SN 1590-2005进出口食品中苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、IN检测方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、NDeterminationofSudanI,SudanⅡ,SudanⅢandSudanN2005-12-01实施国家质量监督检验检疫总局I本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河北出人境检验检疫局。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1进出口食品中苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、N本标准规定了进出口食品中苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、N的液相色谱(HPLC)测定方法和液相色谱一质谱(HPLC-MS/MS)确证方法。2测定方法2.1方法提要紫外可见检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量，或用乙腈提取直接用HPLC测定。对于用HPLC方法检出阳性的样品，采用HPLC-MS/MS方法进行定性确证2.2试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水，配流动相水为超纯水。2.2.1正已烷。2.2.3乙腈(HPLC级)。2.2.4甲醇(HPLC级)。2.2.5三氯甲烷。2.2.6甲醇-水溶液(98+2):2mI.水用甲醇定容至100mL。2.2.7中性氧化铝：100目～200目，500℃灼烧4h,贮于干燥器中备用，使用前130℃活化4h。2.2.8苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、IV标准品：纯度≥98%。2.2.9标准储备液：分别精确称取苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、IV标准品各100mg,分别用三氯甲烷溶解，最后用正己烷各自定容至100mL,配制成1.0mg/mL的标准储备液。此溶液在1℃~4℃下保存。2.2.10混合标准中间液：移取苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、N标准储备液各5mL至100mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度。配制成混合标准中间液，浓度为50μg/mL。2.2.11混合标准工作液：根据需要，取适量混合标准中间液，用甲醇稀释至所需浓度。2.3仪器和设备2.3.1高效液相色谱仪配有紫外-可见检测器。2.3.2高效液相色谱-质谱联用仪。2.3.3平板摇床。2.3.4超声波清洗器。2.3.5均质器。2.3.6旋涡混和器。2.3.7固相萃取仪及配件(贮液器，连接头)。2.3.8净化柱：塑料柱，6.5cm×1.4cm(内径),准确称取3.0g已活化的中性氧化铝填入，敲击，使之填实，安装到固相萃取仪上待用。2.3.9真空泵。22.4.3测定 (1)式中：3b)流动相：0.1%乙酸水溶液+乙腈(15+85),流速：0.3mL/min;2.4.4.3定性确证结果的判断进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，则通过扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，误差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。在上述色谱和质谱条件下，四种被测物的保留时间和定性离子见表2,总离子流图及二级质谱图参见附录A。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许误差`相对离子丰度允许的相对误差士50表2四种被测物的保留时间和定性离子被测物苏丹Ⅱ苏丹Ⅲ苏丹N保留时间/min碰撞电压母离子子离子260、120,156本方法测定低限：甜椒或红辣椒粉中苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、IV定量低限均为1.0mg/kg,辣椒酱和肉制品中苏丹I、Ⅱ、Ⅲ、IV定量低限均为0.5mg/kg。不同商品回收率如下：辣椒粉中添加水平为1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg时，苏丹I回收率为91.5%~98.2%;苏丹Ⅱ回收率为93.5%～98.7%;苏丹Ⅲ回收率为85.5%～91.4%;苏丹IN回收率为辣椒酱中添加水平为0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg时，苏丹I回收率为94.0%～99.5%;苏丹Ⅱ回收率为93.5%～99.0%;苏丹Ⅲ回收率为84.4%～88.8%;苏丹IV回收率为89.5%～96.0%。鸡肉制品中添加水平为0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg时，苏丹I回收率为95.0%～102.5%;苏丹Ⅱ回收率为93.0%～101.5%;苏丹Ⅲ回收率为94.0%～102.5%;苏丹IV回收率为99.9%~4(资料性附录)Minutes1——苏丹I;3——苏丹Ⅲ;4——苏丹V。■图A.1标准品液相色谱图m51图A.6苏丹N的MS/6!7ThisstandardwasdraftedbypublicofChina.firsttime.8SN/T1590—2005ThisstandardspecifiesthemethodofsamplepreparationanddeterminatMS/MS.peppers,chillipowder,spicesandmcleanedupwithaluminmatography-tandemmassspectrograph.Unlessspecificallynoted,allreagentsusedshouldbeA.R.and“water”2.2.6Methanol-water(98+2):2m2.2.7Alumina:pH=7±0.5,100mesh~200mesh,igniteat500℃for4h,conservedinthedesic-9chloroform,thendilutetoscalewithn-hexane,theconcentrationofthefourstandardstocksolutionsane.Theconcentrationof2.2.11Workingstandardtherequiredconcentrationasworkingstandardsolution.2.3Apparatusandeq2.3.1Highperformanceliquidchromatog2.3.2Highperformanceliquidchromatography-tandemmas2.3.5Homogenizer.2.3.7Solidphaseextractionequipmentwithaccessories2.3.8Aluminacolumn:plasticcolumn6.5cm×1.4cm(id),Accuratelyweigh3.0gactivatedaluby.2.4.1.1Peppers,chillipowderandspices:Weight10g(accuratSN/T1590—20052.4.1.3Meatandmeatproduction:Weight20g(accurateto0.01passedthrough0.45μmfilterandreadyforHPLCdetermination.tone,rejecttheeffluents.Elute2.4.3.Determinationa)Column:Cg(5μm),250mm×4.6mm(i.d.),orequivalent;b)Mobilephase:Acetonitrile+water(95+5),flowrate;1.0mL/min;d)Columntemperature:35℃;samplesolution,selectthestandardworkingsolutionwithsimilarpeakareatothatofthesampleso-andsamplesolutionshouldbewithinthelinearrangeoftheinstrumentdetection.Thestandardwork-ingsolutionandthesamTheoperationoftheblanktestisthesameasthedescribedinthemethodoftheomissionofsampleaddition.processororaccordingtoformulWhere:X——thecontentofSudanintestsample,mg/kg;A----thepeakareaofanalyteofthesamplesolution,mm²;c——theconcentrationV——thefinalvolumeoft2.4.4ConfirmationForthosepositiveresua)Column:C,150mm×2.1mm(i.d.).5μm,orequivalent;b)Mobilephase:0.1%aceticacid+Acetonitrile(15+85),flowrate:0.3mL/min;2.4.4.3JudgeofthequalitativeconfirmationrIftheretentiontimesofsamplechromatogrampeaksareconsisentwiththestandards,andafterbackgroundcompensation,therelativeionintensitysSN/T1590—2005Relativeintensity>20%to50%>10%to20%PermittedtolerancesAnalyteSudanⅡSudanⅢSudanNRetentiontiem/minlsolationMassDaughterlon232、93、156260、120、156336、197、156364、224、1563.1Limitofdeterminationpepperpasteandmeat.Recoveriesofdifferentkindsofcommoditiesareasfollowed.~91.4%;SudanVis92.8%～96.3%,whenfortifiedinchilllpowderattheconcentrationof1mg,kg,2mg/kg,5mg/kg,10mg/kg.Therecovery