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文档简介

BCA法测定蛋白浓度第一页，共十二页。【原理】：碱性条件下，蛋白将Cu2+复原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线比照，即可计算待测蛋白的浓度。

第二页，共十二页。【主要特点】1.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。2.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。3.快速：45分钟内完成测定。4.准确灵敏,线性范围广。5.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

第三页，共十二页。【实验器材与试剂】1．器材:分光光度计、恒温水浴锅。2.试剂:BCA试剂盒；待测样品。第四页，共十二页。【操作步骤】1.配制BCA工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂〔50:1〕配制适量BCA工作液，充分混匀。2.稀释标准品：用生理盐水稀释蛋白标准品BSA。实验步骤第五页，共十二页。实验步骤200第六页，共十二页。蛋白液稀释第七页，共十二页。第八页，共十二页。5、按上表，将稀释好的A-GBSA标准品和待测蛋白样品〔原液，1：10,1:100稀释液〕各150μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反响。6、向每个试管中各参加3mlBCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。7、用分光光度计在562nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。8、绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。第九页，共十二页。【本卷须知】：1.标本的充分混匀。2.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白样品均需做复孔,每次均应做标准曲线。3.使用水浴箱温育

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