理化和微生物检验项目操作步骤

使用器具/药剂水分测定(直接干燥9.3-20161先取面包中间部分放入捣碎机进行捣碎/或者使用剪刀剪碎捣碎机/剪刀2取出捣碎的样品3-3.5g放入扁形称量瓶中，记录皿器加样品的重量万分一分析天平/扁形称量瓶3不需加盖，直接放入100-105℃恒温干燥箱内，干燥4小时取出4再放干燥器内冷却30分钟，称量并记录万分一分析天平/干燥器5然后再放入100-105℃恒温干燥箱内，干燥1小时取出6再放干燥器内冷却30分钟，称量并记录，两次记录误差不得超过2mg，如有超过继续干燥，直至结果不超过2mg万分一分析天平/干燥器7确定干燥数据无偏差时，直接进行记录计算公式:皿+样重减去烘干后的重量除以干燥前的样重乘以100等于结果计算公式1先取面包中间部分产品捣碎捣碎机2将捣碎的样品取25g万分一分析天平3移入容量瓶定容、摇匀、静置10min4快速滤纸/漏斗/200ml三角瓶5加酚酞2-8滴胶头滴管/酚酞指示剂6用氢氧化钠滴定至样品颜色微红在30秒不褪色氢氧化钠/碱管7直接读取滴定数据/记录计算酸度值1药品配制根据平板计数琼脂说明进行配制，将药品溶于蒸馏水中充分搅拌生理盐水(蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g)平板计数琼脂/无菌水2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121℃,时间20分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具:剪刀、镊子、移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌4杀完菌后放入46土1℃水浴锅中保温水浴锅5进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒6使用电子秤称量面包表面和中间部分样，样重:25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子7将25g的面包放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/三角瓶(10-1)8从步骤7中吸1ml到9ml的无菌水，摇匀无菌水/试管(10-²)9从步骤8中吸1ml到9ml的无菌水，摇匀无菌水/试管(10-3)3个稀释度各吸取1ml到2个培养皿中，(需要在酒精灯上操作)培养皿/酒精灯做好记号(日期/样品名称/稀释倍数)可擦拭记号笔倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可(需要在酒精灯上操作)琼脂/培养皿/酒精灯待琼脂完全凝固后，翻过来放入36士1℃培养箱中，培养48小时36士1℃培养箱培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数计算公式:两个培养皿菌群的生长个数之和，除以2乘以稀释倍数等于结果，并及时记录法1药品配制根据月桂基硫酸盐蛋白钛和煌绿乳糖胆盐说明进行配制，将药品溶于蒸馏水中，充分搅拌。LST肉汤(分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml)BGLB肉他(分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml)生理盐水(蒸馏水月桂基硫酸盐蛋白钛(LST)/煌绿乳糖胆盐(BGLB)/无菌水2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121℃,时间15分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具:剪刀、镊子、移液管、试管、试管架、橡胶塞、小捯管高压灭菌锅/器具灭菌4进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒5使用电子秤称量样品表面的样，样重:25g，电子秤表面需放一张滤纸电子秤/滤纸/剪刀/镊子6将25g的样品放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/样品7无菌水/试管(102)8无菌水/试管(10-³)93个稀释度各吸取1ml，(每个稀释度3管)到有LST肉汤试管中，盖好塞子(需要在酒精灯上操作)LST的试管/酒精灯做好记号(日期/样品名称/稀释倍数)可擦拭记号笔36±1℃培养箱不产气报告为大肠菌群阴性，若产气进行步骤13结果判定产气就从产气的LST中接种1环到BGLB中放入36土1℃培养48+2况℃培养箱结果判定1药品配制根据结品紫中性红胆盐琼脂说明进行配制，将药品溶于蒸馏水中，充分搅拌，煮沸2min。无菌生理盐水(蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g，高压灭菌)。结晶紫中性红胆盐琼脂/无菌水2辅助器具:剪刀、镊子、移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌法3放入46±1℃水浴锅中保温水浴锅4进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒5使用电子秤称量面包表面和中间部分样，样重:25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子6将25g的面包放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/三角瓶(10-1)7从步骤6中吸1ml到9ml的无菌水，摇匀无菌水/试管(10-2)8从步骤7中吸1ml到9ml的无菌水，摇匀无菌水/试管(10-3)93个稀释度各吸取1ml到2个培养皿中，(需要在酒精灯上操作)培养皿/酒精灯做好记号(日期/样品名称/稀释倍数)可擦拭记号笔倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀,待琼脂凝固后，再加3-4ml琼脂覆盖平板表面。(需要在酒精灯上操作)琼脂/培养皿/酒精灯待琼脂完全凝固后，翻过来放入36士1℃培养箱中，培养24小时36±1℃培养箱培养时间到了后取出，查看平板上的典型和可疑大肠菌群菌落并计煌绿乳糖胆盐BGLB肉汤:根据药品说明配制后，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml.高压灭菌管/试管将步骤13中的平板上挑取10个不同类型的菌落。移种于BGLB肉汤内，36+1℃培养24-48小时，观察产气情况，接种环培养时间到了后取出，查看产气管数。计算公式:阳性试管比例*步骤13的平板菌落数*稀释倍数=大肠菌群数/g(ml)1药品配制根据马铃薯葡萄糖琼脂说明进行配制，将药品溶于蒸馏水中，充分搅拌。生理盐水(蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g)马铃薯葡萄糖琼脂/无菌水2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121℃,时间15分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具:剪刀、镊子、移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌4杀完菌后放入46土1℃水浴锅中保温水浴锅5进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒6使用电子秤称量面包表面和中间部分样，样重:25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子7将25g的面包放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/三角瓶(10-1)8从步骤7中吸1ml到9ml的无菌水，摇匀无菌水/试管(10-2)9从步骤8中吸1ml到9ml的无菌水，摇匀无菌水/试管(10-3)3个稀释度各吸取1ml到2个培养皿中，(需要在酒精灯上操作)培养皿/酒精灯做好记号(日期/样品名称/稀释倍数)可擦拭记号笔倒入琼脂20-25ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可(需要在酒精灯上操作)琼脂/培养皿/酒精灯琼脂完全凝固后，正置平板，放入28士1℃霉菌培养箱中，培养120小时28士1℃霉菌培养箱培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数计算公式:两个培养皿菌群的生长个数之和，除以2乘以稀释倍数等于结果，并及时记录菌(参考1药品配制根据结品紫中性红胆盐琼脂和平板计数琼脂说明进行配制结晶紫中性红胆盐琼脂/平板计数琼脂2使用高压灭菌锅进行杀菌处理。杀菌温度121℃,时间20分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具:移液管、空皿将已灭菌的培养基分别倒入空皿(需要在酒精灯上操作)高压灭菌锅/器具灭菌/酒精灯4进入生产车间操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒5培养皿打开后按照沉降点位置放置10-15分钟，然后按照先后顺序盖好皿器收起来，并做好沉降占位置标识在皿器上空皿/可擦拭记号笔6收起来后，放在杀菌好的储物箱内，避免污染到采样好的皿器储物箱7将取好的样带回化验室，分别放入培养箱中培养(361℃恒温培养箱中，培养48小时)36土1℃培养箱8培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数及时记录，结果以每平方厘米含菌量计按内控标准执行手部/工1药品配制根据结晶紫中性红胆盐琼脂和平板计数琼脂说明进行配制结品紫中性红胆盐琼脂/平板计数琼脂2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121℃,时间20分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具:镊子、移液管、空皿、装有9ml无菌水和棉签的试管高压灭菌锅/器具灭菌/试管4进入生产车间操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒5镊子将棉签取出，在操作人员手部(掌心/手指)/工作服/设备进行擦拭镊子/试管/棉签6范围尽量将手指/手掌工作服/设备部位都擦拭到位，擦拭完后将棉签塞回试管内7盖好橡胶塞前将手部接触部分的棉签棒折掉，把折掉不需要的棉签棒丢弃垃圾桶，做好涂抹人员姓名/工作服/设备部位标识在皿器上8将取好的样