SNT 1699.2-2006猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程_第1页
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文档简介

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程2006-01-26发布国家质量监督检验检疫总局ISN/T1699分为三部分：—猪流行性腹泻微量血清中和试验操作规程；—-猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程；——猪流行性腹泻间接斑点酶联免疫吸附试验操作规程。本部分为SN/T1699的第2部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程SN/T1699的本部分规定了猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验的操作方法。本部分适用于猪流行性腹泻的诊断。下列文件中的条款通过SN/T1699的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本下列缩略语适用于SN/T1699的本部分。4仪器设备5试验材料5.10.01mol/LpH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法见A.1.1,或按诊断试剂说明书配制。5.2甘油缓冲盐水5.30.2%伊文思蓝溶液配制方法见A.1.3,或按诊断试剂说明书配制。5.4荧光抗体本部分使用水符合GB/T6822中二级水的规格。5.6被检样品5.7阳性样本指定单位提供。5.8阴性样本指定单位提供。26.1标本的制作将取得的病死猪的空肠样本，放于洁净培养皿中，加入少量PBS液，用眼科剪子剖开肠管在PBS液6.1.1肠上皮细胞洗脱物涂片6.1.2肠组织冰冻切片切片标本。6.2染色按荧光抗体说明书标定的工作效价，用0.2%伊文思蓝稀释荧光抗体。将稀释后的荧光抗体直接滴加到固定的肠上皮细胞洗脱物涂片标本及肠管切片标本土，以覆盖满为宜。放湿盒中于37℃温箱感作30min,6.4封固7结果判定镜检判定时，应注意荧光物质的部位及颜色，观察标本细胞浆，细胞浆外或胞核内的荧光不能判为阳性。用异硫氰酸荧光黄标记的荧光抗体，在荧光显微镜下发出耗绿色荧光，凡呈暗绿色或黄色的荧细胞浆内见有弥漫性或颗粒性亮绿色的荧光时，判定为阳性细胞浆内未见有弥漫性或颗粒性亮绿色的荧光时，判为阴性。(规范性附录)试剂配制与器材处理A.1试剂配制磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H,O)8.70g磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H,O)0.89g氯化钠(NaCl)22.80g以上试剂应选用分析纯，将上述成分溶解于适量蒸馏水中，最后定容至3000mL,103kPa20minA.1.30.2%伊文思蓝溶液称取0.2g

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