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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准2004-12-01实施国家质量监督检验检疫总局I本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。1本标准规定了弓形虫病的间接血凝(IHA)试验操作方法。2.2可调式微量移液器及吸头。2.4弓形虫1HA诊断液(抗原效价≥1:1024),标准阴性对照血清(效价≤1:4),标准阳性对照血清(效价≥1:1024)。无菌采动物静脉血液约1mL～2mL,静置自然析出血清或待血液凝固后以60056℃水浴灭活30min,预冷，用健康公绵羊红细胞(按血清/红细胞体积比约1:1混匀)室温吸附2h25μL加入第三列孔中，如此4倍稀释至第6孔，混匀即1:4096弃去25μL(对于大量样品可只稀释至1:64见表1)。孔号234567血清稀释度(1:)44096稀释液空白对照稀释液/μL受检血清/μL诊断液/μL感作22℃~37℃静置2h～3h结果举例(样)十十十十十十十十—25结果判定c)50%的红细胞松散的凝集在孔底四周，其余50%未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈较大的圆d)25%的红细胞凝集在孔底四周，其余大部分未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很大的圆点，b)当阳性对照血清抗体滴度不低于1:1024,阴性对照血清各孔均为“一”(第一孔允许存在前c)受检血清抗体滴度≥1:64时判为阳性(如表1所示血清抗体滴度为1:64,判为阳性),≤1:16判为阴性。(规范性附录)A.1pH7.2,0.15mol/L磷酸盐缓冲液(PBS):磷酸氢二钠(Na₂HPO.·12H₂O)19.34g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.86g叠氮化钠(NaN₃)双蒸水(或去离子水)A.2无菌取98mL上述PBS溶液，加入2mL经56℃30min灭活的健康兔血清，混匀，4℃下保藏(规范性附录)A.1pH7.2,0.15mol/L磷酸盐缓冲液(PBS):磷酸氢二钠(Na₂HPO.·12H₂O)19.34g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.86g叠氮化钠(NaN₃)双蒸水(或去离子水)A.2

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