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第3章细胞工程细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的理论与方法,按照人们的需要,进行大规模的动物细胞和植物细胞或组织培养,以获得具有药用价值的重组蛋白质和植物次生代谢产物,以及产生新的物种或品质;或在细胞水平上对基因组进行遗传操作,改变细胞的分化状态及进行基因功能的操作动物、植物、微生物细胞工程2原核细胞原核细胞衣原体、支原体细胞壁核糖体细胞质细胞壁核糖体原核生物与真核生物细胞大小较小细胞质放线菌、细菌、蓝藻、衣原体>一个与合子具有相同遗传内容的体细胞具有产生完整生物个体的潜在能力称之为细胞的全能性。>已分化的植物细胞在合适的条件下具有潜在的发育成完整植株或个体>与植物和低等细胞相比,高等动物体细胞的发育潜能有显著差异,早期胚胎细胞具有发育的全能性,但随着分化程度的提高,细胞的发育47细胞工程的基本操作细胞、组织培养单克隆抗体与杂交瘤技术哺乳动物体细胞克隆动物细胞制药工程将动物细胞或组织从机体取出,分散成单个细胞,离散的动物活细胞在体外(模拟体内生长环境)人工无菌、适温和丰富的营养条件下,生长增殖,整个过程中细胞不出现分化,不再形成组织。原代细胞释后转到新的培养瓶的过程。传代细胞Hanks溶液冲洗,吸管轻轻吹打,低速离心,弃上清酶消化:胰蛋白酶、胶原酶实验室中常用的几种细胞系成纤维细胞小鼠宫颈癌上皮细胞人成纤维细胞叙利亚仓鼠上皮细胞袋鼠成肌细胞大鼠嗜铬细胞大鼠浆细胞小鼠骨髓瘤浆细胞小鼠卵巢细胞中国地鼠细胞培养技术日益完善,现在已经能够用新颖的微载体等系统对细胞进行大量培养,从而为工业上利用动物细胞培养技术生产疫苗、干扰素、激素和其他免疫试剂等开辟了一动物细胞培养基2.氨基酸:12种必需氨基酸、谷氨酰胺等基渗透压;悬浮培养要减少钙离子6.有机添加剂:复杂培养基中含有核苷、脂类及其他各种化合物7.激素和生长因素:添加血清即能满足。(小牛)血清及其对细胞的作用多种蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素、多种金属离子和各种生长因子、促贴附物质,不明成分生长液中血清使用浓度为10%~20%,维持液为2%~3%。常用培养基天然培养基、合成培养基、无血清培养基其中含有的精氨酸酶能使培养基中精氨酸降解●合成培养基:为了给细胞提供一个近似体内的生存环境又便于控优点:●无血清培养基:全部采用已知营养成分,包括血清无血清培养基处于研究阶段,难以推广。目前,绝大多数人工合成培养基使用时还需添加血清细胞培养的条件和要求适于生存的外界环境长环境,如稳定的温度(37°C)、稳定的CO₂水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。∠Z悬浮培养:悬浮培养:用于非贴壁依赖性细胞的培养,细胞在培养器中自由悬浮生长。如血液白细胞,淋巴组织细胞等。微生物发酵的基础上发展起来,又不等同于经典的微生物发酵培养。p95贴

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