微生物学检验志贺菌属

志贺菌属是引起人类细菌性痢疾的病原菌包括四群,共44个血清型

A群--痢疾志贺菌

B群--福氏志贺菌

C群--鲍氏志贺菌D群--宋内志贺菌形态染色革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、无鞭毛，多数菌株有菌毛志贺菌培养特性兼性厌氧、营养要求不高在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落SS平板－－无色菌落Mac平板－－无色菌落EMB平板－－无色菌落宋内志贺菌多呈扁平、R型菌落，个别菌株可迟分解乳糖

生化反应氧化酶试验（－）分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株迟分解乳糖或不分解乳糖）KIA：KA－－MIU：－＋/－－IMViC：－/＋＋－－除A群外，均能发酵甘露醇抗原结构只有O、K抗原，无H抗原K抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集根据O抗原分4群和44型志贺菌抗原分类菌种群型亚型痢疾志贺菌A1～108a、8b、8c福氏志贺菌B1～6x、y变种1a、1b、2a、2b、3a、3b、3c、4a、4b鲍氏志贺菌C1～18宋内志贺菌D1抵抗力对理化因素抵抗力弱尤其对酸敏感对消毒剂敏感易产生耐药性变异性S-R变异耐药性变异毒力变异临床意义致病物质：

◆菌毛

◆内毒素

◆志贺毒素：属外毒素，由A群志贺菌产生，具有肠毒、细胞毒、神经毒作用所致疾病：经肠道传染，引起细菌性痢疾，有3种临床类型，即急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢免疫性：

◆主要依赖局部SIgA，

◆病后免疫力不迟久微生物学检验标本采集◆粪便或肛拭◆新鲜脓血便◆立即送检或床边接种◆保存于30％甘油盐水或卡-布培养基检验程序粪便或肛拭肠道选择平板可疑菌落KIAMIU、IMViC报告结果增菌菌落涂片染色多价血清玻片凝集初步鉴定最终鉴定系统生化反应因子血清凝集检验方法将待检标本接种肠道选择平板，35℃培养18～24小时。若标本含菌量少，可先增菌（GN增菌液）4～6小时再分离培养。挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用A、B、C、D群诊断血清鉴定到种、型。血清学鉴定需注意K抗原的阻断作用，并应考虑是否为EIEC。志贺菌鉴定初步鉴定

●挑取可疑菌落接种KIA、MIU培养基

●若符合KIA：KA－－；MIU：－＋/－－，再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验最后鉴定：全面生化反应和单价血清玻片凝集试验若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热100℃15～30min后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑EIEC，需进行鉴别。志贺菌鉴别与EIEC的鉴别与类志贺菌的鉴别与动力不明显、不产H2S的沙门菌的鉴别志贺菌血清学鉴定先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用A、B、C、D群单价血清鉴定血清型。A群以1、2型为主，多有K抗原C群型别多D群只有1个血清型B群型别多，抗原结构复杂，多无K抗原。

我国以B群为主不典型菌株的鉴定在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不凝集；血清学凝集，生化反应不符合，可考虑不典型菌株。将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其恢复典型性状志贺菌快速鉴定试验直接凝集试验免疫荧光菌球法协同凝集试验乳胶凝集试验分子生物学方法志贺菌鉴定依据肠道选择平板上无色半透明菌落KIA：KA－－MIU：－＋/－－与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集注意与EIEC、类志贺邻单胞菌、动力不明显的沙门菌鉴别与EIEC的鉴别生化反应鉴别试验EIEC志贺菌粘质酸盐产酸＋－醋酸盐利用＋－赖氨酸脱羧＋－与类志贺邻单胞菌的鉴别鉴别试验类志贺菌志贺菌氧化酶＋－动力＋－半乳糖苷渗透酶（ONPG）＋－与动力不明显、H2S阴性沙门菌的鉴别鉴别试验沙门菌志贺菌沙门菌诊断血清玻片凝集试验＋－大肠埃希菌生化反应结果KIAMIUIMViC氧化酶斜面底层气体H2S动力吲哚尿酶IMViCAA＋/-－＋/-＋－＋＋－－－KA－－＋＋－＋＋－－－KA－－－＋－＋＋－－－KA＋－＋/-＋－＋＋－－－肠道杆菌沙门菌属沙门菌属是寄生于人类和动物肠道中，生物学性状相似的革兰阴性杆菌沙门菌属肠道沙门菌邦戈沙门菌肠道亚种萨拉姆亚种双亚利桑那亚种亚利桑那亚种豪顿亚种英迪加亚种致病沙门菌多为肠道亚种形态染色革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周鞭毛，多数菌株有菌毛沙门菌培养特性兼性厌氧、营养要求不高在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落，与志贺菌菌落相似。SS平板－－无色菌落，产H2S菌株，菌落中心呈黑色Mac平板－－无色菌落EMB平板－－无色菌落

生化反应氧化酶试验（－）分解葡萄糖、不分解乳糖KIA：KA＋＋（伤寒沙门菌产酸不产气KA－＋）MIU：＋－－IMViC：－＋－＋赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧：＋抗原结构O抗原：化学成分为脂多糖；耐热；与相应抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。H抗原：化学成分为蛋白质；不耐热；与相应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。Vi抗原：位于菌体外层；抗原性强，相应抗体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止O抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌有Vi抗原，有V－W变异。几种沙门菌的抗原组分组（群）型O抗原H抗原第1相第2相A组PA1，2，12a-B组PB1，4，5，12b1，2S.typhimuriun1，4，5，12i1，2C组PC6，7，Vic1，5S.cholerae6，7，c1，5D组S.typhi9，12，Vid-S.enteritidis1，9，12g.m-变异性S-R变异：H-O变异：V-W变异：相位变异：耐药性变异：抵抗力对理化因素抵抗力弱尤其对酸敏感对消毒剂敏感易产生耐药性临床意义致病物质：菌毛、内毒素、Vi抗原所致疾病：◆肠热症◆食物中毒◆败血症◆慢性肠炎免疫性：病后免疫力牢固，以细胞免疫为主肠热症发病过程伤寒杆菌和副伤寒杆菌小肠黏膜经口肠壁淋巴组织被吞噬细胞吞噬进入血液菌血症骨髓脾肝胆囊肾小肠随尿液排出随粪便排出再次侵入肠壁，引起并发症潜伏在胆囊中随粪便排出带菌者沙门菌感染的预防加强饮食卫生，切断传播途径发现并及时隔离病人接种伤寒和副伤寒沙门菌疫苗进行特异性预防微生物学检验标本采集：根据不同疾病采集不同标本肠热症的标本采集※发病第1～2周：血液※发病第2～3周：粪便、尿液※肠热症全程：骨髓检验程序粪便、尿、残余食物SS、Mac、血平板可疑菌落KIAMIU、IMViC报告结果增菌（GN、SF）菌落涂片染色A-F多价血清玻片凝集初步鉴定最终鉴定系统生化反应因子血清凝集血液、骨髓增菌（胆盐葡萄糖肉汤）检验方法－－培养血液、骨髓：将待检标本接种胆盐葡萄糖肉汤增菌培养，每日观察，出现浑浊等现象，及时转种血平板和肠道选择平板。粪便：接种SS、Mac或EMB分离培养，若标本含菌量少，可先增菌。尿液：尿液离心后，取沉淀物接种血平板和肠道选择平板。检验方法－－生化反应初步鉴定触酶＋、氧化酶－、硝酸盐还原＋苯丙氨酸－、葡萄糖酸盐－KIA：KA+/-+/-MIU：＋－－赖氨酸脱羧＋、鸟氨酸脱羧＋检验方法－－血清学鉴定首先用A-F多价O诊断血清进行初步鉴定；再用O因子血清鉴定到群（A、B、C、D、E、F群）；再用H因子第2相血清辅助鉴定型；若生化反应符合沙门菌，A-F诊断血清不凝集，应考虑是否有Vi抗原，将待检菌液加热后，再进行A-F多价O血清凝集试验。A-F多价O诊断血清凝集试验凝集O因子诊断血清凝集试验H因子诊断血清凝集试验凝集初步鉴定鉴定血清群鉴定血清型沙门菌鉴定需注意的问题玻片凝集试验需注意菌液浓度、反应温度生化反应符合，玻片凝集试验阴性，应考虑是否有Vi抗原的存在抗原结构相同，生化反应不同，应加做生化反应生化反应符合，玻片凝集试验阴性，无Vi抗原，应：重新观察生化反应；传代以恢复原有抗原性。肠热症不同标本细菌培养情况阳性检除率发病周数10090807060504030201012345678血标本粪便标本尿标本血清学诊断－－肥达反应原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌H抗原与病人血清作半定量凝集试验，以测定受检血清中有无相应抗体及其效价。意义：协助诊断肠热症（伤寒与副伤寒）肠热症病人血清抗体出现情况10090807060504030201012345678阳性检除率发病周数肥达反应结果判定：O效价≥1：80H效价≥1：160副伤寒H效价≥1：80O与H抗体的诊断意义：O、H效价均升高：已感染伤寒O、H效价均低于正常值：未感染沙门菌或免疫力低下O升高、H正常：某型沙门菌感染早期H升高、O正常：以往接种过疫苗或非特异性回忆反应双份血清的肥达反应：后一次较前一次抗体效价增高四倍以上，有诊断价值血清学诊断－－肥达反应生理盐水＋待检血清＋诊断抗原伤寒O伤寒H甲型副伤寒H肖沙门菌H反应6小时45℃观察结果1:201:401:801:1601:3201:640伤寒O效价1:160伤寒H效价1:320甲型副伤寒H效价<1:20肖沙门菌H效价<1:20诊断意义：感染伤寒沙门菌伤寒O效价1:80伤寒H效价<1:20甲型副伤寒H效价1:160肖沙门菌H效价<1:20诊断意义：感染甲型副伤寒沙门菌沙门菌鉴定依据沙门菌鉴定主要依靠生化反应和血清学诊断肠道选择平板上无色半透明菌落KIA：KA－+/-MIU：－＋/－－与A-F多价O诊断血清和相应O因子血清、H因子血清凝集注意Vi抗原的存在；注意抗原结构相同的菌株，应加做生化反应进行鉴别伤寒带菌者的检测从标本中分离出病原菌血清中检出Vi抗体，效价≥1：10几种沙门菌的主要生化反应菌种KIAMIU甲基红伏普枸櫞酸盐苯丙氨酸赖氨酸鸟氨酸斜面底层气体H2S动力吲哚尿酶PAKA+