GB 4789.4-2024 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载中

华

人

民

共

和

国

国

家

标

准学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—20244食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验国

家

市

场

国

家

市

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监

督

管

理

总

局

发

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- -

-学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4前 言本标准代替

GB4789.食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》。本标准与

GB4789.—2016相比,主要变化如下:———修改了设备和材料、培养基和试剂;———修改了检验程序和操作步骤;———修改了附录

A和附录B。学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验1

范围S本标准规定了食品中沙门氏菌(almonela)的检验方法。S本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2

设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。 212. 冰箱:

℃~8 21 3 4 42342. 恒温培养箱:6℃±1℃,恒温装置:2℃±1℃、 3 4 42342. 均质器。2. 振荡器。 152. 天平:感量 156 27892.

无菌锥形瓶:容量500mL、506 27892. 无菌量筒:容量50mL。2. 无菌均质杯、无菌均质袋。2. 无菌广口瓶:容量500mL。 1 1 11 912.0

无菌吸管:

mL(具0.1mL刻度)、0mL(具0.mL刻度)或微 1 1 11 912.1

无菌培养皿:直径60mm、0mm。 1 1 11 312.2

无菌试管:0mm×75mm、5mm×150mm、8mm×180mm

1 1 11 312.3

无菌小玻管:

mm×50mm。 1 111112.4

无菌接种环:0μL(直径约3mm)、

μL以及 1 111112.5

pH

计或精密pH

试纸。2.6

微生物生化鉴定系统。2.7

生物安全柜。3

培养基和试剂 B 113. 缓冲蛋白胨水(PW): B 11 22 33 B 44 553. 四硫磺酸钠 22 33 B 44 553. 氯化镁孔雀绿大豆胨(RVS)增菌液:见

A.。3. 亚硫酸铋(S)琼脂:见

A.。3.

HE琼脂:见

A.。 66 778 83. 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼 66 778 83. 三糖铁(TSI)琼脂:见

A.。3.

营养琼脂(NA):见

A.。1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4 993. 半固体琼脂:见

99 11 2 1p1 11 11 113.0

蛋白 11 2 1p1 11 11 113.1

尿素琼脂(H7.):见

A.1。3.2

氰化钾(KCN)培养基:见

A.2。3.3

赖氨酸脱羧酶试验培养基:见

A.3。3.4

糖发酵培养基:见

A.4。 11 111113.5

邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培养基: 11 111113.6

丙二酸钠培养基:见

A.6。3.7

沙门氏菌显色培养基。3.8

沙门氏菌诊断血清。3.9

生化鉴定试剂盒。4

检验程序沙门氏菌检验程序见图1。2学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4图1

沙门氏菌检验程序5

操作步骤15. 预增菌1无菌操作取25g(mL)样品,置于盛有225mLBPW

的无菌均质杯中,以8000r/min~10000r/min3分离琼脂平板菌落特征BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变色XLD琼脂菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心HE琼脂蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色沙门氏菌显色培养基符合相应产品说明书的描述学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4/ 8 2均质1min~2min,或置于盛有225mLBPW

的无菌均质袋内,用拍击式均质器拍打1/ 8 2对于液态样品,也可置于盛有225mLBPW

的无菌锥形瓶或其他合适容器中振荡混匀。如需调节pH时,用1molLNaOH

或

HCl调pH

至6.±0.。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶或其他合适容器内(如均质杯本身具有无孔盖或使用均质袋时,可不转移样品),置于36℃±1℃培养8h~18h。对于乳粉,无菌操作称取25g样品,缓缓倾倒在广口瓶或均质袋内225mLBPW

的液体表面,勿调节pH,也暂不混匀,室温静置60min±5min后再混匀,置于36℃±1℃培养16h~18h。冷冻样品如需解冻,取样前在40℃~45℃的水浴中解冻不超过15min,或在2℃~8℃冰箱缓慢2化冻不超过18h。25. 选择性增菌1轻轻摇动预增菌的培养物,移取0.mL转种于10mLRVS中,混匀后于42℃±1℃培养18h~124h。同时,另取1mL转种于10mLTTB中后混匀,低背景菌的样品(如深加工的预包装食品等)置于36℃±1℃培养18h~24h,高背景菌的样品(如生鲜禽肉等)置于42℃±1℃培养18h~24h。如有需要,可将预增菌的培养物在2℃~8℃冰箱保存不超过72h,再进行选择性增菌。35. 分离3B振荡混匀选择性增菌的培养物后,用直径3mm

的接种环取每种选择性增菌的培养物各一环,分别B划线接种于一个BS琼脂平板和一个

XLD琼脂平板(也可使用

HE琼脂平板、沙门氏菌显色培养基平板或其他合适的分离琼脂平板),于36℃±1℃分别培养40h~48h(S琼脂平板)或18h~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌显色培养基平板),观察各个平板上生长的菌落,是否符合表1的菌落特征。如有需要,可将选择性增菌的培养物在2℃~8℃冰箱保存不超过72h,再进行分离。表1

不同分离琼脂平板上沙门氏菌的菌落特征45. 生表1

不同分离琼脂平板上沙门氏菌的菌落特征4415.. 挑取4个以上典型或可疑菌落进行生化试验,这些菌落宜分别来自不同选择性增菌液的不同41离琼脂;也可先选其中一个典型或可疑菌落进行试验,若鉴定为非沙门氏菌,再取余下菌落进行鉴定。将典型或可疑菌落接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;同时接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂(或其他合适的非选择性固体培养基)平板,于36℃±1℃培养18h~24h。三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验的结果及初步判断见表2。将已挑菌落的分离琼脂平板于2℃~8℃保存,以备必要时复查。425.. 初步判断为非沙门氏菌者,直接报告结果。对疑似沙门氏菌者,从营养琼脂平板上挑取其纯424三糖铁赖氨酸脱羧酶初步判断斜面底层产气硫化氢KA+(-)+(-)+疑似沙门氏菌KA+(-)+(-)-疑似沙门氏菌AA+(-)+(-)+疑似沙门氏菌AA+/-+/--非沙门氏菌KK+/-+/-+/-非沙门氏菌注:K:产碱;A:产酸;+:阳性;-:阴性;+(-):多数阳性,少数阴性;+/-:阳性或阴性。尿素(pH7.2)氰化钾赖氨酸脱羧酶判断结果---甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清学鉴定结果)-++沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ(符合该亚种生化特性并要求血清学鉴定结果)+-+沙门氏菌个别变体(要求血清学鉴定结果)注:+:阳性;-:阴性。序号硫化氢靛基质尿素(pH7.2)氰化钾赖氨酸脱羧酶A1+---+A2++--+A3----+/-注:+:阳性;-:阴性;+/-:阳性或阴性。准ｏｍ标．ｃ下ｗｗ兔ｗ．ｂｚｆ学兔ｘｗ载4GB4789.—2024准ｏｍ标．ｃ下ｗｗ兔ｗ．ｂｚｆ学兔ｘｗ载4 2p养物接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(H7.)、氰化钾(KCN)培养基,也可在接种三糖铁 2p脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,接种以上3种生化试验培养基,于36℃±1℃培养18h~24h,按表3判定结果。表2

三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果及初步判断表3

生化试验结果鉴别表(一)4215... 符合表3中

A1者,为沙门氏菌典型表2

三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果及初步判断表3

生化试验结果鉴别表(一)4215... 符合表3中

A1者,为沙门氏菌典型的生化反应,进行血清学鉴定后报告结果。尿素、氰化钾不符合

A1,判断为非沙门氏菌并报告结果。表4

生化试验结果鉴别表(二)4225... 生化试验结果符合表3表4

生化试验结果鉴别表(二)4225... 生化试验结果符合表3中

A2者,补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌(靛基质阳性变体)的甘4235... 生化试验结果符合表3中

A3者,补做

ONPG试验。沙门氏菌的

ONPG试验结果为阴性423赖氨酸脱羧酶试验结果为阳性,但甲型副伤寒沙门氏菌的赖氨酸脱羧酶试验结果为阴性。生化试验结果符合沙门氏菌者,进行血清学鉴定。4245... 必要时,按表5进行沙门氏菌种和亚种的生化鉴424435.. 如选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统,用分离平板上典型或可疑菌落的纯培养物,43者根据表2初步判断为疑似沙门氏菌的纯培养物,按生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统的操作说5种肠道沙门氏菌邦戈尔沙门菌亚种肠道亚种萨拉姆亚种亚利桑那亚种双相亚利桑那亚种豪顿亚种印度亚种项目ⅠⅡⅢaⅢbⅣⅥⅤ卫矛醇++---d+ONPG(2h)--++-d+丙二酸盐-+++---明胶酶-+++++-山梨醇+++++-+氰化钾----+-+L(+)-酒石酸盐+------半乳糖醛酸-+-++++γ-谷氨酰转肽酶++-++++β-葡糖醛酸苷酶dd-+-d-黏液酸+++-(70%)-++水杨苷----+--乳糖---(75%)+(75%)-d-O1噬菌体裂解++-+-+d注:+:阳性;-:阴性;d:不定。准下学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标载4GB4789.—2024准下学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标载4明进行鉴定。55. 血清学鉴定5515.. 培养物自凝性检512 5一般采用琼脂含量为1.%~1.%的纯培养物进行玻片凝集试验。首先进行自凝性检查,在洁2 5的玻片上滴加一滴生理盐水,取适量待测菌培养物与之混合,成为均一性的浑浊悬液,将玻片轻轻摇动30s~60s,在黑色背景下观察反应(必要时用放大镜观察),若出现可见的菌体凝集,即认为有自凝性,反之无自凝性。对无自凝的培养物参照下面方法进行血清学鉴定。表5

沙门氏菌种和亚种的生化鉴定52 O5.. 多价菌体抗原(

)鉴定在玻片上划出两个约1cm×2cm

的区域,挑取待测表5

沙门氏菌种和亚种的生化鉴定52 O5.. 多价菌体抗原(

)鉴定部,在其中一个区域下部加一滴多价菌体(O)血清,在另一区域下部加入一滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针将两个区域内的待测菌培养物,分别与血清和生理盐水研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1min,并对着黑暗背景进行观察,与对照相比,出现可见的菌体凝集者为阳性反应。O

血清不凝集时,将菌株接种在琼脂含量较高(如2%~3%)的培养基上培养后再鉴定,如果是由于

Vi抗原的存在而阻止了O血清的凝集反应时,可挑取待测菌培养物在1mL生理盐水中制成浓菌液,在沸水中水浴20min~30min,冷却后再进行鉴定。注:不同厂商沙门氏菌诊断血清的组成、鉴定操作及结果判断,可能存在差异。使用商品化的沙门氏菌诊断血清进行血清学鉴定时,应遵循其产品说明。6O群第1相第2相ABBC1C2D(不产气的)D(产气的)E1E4E4ag,f,si,b,dk,v,r,cb,d,rdg,m,p,qh,vg,s,ti无无25,z152,5无无6,w,x无无表6表6

A~F各O群常见菌型

H抗原表7兔ｗｗｗ．ｂ兔ｚｆ学ｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024兔ｗｗｗ．ｂ兔ｚｆ学ｘｗ．ｃｏｍ标准下载453 H5.. 多价鞭毛抗原(

53 H2按5..的操作,将多价菌体(O)血清换成多价鞭毛(H)血清,进行多价鞭毛抗原(H)鉴定。H

抗2原发育不良时,将菌株接种在半固体琼脂平板的中央,待菌落蔓延生长时,在其边缘部分取菌鉴定;或将菌株接种在装有半固体琼脂的小玻管培养1代~2代,自远端取菌再进行鉴定。6615. 血清学分型(选做项目6615..

O抗原的鉴定用

A~F多价

O血清做玻片凝集试验,同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株,不能分型。11被A~F多价

O血清凝集者,依次用

O4、O3,和

O11因子血清做凝集试验。根11据试验结果,判定O群。被O3,0血清凝集的菌株,再用单因子血清做凝集试验,判定E1、4各亚群。根据O单因子血清的鉴定结果,确定每个O抗原成分。没有O单因子血清的,用两个

O复合因子血清进行鉴定。不被

A~F多价

O血清凝集者,先用9种多价

O血清鉴定,如有其中一种血清凝集,则用这种血清所包括的

O群血清逐一进行鉴定,以确定

O群。每种多价

O血清所包括的

O群血清如下:B

C

D

E

F 11

1

23

3

34

44

45

55B

C

D

E

F 11

1

23

3

34

44

45

55

56

6

66O多价2:13、6、7、8、1群O多价3:28、0、5、8、9群O多价4:40、1、2、3群O多价5:44、5、7、8群O多价6:50、1、2、3群O多价7:55、6、7、8群O多价8:59、0、1、2群O多价9:63、5、6、7群625..

H抗原的鉴62属于

A~F各

O群的常见菌型,依次用表6所述

H

因子血清鉴定第1相和第2相的

H

抗原。学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4不常见的菌型,先用8种多价

H

血清鉴定,如有其中一种或两种血清凝集,则再用这一种或两种血清所包括的各种

H

因子血清逐一进行鉴定,以确定第1相和第2相的

H

抗原。8种多价

H

血清所包括的

H

因子血清如下:bcdiH

多价1:a、bcdihenxenz

fgg sgpugpgq tgzryzz

lvl henxenz

fgg sgpugpgq tgzryzz

lvl lz

lz

lz2151617zH

多价3:k、、、、10、,、,w、,13、,28、,40H

多价4:1,、,、,、,、64

z

z

z

z

z

z

z

z

zz

z

zz

z4

z

z

z

z

z

z

z

z

zz

z

zz

z

zH

多价6:z39、41、42、44H

多价7:z52、53、54、55z

z

z

zH

多价8:z56、57z

z

z

z每个

H

抗原成分的最后确定均应根据

H

单因子血清的鉴定结果,没有

H

单因子血清的要用两个H

复合因子血清进行鉴定。检出第1相

H

抗原而未检出第2相

H

抗原的或检出第2相

H

抗原而未检出第1相

H

抗原的,要用以下位相变异的方法鉴定其另一相。单相菌不必做位相变异鉴定。6215... 简易平621将半固体琼脂平板烘干表面水分,挑取已知相的

H

因子血清1环,滴在半固体平板表面,正置平板片刻待血清吸收,在滴加血清部位的中央点种待测菌株,翻转平板置于36℃±1℃培养后,在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌鉴定。6225... 小玻6221将1mL~2mL半固体琼脂熔化后冷却至48

℃左右,加入已知相的

H

因子血清0.5mL~10.mL,混匀后装入3mm×50mm

两端开口的小玻管内。待琼脂凝固后,用接种针挑取待测菌,接种于小玻管一端的琼脂内。将小玻管平放在平皿内,置于36℃±1℃培养,并采取保湿措施以防琼脂中水分蒸发而干缩。每天观察结果,待另一相细菌解离后,从小玻管另一端挑取细菌进行鉴定。培养基内血清的浓度应有适当的比例,过高时细菌不能生长,过低时同一相细菌的动力不能抑制。一般按原血清26231∶(00~800)的量加26235... 小套管法1在装有大约10mL半固体琼脂培养基的试管中,插入3mm×50mm

两端开口的小玻管(下端开1口要留一个缺口,不要平齐),小玻管的上端应高出于培养基的表面,21

℃高压灭菌15min后备用。临用时加热熔化,并冷却至48℃左右,挑取已知相的

H

因子血清1环,加入小玻管中的培养基内,略加搅动使其混匀。待琼脂凝固后,在小玻管中的半固体表层内接种待测菌,于36℃±1℃培养,每天观察结果,待另一相细菌解离后,从小玻管外的半固体表面取菌鉴定,或将所取的菌转种1%琼脂斜面,于6336℃±1℃培养后再进行鉴定635..

Vi抗原的鉴定用

Vi因子血清进行鉴定。已知具有

Vi抗原的菌型有:伤寒沙门氏菌,丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。8学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4GB4789.—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4645.. 血清型的判64根据血清学分型鉴定的结果,按照附录B或有关沙门氏菌属抗原表判定血清型。6

结果与报告综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25g(mL)样品中检出或未检出沙门氏菌。9．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ兔ｗ学兔ｏｍ标准下载4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ兔ｗ学兔ｏｍ标准下载4附 录

A培养基和试剂 B111A. 缓冲蛋白胨水 B111A.. 成分005蛋白胨 10.g005氯化钠 5.g磷酸氢二钠(含12个结晶水) 9.g磷酸二氢钾 1.g蒸馏水 1000mL12A.. 制12将各成分加入蒸馏水(或其他符合要求的实验用水,下同)中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH,2 2121℃高压灭菌15min。灭菌后的培养基在25℃的pH

为7.2 2 T221A. 四硫磺酸盐煌绿增菌液 T221A.. 基础液05750蛋白胨 9.g05750牛肉浸粉 4.g氯化钠 2.g碳酸钙 40.g硫代硫酸钠(含5个结晶水) 50.g牛胆盐 5.g蒸馏水 1000mL将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解。煮沸,无须高压灭菌。煮沸后的培养基在25℃的pH6 222为6 222A.. 碘溶液0碘化钾 25.g0碘 20.g蒸馏水 100mL将碘化钾溶解于少量的蒸馏水中,再加入碘,振摇至碘全部溶解。加蒸馏水至100mL,转入棕色瓶内,塞紧瓶塞冷藏贮存。23A.. 煌绿溶235煌绿 0.g5蒸馏水 100mL将煌绿在蒸馏水中溶解后,存放在冷暗处不少于1d。24A.. 制24基础液 1000mL10ｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｏｍ标准下载4GB4789.—2024ｘｗ．ｃ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｏｍ标准下载40煌绿溶液 2.mL0碘溶液 20.mL使用的当天,在冷却后的基础液中以无菌操作加入煌绿溶液摇匀,加入碘溶液,再摇匀,分装到无菌试管中。加入煌绿和碘液的培养基当天使用,且不能再次加热。3 (31A. 氯化镁孔雀绿大豆胨

RVS)3 (31A.. 成分52216大豆蛋白胨 4.g52216氯化钠 7.g磷酸二氢钾 1.6g磷酸氢二钾 0.8g氯化镁(含6个结晶水) 28.g孔雀绿 0.36g蒸馏水 1000mL32A.. 制321将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH,定量分装于试管中,15

℃高压灭菌12 215min。灭菌后的培养基在25℃的pH

为5.2 2 B441A. 亚硫酸铋(S B441A.. 成分0030000蛋白胨 10.g0030000牛肉浸粉 5.g葡萄糖 5.g硫酸亚铁 0.g磷酸氢二钠 4.g煌绿 0.25g柠檬酸铋铵 2.g亚硫酸钠 6.g琼脂 18.g蒸馏水 1000mL42A.. 制42将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH。煮沸,勿过度加热,勿高压灭菌。冷却5 2至48℃±2℃倾注平皿,煮沸后的培养基在25℃的pH

为7.5 2注:本培养基应于临用前一天制备并倾注平皿,在室温暗处保存,第二天使用。制备完成的培养基保存时间超过48h会降低其选择性。551A.

HE琼551A.. 成分00蛋白胨 12.g00牛肉浸粉 3.g

11．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ学兔ｏｍ标准下载4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ学兔ｏｍ标准下载4000088010乳糖 12.g000088010蔗糖 12.g水杨苷 2.g胆盐 20.g氯化钠 5.g硫代硫酸钠 6.g柠檬酸铁铵 0.g脱氧胆酸钠 2.g酸性品红 0.g溴麝香草酚蓝 0.64g琼脂 18.g蒸馏水 1000mL52A.. 制52将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH。煮沸,勿过度加热,勿高压灭菌。冷却5 2至48℃±2℃倾注平皿,煮沸后的培养基在25℃的pH

为7.5 2 X661A. 木糖赖氨酸脱氧胆盐(LD X661A.. 成分0075558800酵母浸粉 3.g0075558800L-赖氨酸 5.g木糖 3.5g乳糖 7.g蔗糖 7.g脱氧胆酸钠 2.g柠檬酸铁铵 0.g硫代硫酸钠 6.g氯化钠 5.g酚红 0.8g琼脂 15.g蒸馏水 1000mL62A.. 制62将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH。煮沸,勿过度加热,勿高压灭菌。冷却4 2至48℃±2℃倾注平皿,煮沸后的培养基在25℃的pH

为7.4 2 T771A. 三糖铁(SI T771A.. 成分0蛋白胨 20.g0牛肉浸粉 5.g乳糖 10.g蔗糖 10.g12．ｃｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔ｗ学兔ｏｍ标准下载4GB4789.—2024．ｃｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔ｗ学兔ｏｍ标准下载400220葡萄糖 1.g00220酚红 0.25g氯化钠 5.g硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.g硫代硫酸钠 0.g琼脂 12.g蒸馏水 1000mL72A.. 制7215 4 2将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH。定量分装于试管中,15℃高压15 4 215min。灭菌后制成斜面,底层深度不小于2.cm。灭菌后的培养基在25℃的pH

为7.±0.。8 (81A. 营养琼脂8 (81A.. 成分00蛋白胨 10.g00牛肉浸粉 3.g氯化钠 5.g琼脂 15g蒸馏水 1000mL82A.. 制821将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH,21℃高压灭菌15min。灭菌后的培养13 2基在25℃的pH

为7.3 2991A. 半固体琼991A.. 成分000 5蛋白胨 000 5牛肉浸粉 3.g氯化钠 5.g琼脂 3.g~6.g蒸馏水 1000mL92A.. 制921将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH,21℃高压灭菌15冷却至48℃±14 22℃倾注平皿,或分装小玻管。灭菌后的培养基在25℃的pH为7.4 211

11

11A.0

蛋白胨水、11

11

11A.0. 蛋白胨水A.0.. 成分0蛋白胨 10.g0氯化钠 5.g

13．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ学兔兔ｗｏｍ标准下载4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ学兔兔ｗｏｍ标准下载40DL-色氨酸 1.g0蒸馏水 1000mL1

12A.0..1

121将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH。分装小试管,21℃高压灭菌15min。14 2灭菌后的培养基在25℃的pH

为7.4 21

2A.0. 靛基质1

2 01

21 01

22A.0.. 柯凡克试剂:将5.g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中, 01

21 01

22A.0.. 欧-波试剂:将1.g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸20mL。1

3A.0. 试验1

33 55 p1 21

1挑取少量培养物接种在蛋白胨水中,6℃±1℃培养24h~48h。加入柯凡克试3 55 p1 21

1摇试管,试剂层呈深红色者为阳性。或取欧-波试剂约0.mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,液面接触处呈玫瑰红色者为阳性。A.1

尿素琼脂(H7.)A.1. 成分0000蛋白胨 1.g0000氯化钠 5.g葡萄糖 1.g磷酸二氢钾 2.g酚红 0.12g琼脂 20.g蒸馏水 900mL20%尿素溶液 100mL1

2A.1. 1

2除尿素外,将其他成分加入900mL蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH。121℃高压灭菌15min。冷却至48℃±2℃,加入100mL经过滤除菌的20%尿素溶液,分装于无菌试管内制成斜面。2 2灭菌后的培养基在25℃的pH

为7.2 21

3A.1. 试验1

33挑取培养物接种在尿素琼脂斜面上,6℃±1℃培养24h,观察结果。尿素琼脂斜面变为玫瑰红3色者为尿素酶阳性。注:也可采用不含琼脂的尿素培养基。1 (1

1A.2

氰化钾

KCN1 (1

1A.2. 成分0蛋白胨 10.g0氯化钠 5.g14．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ学兔兔ｗｏｍ标准下载4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ学兔兔ｗｏｍ标准下载4265磷酸二氢钾 0.25g265磷酸氢二钠 5.4g蒸馏水 1000mL0.%氰化钾 20.mL1

2A.2. 1

210 5将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,21℃高压灭菌15min。充分冷却后10 5每100mL培养基加入2.mL新制备的0.%氰化钾溶液(最后浓度为1∶10000),分装于无菌试管内,立刻用无菌管塞塞紧。同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装后备用。1

3A.2. 试验1

35将待测菌的纯培养物用生理盐水配制成0.

麦氏浊度的菌悬液,滴加2滴~3滴菌悬液于氰化钾5(KCN)培养基,混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封。另外滴加2滴~3滴菌悬液于对照培养基。在36℃±1℃培养24h~48h,观察结果。氰化钾(KCN)培养基内有细菌生长者为阳性(不抑制),培养48h无细菌生长者为阴性(抑制)。注:氰化钾是剧毒药,操作时应戴手套,避免沾染。试验失败的主要原因是密封不严而造成假阳性反应。11

1A.3

赖氨酸脱羧酶试验培11

1A.3. 成分0000蛋白胨 5.g0000酵母浸粉 3.g葡萄糖 1.g溴甲酚紫 0.2g蒸馏水 1000mLL-赖氨酸或DL-赖氨酸 5.g或10.g1

2A.3. 1

28除赖氨酸以外的成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,加入L-赖氨酸或

DL-赖氨酸,对照培养基不8加赖氨酸。必要时调节pH。分装后115℃高压灭菌15min。灭菌后的培养基在25℃的pH

为6.±20.。21

3A.3. 试验1

3挑取培养物接种于赖氨酸脱羧酶试验培养基,混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封。36

℃±1℃培养18h~24h,观察结果。培养基呈紫色者为赖氨酸脱羧酶阳性,培养基呈黄色者为赖氨酸脱羧酶阴性。对照管应为黄色。11

1A.4

糖发酵培11

1A.4. 成分000蛋白胨 10.g000牛肉浸粉 5.g氯化钠 3.g磷酸氢二钠(含12个结晶水) 2.g15ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ兔ｗ兔学ｏｍ标准下载4GB4789.—2024ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ兔ｗ兔学ｏｍ标准下载4溴麝香草酚蓝 0.25g蒸馏水 1000mL1

2A.4. 1

21将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH,21℃高压灭菌15min。冷却后,加入15 4 2终浓度为0.%~1%的无菌糖溶液,分装。灭菌后的培养基在25℃的pH

5 4 21

3A.4. 试验1

33挑取少量培养物接种于糖发酵管,6℃±1℃培养24h~48h,观察结果。培养基变为黄色者为阳3性。对于培养48h后,怀疑为乳糖迟缓发酵者,可继续培养至3d~5d再观察结果。1 (A.5

邻硝基酚β-D半乳糖苷

ONPG)培1 (1

1A.5. 1

1/ 5p 5p邻硝基酚β-D半乳糖苷/ 5p 5p0.1molL磷酸钠缓冲液(H7.) 10.mL1%

蛋白胨水(H7.) 30.mL1

2A.5. 1

2将

ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,过滤除菌后分装于无菌的小试管内,塞紧管塞。1

3A.5. 试验1

33挑取培养物接种于

ONPG培养基,6℃±1℃培养3h观察结果,培养基变为黄色者,为β-半乳糖3苷酶阳性。若培养基不变色,继续培养至24h,培养基变黄者,为β-半乳糖苷酶阳性,否则为阴性。11

1A.6

丙二酸钠培11

1A.6. 成分006400酵母浸粉 1.g006400硫酸铵 2.g磷酸氢二钾 0.g磷酸二氢钾 0.g氯化钠 2.g丙二酸钠 3.g溴麝香草酚蓝 0.25g蒸馏水 1000mL1

2A.6. 1

2将各成分加入蒸馏水中,搅匀后加热溶解,必要时调节pH,分装后121℃高压灭菌15min。灭菌8 2后的培养基在25℃的pH

为6.8 21

3A.6. 试验1

33用新鲜培养物接种于丙二酸钠培养基,6℃±1℃培养48h,观察结果。培养基变蓝色者为阳性。316菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相A

群甲型副伤寒沙门氏菌S.ParatyphiA1,2,12a[1,5]B

群基桑加尼沙门氏菌S.Kisangani1,4,[5],12a1,2阿雷查瓦莱塔沙门氏菌S.Arechavaleta4,[5],12a1,7马流产沙门氏菌S.Abortusequi4,12e,n,xa乙型副伤寒沙门氏菌S.ParatyphiB1,4,[5],12b1,2利密特沙门氏菌S.Limete1,4,12,[27]b1,5阿邦尼沙门氏菌S.Abony1,4,[5],12,[27]be,n,x维也纳沙门氏菌S.Wien1,4,12,[27]bl,w伯里沙门氏菌S.Bury4,12,27cz6斯坦利沙门氏菌S.Stanley1,4,[5],12,[27]d1,2圣保罗沙门氏菌S.Saintpaul1,4,[5],12e,h1,2里定沙门氏菌S.Reading1,4,[5],12e,h1,5彻斯特沙门氏菌S.Chester1,4,[5],12e,he,n,x德尔卑沙门氏菌S.Derby1,4,[5],12f,g[1,2]阿贡纳沙门氏菌S.Agona1,4,[5],12f,g,s[1,2]埃森沙门氏菌S.Essen4,12g,m加利福尼亚沙门氏菌S.California4,12g,m,t[z67]金斯敦沙门氏菌S.Kingston1,4,[5],12,[27]g,s,t[1,2]布达佩斯沙门氏菌S.Budapest1,4,12,[27]g,t鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium1,4,[5],12i1,2拉古什沙门氏菌S.Lagos1,4,[5],12i1,5布雷登尼沙门氏菌S.Bredeney1,4,12,27l,v1,7基尔瓦沙门氏菌ⅡS.KilwaⅡ4,12l,we,n,x海德尔堡沙门氏菌S.Heidelberg1,4,[5],12r1,2印地安纳沙门氏菌S.Indiana1,4,12z1,7斯坦利维尔沙门氏菌S.Stanleyville1,4,[5],12,[27]z4,z23[1,2]伊图里沙门氏菌S.Ituri1,4,12z101,51表1表B. 常见沙门氏菌抗原表17下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载4GB4789.—2024下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载4附 录 B常见沙门氏菌抗原表1常见沙门氏菌抗原见表B.。1菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相C1

群奥斯陆沙门氏菌S.Oslo6,7,14ae,n,x爱丁保沙门氏菌S.Edinburg6,7,14b1,5布隆方丹沙门氏菌ⅡS.BloemfonteinⅡ6,7b[e,n,x]:z42丙型副伤寒沙门氏菌S.ParatyphiC6,7[Vi]c1,5猪霍乱沙门氏菌S.Choleraesuis6,7c1,5猪伤寒沙门氏菌S.Typhisuis6,7c1,5罗米他沙门氏菌S.Lomita6,7e,h1,5布伦登卢普沙门氏菌S.Braenderup6,7,14e,he,n,z15里森沙门氏菌S.Rissen6,7,14f,g蒙得维的亚沙门氏菌S.Montevideo6,7,14g,m,[p],s[1,2,7]里吉尔沙门氏菌S.Riggil6,7g,[t]奥雷宁堡沙门氏菌S.Oranienburg6,7,14m,t[z57]奥里塔蔓林沙门氏菌S.Oritamerin6,7i1,5汤卜逊沙门氏菌S.Thompson6,7,14k1,5康科德沙门氏菌S.Concord6,7l,v1,2伊鲁木沙门氏菌S.Irumu6,7l,v1,5姆卡巴沙门氏菌S.Mkamba6,7l,v1,6波恩沙门氏菌S.Bonn6,7l,ve,n,x波茨坦沙门氏菌S.Potsdam6,7,14l,ve,n,z15格但斯克沙门氏菌S.Gdansk6,7,14l,vz6维尔肖沙门氏菌S.Virchow6,7,14r1,2婴儿沙门氏菌S.Infantis6,7,14r1,5巴布亚沙门氏菌S.Papuana6,7re,n,z15巴雷利沙门氏菌S.Bareilly6,7,14y1,5哈特福德沙门氏菌S.Hartford6,7ye,n,x三河岛沙门氏菌S.Mikawasima6,7,14ye,n,z15姆班达卡沙门氏菌S.Mbandaka6,7,14z10e,n,z15耶路撒冷沙门氏菌S.Jerusalem6,7,14z10l,w田纳西沙门氏菌S.Tennessee6,7,14z29[1,2,7]C2

群习志野沙门氏菌S.Narashino6,8ae,n,x下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载4GB4789.—2024下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载41表B1表B. 常见沙门氏菌抗原表

(续)菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相名古屋沙门氏菌S.Nagoya6,8b1,5加瓦尼沙门氏菌S.Gatuni6,8be,n,x慕尼黑沙门氏菌S.Muenchen6,8d1,2曼哈顿沙门氏菌S.Manhattan6,8d1,5纽波特沙门氏菌S.Newport6,8,20e,h1,2科特布斯沙门氏菌S.Kottbus6,8e,h1,5茨昂威沙门氏菌S.Tshiongwe6,8e,h[e,n,z15]林登堡沙门氏菌S.Lindenburg6,8i1,2塔科拉迪沙门氏菌S.Takoradi6,8i1,5波那雷恩沙门氏菌S.Bonariensis6,8ie,n,x利奇菲尔德沙门氏菌S.Litchfield6,8l,v1,2病牛沙门氏菌S.Bovismorbificans6,8,20r,[i]1,5查理沙门氏菌S.Chailey6,8z4,z23[e,n,z15]哈达尔沙门氏菌S.Hadar6,8Z10e,n,xC3

群巴尔多沙门氏菌S.Bardo8e,h1,2依麦克沙门氏菌S.Emek8,20g,m,s肯塔基沙门氏菌S.Kentucky8,20iz6科瓦利斯沙门氏菌S.Corvallis8,20z4,z23[z6]D

群仙台沙门氏菌S.Sendai1,9,12a1,5伤寒沙门氏菌S.Typhi9,12[Vi]d塔西沙门氏菌S.Tarshyne9,12d1,6伊斯特本沙门氏菌S.Eastbourne1,9,12e,h1,5以色列沙门氏菌S.Israel9,12e,he,n,z15肠炎沙门氏菌S.Enteritidis1,9,12g,m[1,7]布利丹沙门氏菌S.Blegdam9,12g,m,q沙门氏菌ⅡSalmonella

Ⅱ1,9,12g,m,[s],t[1,5,7]都柏林沙门氏菌S.Dublin1,9,12[Vi]g,p芙蓉沙门氏菌S.Seremban9,12i1,5巴拿马沙门氏菌S.Panama1,9,12l,v1,5戈丁根沙门氏菌S.Goettingen9,12l,ve,n,z15爪哇安纳沙门氏菌S.Javiana1,9,12l,z281,51表1表B. 常见沙门氏菌抗原表

(续)19下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载4GB4789.—2024下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载4菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相鸡沙门氏菌S.Gallinarum1,9,12E1

群奥凯福科沙门氏菌S.Okefoko3,10cz6瓦伊勒沙门氏菌S.Vejle3,{10}{15}e,h1,2明斯特沙门氏菌S.Muenster3,{10}{15}{15,34}e,h1,5鸭沙门氏菌S.Anatum3,{10}{15}{15,34}e,h1,6纽兰沙门氏菌S.Newlands3,{10}{15,34}e,he,n,x火鸡沙门氏菌S.Meleagridis3,{10}{15}{15,34}e,hl,w雷根特沙门氏菌S.Regent3,10f,g,[s][1,6]西翰普顿沙门氏菌S.Westhampton3,{10}{15}{15,34}g,s,t阿姆德尔尼斯沙门氏菌S.Amounderness3,10i1,5新罗歇尔沙门氏菌S.Newrochelle3,10kl,w恩昌加沙门氏菌S.Nchanga3,{