常见，多在P2个体血清中。若抗P1在37℃有活性，输血时应选择P1抗原阴性的血液。（四）I血型系统命名为I，序号027，只有一个I抗原。多数成人血清中有抗I，为IgM冷自身抗体。引起红细胞非特异性凝集，影响ABO血型鉴定及交叉配血。肺炎支原体感染引起冷凝集素综合征，产生大量自身抗I，引起严重的自免溶贫。（五）Lutheran血型系统1.命名LU，序号005，抗原有20个，主要为Lua和Lub，15岁左右达成人水平。2.Lu抗体以IgM为主，

抗Lua可自然产生，可免疫刺激产生，抗Lub较罕见。Lu抗体临床意义不大。（六）Kell血型系统命名为KEL，序号006，抗原有35个，主要有K、k、Kpa和Kpb。Kell血型抗原性强，可通过免疫产生IgG类抗K、抗k，引起严重的HTR和HDN。中国人群100%k抗原阳性，不易产生抗K。体内有Kell血型抗体的患者，输血选择抗原阴性且交叉配血相合的血液进行治疗。抗原抗体的检测用抗人球蛋白法。（七）Kidd血型系统1.命名为JK，序号为009，抗原有Jka、Jkb、Jk3。2.表型有：Jk(a+b-)、Jk(a-b+)、Jk(a+b+)、Jk(a-b-)。3.抗原表达在细胞表面，体液中未发现。4.Jk抗体不常见，免疫刺激产生的抗体可引起HTR和HDN。（八）Kuffy血型系统1.命名为FY，序号008，抗原有6个，主要为Fya、Fyb。2.表型有：Fy(a+b-)、Fy(a-b+)、Fy(a+b+)、Fy(a-b-)。3.非洲人多为Fy(a-b-)，可抵抗疟原虫感染。4.免疫刺激产生的IgG型抗体多Fya，可引起HDN和急性、迟发性输血反应。第二节红细胞血型鉴定技术一、ABO血型血清学鉴定（一）鉴定方法1.试管法2.微柱凝胶介质法1.试管法原理：正定型：用已知的抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和(或)B抗原。反定型：用已知的抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗A和(或)抗B抗体。标本：EDTA－K2抗凝或枸橼酸钠抗凝全血、不抗凝全血标本。不能溶血，特殊情况放4℃冰箱一天，不能0℃冷冻。器材与试剂（1）器材：（2）试剂：操作：（1）处理标本1）受检者血浆（清）制备：1000g（3000r/min）离心5min。2）洗涤红细胞：取分离后的红细胞加生理盐水，3000r/min)离心5min，反复3次，得到压紧的红细胞。3）制备2%～5%的红细胞悬液：50ul压紧红细胞加0.8-2ml生理盐水（2）标记（3）加样1）正定型：2）反定型：（4）观察结果3000r/min离心15s，观察有无溶血，轻轻摇动观察凝集。结果判断：（1）红细胞凝集强度的判定标准4+：一个大凝集块，无游离红细胞。3+：大小凝集块，无游离红细胞2+：凝集块小多，少量游离红细胞+：凝集块细小多，较多游离红细胞±：显微镜下有细小凝块mf:即有凝块，又有游离红细胞-：肉眼和显微镜下均无凝集完全溶血：不完全溶血：（2）红细胞凝集强度的评分标准4+：12分3+：10分2+：8分+：5分±：2分mf:1分-：0分质量控制：1.器材必须清洁干燥2.试剂符合要求，2～8℃保存。3.血液标本新鲜，无细菌污染，无溶血。4.标本和试剂比例合适，离心速度和时间按规定，防止假阴性和假阳性。5.加样顺序为先加抗体后加红细胞悬液6.弱凝集必须用显微镜确认，溶血结果视为阳性。7.标本保存7天备查2.微柱凝胶法原理：利用分子筛技术和免疫学技术，将特定配比的葡聚糖凝胶颗粒填充于检测管中，制成微柱凝胶卡，凝胶柱的上层为抗原抗体反应区，柱的下层为“分离池”，正定型采用特异性微柱凝胶，反定型采用中性微柱凝胶。红细胞抗原与抗体在凝胶介质中反应阴性：红细胞到达下端阳性：红细胞留在上层或中间标本：同试管法器材：试剂：操作：（1）处理标本：制备1%红细胞悬液（2）标记（3）加样1）正定型2）反定型（4）观察结果结果判断：质量控制：（1）标本新鲜，避免红细胞破碎或细菌污染引起假阳性。（2）EDTA-K2或枸橼酸钠抗凝标本，血清应完全去除纤维蛋白。（3）凝胶卡4冰箱竖立保存，使用前检查有无异常（4）中性凝胶卡使用时先加红细胞悬液再加抗体（5）按要求加样和离心（二）方法学评价二、Rh血型血清学鉴定原理：

在盐水介质中，单克隆IgM抗D、抗E、抗C、抗c、抗e与受检者红细胞反应，产生肉眼可见的凝集反应。标本：同ABO试管法器材：试剂：单克隆IgM抗D、抗E、抗C、抗c、抗e操作：（1）处理标本（2）标记（3）加样（4）观察结果：3000r/min离心15s，观察有无溶血和凝集。质量控制：（1）待检者红细胞需充分洗涤（2）抗D检测阴性的标本，需要用3种以上IgG试剂通过间接抗球蛋白试剂进一步确认。若为D变异型，通过分子生物学进行确认。三、其他红细胞血型血清学鉴定除ABO和Rh外，其他血型也可免疫产生不规则抗体，与Rh血型鉴定方法相似，用已知的特异性抗体检查红细胞上有无相应的血型抗原。四、红细胞血型的分子生物学鉴定ABO正反定型不符的，通过分子生物学技术进一步确认。方法：PCR-SSPPCR-RFLPPCR-DNA测序第三节疑难血型鉴定及处理一、ABO疑难血型鉴定及处理（一）ABO正反定型不一致的原因（二）ABO正反定型不一致的原因分析与处理二、Rh疑难血型鉴定及处理（一）原因（二）处理（一）ABO正反定型不一致的原因（二）ABO正反定型不一致的原因分析与处理1.排除人为因素干扰（1）重新采集抗凝和不抗凝血标本各一管，排除血样采错、静脉输注处采样和标本不合格等因素。（2）挑选合格的器材和试剂，重新检测。（3）严格按试剂说明书和操作规程重新检测，排除离心机转速、时间、离心力对结果的干扰。2.复查临床资料（1）复查受检者的年龄、性别、孕产史、输血史及生理状况。1）小于6个月的婴儿或老年人，可出现抗原、抗体减弱的情况。2）孕妇血液中纤维蛋白原可升高，可使红细胞呈缗钱状，影响反定型。3）有孕产史、输血史的受检者，体内可能存在意外抗体，可干扰反定型。（2）受检者家系调查，了解患者是否为双胞胎（双精子受精）。双胞胎可出现嵌合体血型。（3）患者临床治疗情况：大量输液、静脉输注高分子药物、输异型血、血浆置换治疗、ABO不合的造血干细胞移植后，均可出现ABO正反定型不符现象。（4）患者的临床治疗情况1）白血病或某些其他造血系统恶性疾病，可导致ABO抗原减弱或漏检。2）血浆蛋白紊乱的疾病，如肝脏病、代谢性疾病、MM等，可导致反定型出现非特异性凝集反应。3）自免溶贫、淋巴瘤、SLE等疾病，自身抗体可干扰ABO正反定型。4）真红，红细胞呈缗钱状，干扰ABO正定型。5）细菌感染可能导致的类B抗原、病毒感染产生的全凝集/多凝集或病理性冷凝集，均可干扰ABO血型。6）急性大出血可干扰ABO正定型，扩容治疗可干扰反定型。3.具体处理措施（1）ABO亚型1）血清学鉴定2）DNA鉴定：PCR扩增和测序（2）白血病或造血系统恶性疾病：正定型出现抗原减弱1）吸收/放散试验，血型物质测定等2）临床追踪3）DNA鉴定（3）3个月内输（异型）血鉴定：1）DAT阳性为有力佐证，但DAT阴性不能排除2）毛细管离心法分离患者红细胞，复检血型3）DNA鉴定（4）ABO不合的造血干细胞移植：嵌合体鉴定：1）ABO正定型凝集呈MF2）DNA鉴定（5）可溶性血型物质过高未洗涤红细胞鉴定：红细胞充分洗涤后复检血型（6）急性大出血鉴定：1）Ret增多2）定期复查，成熟红细胞增多后干扰消失。（7）某些疾病因素1）肝脏疾病、结核病、MM等血清蛋白过高干扰定型，鉴定：充分洗涤红细胞后复检。2）自身抗体所致红细胞凝集鉴定：1）37℃盐水洗涤红细胞，DAT阴性后再鉴定2）红细胞经放散后，DAT阴性再鉴定3）低丙种球蛋白血症提示鉴定：血清蛋白测定4）其他异常提示：病毒感染致红细胞假凝集（8）年龄、妊娠等因素1）小于6个月的幼儿、老年人鉴定：幼儿不做反定型，老年人用抗原抗体增强技术2）孕妇因纤维蛋白原含量高出现假凝集鉴定：洗涤红细胞，或者在反应结果中加入生理盐水（9）血浆置换：抗体被稀释鉴定：追踪观察，晶体盐或胶体扩容剂代谢后干扰消失。（10）输（异型）血浆或免疫球蛋白定期复查，代谢后干扰消失。（11）有免疫史或药物过敏史：可能有意外抗体鉴定：抗体筛查，抗体鉴定（12）获得性B抗原（类B）细菌感染所致：A→AB，O→B鉴定：1）正定型抗A(4+)、抗B弱凝集，反定型Ac不凝集、Bc凝集强，或正定型抗A(-)、抗B弱凝集，反定型Ac、Bc均凝集。2）用酸化（Ph6.0）抗B检测不凝集。3）临床追踪，感染控制后“类B”现象消失。4）吸收抗B弱，放散抗B强。（13）B（A）表型正定型抗B(4+)、抗A(±)，反定型Ac(4+)、Bc(-)。鉴定：1）吸收/放散试验证实红细胞上携带有弱A抗原。2）用MHO4单克隆抗A检测，凝集＜2+，容易散开。（14）混合凝集（mf）1）（近期）输异型血2）ABO不合的造血干细胞移植成功后。3）双精子授精（嵌合体）鉴定：DAT阴性，排除输异型血所致，被检者为双胞胎，无临床异常。二、Rh疑难血型鉴定及处理（一）原因1.假阳性的原因（1）受检者红细胞已被免疫球蛋白致敏，或血清中含有引起红细胞凝集的因子。（2）受检细胞与抗血清孵育时间（3）标本抗凝不当（4）定型血清中含有未被检测的其他特异性抗体（5）多凝集红细胞（6）器材或抗血清被污染2.假阴性的原因（1）受检细胞悬液浓度太高（2）漏加或错加定型血清（3）定型血清使用不当（4）离心后摇动用力过度（5）抗血清失效（6）一种试剂可导致D变异型的漏检（二）处理1.若受检细胞出现DAT阳性，应放散后再鉴定血型。2.标本彻底抗凝，选用合格的器材和试剂，正确加样，严格按操作规程鉴定。3.阴性标本需选用3个不同厂家或批号的试剂通过抗人球蛋白确认。Del抗原需通过吸收放散进行确认。第四节白细胞抗原系统一、白细胞血型抗原系统二、粒细胞抗原系统三、白细胞血型抗体一、白细胞血型抗原系统HLA又称MHC分子。（一）HLA的复合体按编码分子的结构、表达方式、组织分布和功能分（1）HLA-I类基因：经典基因A、B、C（2）HLA-II类基因：经典基因DP、DQ、DR（3）HLA-Ⅲ类基因：C4B、C4A、C2、Bf、TNF、HSP702、HLA的命名HLA+字母+数字+字母（N/L/S/C/A/Q）（二）HLA分子2.HLA分子的命名3.HLA分子的组织分布（1）HLA-I类分子分布在人体所有有核细胞表面，淋巴最高，成熟红细胞和滋养层细胞无。（2）HLA-II类分子主要表达在APC表面，中性粒细胞、未致敏的T细胞、肝、脑、肾等无（三）白细胞血型抗原的种类1.与红细胞共有的血型抗原：如ABO等，无临床意义。2.与其他组织细胞共有的血型抗原：即HLA，如血小板上表达HLA-I类抗原。3.白细胞本身特有的抗原：人类中性粒细胞抗原（HNA）二、粒细胞抗原系统主要是HNA。（一）HNA的命名（二）HNA的分布HNA-1位于糖蛋白FcγRⅢb上，只分布于粒细胞，是IgG1与IgG3的低亲和力受体。三、白细胞血型抗体（一）HLA抗体妊娠、输血及移植等诱导机体产生HLA抗体，多为IgG类，反复输血患者容易产生导致输血不良反应。（二）粒细胞抗体多为IgG类，与粒细胞抗原结合，导致粒细胞被单核-吞噬细胞系统清除。第五节白细胞抗原系统检测技术一、HLA系统检测二、粒细胞系统检测三、白细胞抗原系统在医学中应用一、HLA系统检测（一）HLA的血清学分型试验（HLA-B27为例）原理：已知的HLA抗体与待检淋巴细胞膜表面特异抗原结合形成抗原抗体复合物，在补体的参与下导致细胞死亡。染色处理后活细胞不着色，死亡细胞着色，通过着色的细胞比例，估计细胞毒性抗体的强度。标本：肝素抗凝全血操作：严格按照说明书操作。质量控制：（1）HLA抗体（2）淋巴细胞（3）孵育时间和温度（4）补体（5）染色时间和固定（6）严格设置阳性和阴性对照：阳性＞80%，阴性＜2%2.淋巴细胞毒交叉配合试验检测HLA抗体原理：待检血清+供者淋巴细胞（1）若血清中有抗体+相应HLA抗原→→抗原抗体复合物→→补体→→淋巴细胞膜损伤或细胞死亡；（2）若血清中无HLA抗体或不识别HLA抗原→→无反应临床应用：试验结果10%或阴性才能施行肾移植。若受体有过输血史、妊娠史或接受过同种异体移植，此试验可为阳性，器官移植术后可能发生超急性排斥反应。3.ELISA方法检测HLA抗原双抗原或双抗体夹心法。可进行定性或定量分析。4.流式细胞术检测HLA抗原将荧光标记的HLA单抗与细胞HLA抗原结合，根据荧光值大小对HLA抗原的强弱进行分析。方法学评价：（二）HLA的细胞学分型不适合常规检测，已逐渐被淘汰。（三）HLA的基因分型试验二、粒细胞系统检测（一）血清学技术

粒细胞凝集试验（GAT）、流式细胞检测技术（FCM）、粒细胞免疫荧光试验（GIFT）、单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验（MAIGA）、ELISA等。（二）基因分型技术PCR-SSP、PCR-RFLP、PCR-SBT等。

三、白细胞抗原系统在医学中的应用（一）在移植医学中的应用1.在实质器官移植中的应用2.在造血干细胞移植中的应用（二）在法医学中的应用1.个体识别2.亲子鉴定（三）在输血医学中的应用第六节血小板血型系统一、血小板血型系统抗原（一）血小板相关性抗原（二）血小板特异性抗原二、血小板血型系统抗体（一）HLA抗体（二）血小板特异性抗体（三）血小板自身抗体（一）血小板相关性抗原1.与红细胞血型系统共有抗原如ABO、Lewis、Ii、P等临床要求同型输注血小板，以降低PTR或避免不良反应。2.与HLA系统共有血型抗原

HLA-I类抗原，多次输血可产生免疫抗体，临床推荐去除白细胞