DB35T 73-1996血浆中去甲肾上腺素和肾上腺素的测定方法

福建省地方标准血浆中去甲肾上腺素和肾上腺素的测定方法1996一04—0发布1996-o5—0实施去甲肾上腺素及肾上腺素是机体产生的调节代谢反应的一类生物胺，是重要的神经递质，对心血管的生理活动能产生直接影响。其血浆浓度测定可以为临床嗜铬细胞瘤等疾病的诊断提供有力依据。嗜铬细胞瘤分泌大量儿茶酚胺，作用于肾上腺素受体，引起严重甲肾上腺素及肾上腺素可直接损害心肌，可诱致心衰，导致心肌梗塞。目前国内尚无关于血中去甲肾上腺素及肾上腺素含量测定的现成标准可循。故我们特编制本标准，以利开展血中去甲肾上腺素及肾上腺素含量的测定。本标准由福建省卫生厅提出。本标准起草单位：福建省医学科学研究所。本标准主要起草人：郑玉聪谢狄霖福建省地方标准和肾上腺素的测定方法DB35/T73-1996本标准规定了用荧光法测定血浆去甲肾上腺素及肾上腺素。本标准适用于血浆去甲肾上腺素及肾上腺素的测定。3.1去甲肾上腺素(Dl-Noradrenaline,SERVA)及肾上3.2偏亚硫酸钠3.5抗坏血酸：0.1%3.6四硼酸钠一盐酸缓冲液(pH7.0):0.1mol/l3.7铁氰化钾：0.25%3.8氯化铜：0.002%3.92-巯基乙醇3.12冰醋酸(重蒸)福建省技术监督局1996-04-0|批准1996-05-0|实施3.15氧化铝3.16树脂AmberliteCG-50(SIGMA)4.仪器与设备4.1MPF-4型荧光分光光度计4.2玻璃层析柱A,B4.4低速离心机5.分析步骤5.1血浆处理：取静脉血5～6ml注入预冷的肝素化试管内，2500rpm离心5分钟，每1.0ml血浆加偏亚硫酸钠1mg。5.2提取与洗脱5.2.1取血浆2.0ml加5%乙二胺四乙酸二钠5.0ml,10%偏亚硫酸钠0.2ml,氧化铝500mg及水17.8ml,加0.25mol/I碳酸钠使pH达8.4～8.5,搅拌7min,倾去上清。将氧化铝倾入玻璃层析柱A内，用10ml水洗涤，用6.0ml的0.05mol/l过氯酸洗脱，前4滴弃去，其余的洗脱液收集在已放有5%乙二胺四乙酸二钠0.1ml及0.1%抗坏血酸0.1ml的烧杯中，滴速7-9滴/min。5.2.2将树脂AmberliteCG50倾入玻璃层析柱B内，树脂高约3cm,用5ml水洗柱。洗脱液用0.1mol/l碳酸钠调节pH至6.0～6.2后上柱，滴速6～7滴/min,然后再用5ml水洗柱。再以四硼酸钠一盐酸缓冲液(pH7.0)1.5ml洗脱，开始2滴弃去，将收集到的标本洗脱液吸取1.2ml置10ml玻璃磨口试管中。另外吸取四硼酸钠—盐酸缓冲液1.2ml作为试剂空白液。5.3标准工作液配制：取去甲肾上腺素和肾上腺素标准试剂分别用0.01ml/l盐酸配制成浓度为10ng/ml的溶液，再分别用四硼酸钠一盐酸缓冲液稀释成浓度为1ng/ml的去甲肾上腺素和肾上腺素的标准工作液，并分别吸取1.2ml待用。5.4氧化：去甲肾上腺素和肾上腺素的标准工作液、标本洗脱液及试剂空白液均按以下步骤氧化：加0.01mol/l盐酸0.12ml及0.002%氯化铜0.06ml,加0.25%铁氰化钾0.06ml氧化3min后，加10%2-巯基乙醇0.06ml。在10-20秒内加10mol/l氢氧化钠0.24ml。5-7分钟内加冰醋酸0.18ml,此时pH达5.30～5.45。50分钟后进行荧光测定。5.5测定：两组激发/发射波长分别为410nm/500nm及450nm/500nm,狭缝均为10nm,激发滤光板用UV-35,发射滤光板用Y43,电压为750V。F₁及F₂为410nm/500nm及450nm/500nm时的荧光值。N₁及N₂为标准去甲肾上腺素在410nm/500nm