DB21-T 3052-2018口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法

ICS11.220

B41

备案号：62088-2019DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3052—2018

口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法

镧系荧光免疫层析法

TheRapidDetectionMethodsforAntibodiestoFootandMouthDiseaseVirusType

ALanthanideFluorescenceImmunochromatographicAssay

DB21/T3052—2018

前言

本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。

本标准由辽宁省畜牧兽医局提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：周晨阳、申贯男、杨本勇、杨洺扬、梁乔、李蓉、张健、孙世宇。

II

DB21/T3052—2018

口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法镧系荧光免疫层析法

1范围

本标准规定了以镧系荧光免疫层析法检测牛、羊、猪血清中的口蹄疫病毒A型抗体的检测方法。

本标准适用于牛、羊、猪血清中口蹄疫病毒A型抗体水平的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3原理

采用免疫夹心法和镧系荧光免疫层析法相结合技术，检测动物血清样本中的口蹄疫病毒A型抗体。

将镧系纳米荧光微球作荧光示踪物标记口蹄疫病毒A型重组抗原，血清样本抗体与镧系纳米荧光微球标

记的口蹄疫病毒A型重组抗原接触形成复合物后，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的口蹄疫病毒A型重

组抗原发生反应，形成抗原-抗体-荧光微球标记抗原免疫复合物，最后用荧光检测仪读取检测卡上的荧

光信号。

4仪器与试剂

4.1仪器

4.1.1镧系荧光检测仪：激发波长为400nm±20nm，检测波长为615nm±10nm。

4.1.2单道可调移液器：10μL～100μL，0.5μL～10μL。

4.1.3分析天平：感量0.0001g。

4.1.4离心机。

4.1.5冰箱：2℃～8℃，-20℃。

4.2试剂

4.2.1样品稀释液：见附录A。

4.2.2口蹄疫病毒A型抗体荧光免疫试剂卡：镧系荧光微球标记的口蹄疫病毒A型重组抗原和鸡IgY

埋置在标记物垫内；硝酸纤维膜上的测试线（T）和参考线（C）分别包被口蹄疫病毒A型重组抗原和羊

1

DB21/T3052—2018

抗鸡IgY的IgG。（见图1）

图1口蹄疫病毒A型抗体镧系荧光免疫层析卡示意图

5样品采集与处理

5.1样品的采集

应按照NY/T541中的规定进行，并做好安全防护。按常规方法用干燥、洁净的离心管或适当容器采

集3mL～5mL血液。

5.2样品的处理

血液样本用离心机3000r/min离心3min，分离血清，血清量不少于500μL。

5.3样品的贮存

血清样本在2℃～8℃冷藏可保存24h，如需长期保存应置-20℃或-80℃。

6检测方法

6.1样品稀释

将待检血清样本用样品稀释液进行50倍稀释。

6.2加样

将镧系荧光免疫层析卡置于干净平坦的台面上，用移液器吸取已稀释好的待检样本垂直滴加80μ

L于加样孔内。

6.3检测

避光层析15min～20min，30min内用镧系荧光检测仪检测，读取效价。

6.4有效性判定

控制线（C线）检测到荧光信号，实验结果有效。

7结果判定

2

DB21/T3052—2018

效价≥_________________________________128时，判为阳性；效价＜64时，判为阴性；效价在64～128之间时，判为可疑。

3

DB21/T3052—2018

AA

附录A

（规范性附录）

样品稀释液的配置

A.1称取Na2HPO4·12H2O4.02g

A.2称取NaH2PO4·2H2O0.66g

A.3称取NAN31.5g

A.4称取硫酸葡聚糖（MW:40000）1.5g

A.5量取Tween-201L3.75mL

A.6800mL双蒸水放入1L烧杯。

A.7A.1、A.2、A.3同时放入A.6烧杯中搅拌溶化。

A.8A.4加入A.7烧杯中混匀。

A.9A.5加入A.8烧杯中混匀。

A.10用双蒸水将A.9烧杯溶液定容至1L。

A.11混匀后分装，置4℃备用。

_________________________________

_________________________________

4

DB21/T3052—2018

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3原理..............................................................................1

4仪器与试剂........................................................................1

4.1仪器..........................................................................1

4.2试剂..........................................................................1

5样品采集与处理....................................................................2

5.1样品的采集....................................................................2

5.2样品的处理....................................................................2

5.3样品的贮存....................................................................2

6检测方法..........................................................................2

6.1样品稀释......................................................................2

6.2加样..........................................................................2

6.3检测..........................................................................2

6.4有效性判定....................................................................2

7结果判定..........................................................................2

附录A（规范性附录）样品稀释液的配置................................................4

I

DB21/T3052—2018

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3原理..............................................................................1

4仪器与试剂........................................................................1

4.1仪器..........................................................................1

4.2试剂..........................................................................1

5样品采集与处理....................................................................2

5.1样品的采集....................................................................2

5.2样品的处理....................................................................2

5.3样品的贮存............................