TZJZYC 011-2023 雁荡山铁皮石斛组培育苗技术规程

ICS65.020CCSB05ZJZYC浙江省中药材产业协会团体标准T/ZJZYC011—2023雁荡山铁皮石斛组培育苗技术规程TechnnicalregulationforprapagationviatissuecultureofDendrobiumofficinaleinYandangshan2023-12-25发布 2024-01-25实施浙江省中药材产业协会  发布T/ZJZYC011T/ZJZYC011—2023PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1制种 1组培室建设 1组培育苗 2炼苗 2种苗等级 2档案管理 3附录A（资料性） 铁皮石斛不同组培阶段参考培养基及配制方法 4表 A.2植物生长调节剂配制 4前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由浙江省中药材产业协会提出并归口。本文件主要起草人：宋仙水、项近森、周婷、宋敏全、盛小宽、袁燕舞、曾守生、叶玉婷、翁振安。本文件适用于浙江省中药材产业协会内所有会员单位。本文件由浙江省中药材产业协会负责解释。T/ZJZYC011T/ZJZYC011—2023PAGEPAGE1雁荡山铁皮石斛组培育苗技术规程范围本文件适用于雁荡山铁皮石斛组培育苗工厂化生产。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB3095 环境空气质量标准GB5749 生活饮用水卫生标准GB15618土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准（试行）T/ZJZYC03铁皮石斛种苗生产技术规程术语和定义T/ZJZYC03界定的以及下列术语和定义适用于本文件。雁荡山铁皮石斛源产于雁荡山山脉的种源，在雁荡山地域保护范围内培养、生产的铁皮石斛。制种亲本选择选择适应性广、抗逆性强，有效成分含量高，丰产性与商品性好，生长健壮的铁皮石斛植株。人工授粉开花后2天～5天内，选择晴天进行人工辅助授粉，每茎条宜授粉3朵～5朵，摘除其余未授粉花朵，挂牌注明授粉日期。蒴果管理授粉后7天～15天进行疏果，摘除发育不良的蒴果。蒴果采集晴天选择饱满、成熟、无病虫害、未开裂的蒴果，将蒴果带果柄采下，存放于温度为3～5～401年之内。组培室建设场地选择500mB5749的要求，环境空气质量应符合GB3095中二级及以上标准的要求，土壤环境应符合GB15618的规定。功能区划及要求组培车间包括洗涤室、培养瓶晾干室、试剂室(称量室)、培养基配制室、灭菌室、培养基储存1001030管理区包括办公室、会议室和其它必要工作空间等。温室包括母本保存圃、组培苗驯化区和组培苗培育区等。组培育苗蒴果播种将采收的蒴果经无菌水清洗后置于超净工作台，751min后，无菌水冲洗表面3次～5次。然后用浓度为1.0%～1.5NaC1O浸泡20min，并不停摇晃，用无菌水冲洗5次～6次，使无异味，无mlL～200ml/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8。继代培养待幼苗长到1mm～3mmMS+6-BA0.5mg/L～1.5mg/L30g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8，进行继代培养。生根培养待幼苗长至1.0cm～1.5cm高时,转接到生根培养基1/2MS+香蕉100g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8，进行生根培养。培养基及配制方法不同组培阶段参考培养基及配制方法见附录A。培养条件T/ZZYC025mo1.s～50mo1.26℃±2℃，晚上温度22℃±2℃(黑暗培养)。每天照光10h～12h。炼苗生根后培养90天～110天，即可将瓶苗移置设施大棚进行炼苗，炼苗时间3周左右。种苗等级种苗等级划分具体参考表1的规定。表1 组培苗分级表分级/项目根数（条）根长（cm）叶片（片）株高（cm）茎粗（mm）合格苗3～53～53～53.0～5.01.0～3.0优质苗5～85～6≥55.0～8.0≥3.0总体要求种苗生长健壮、根系发达、叶色浓绿、无污染、无畸形、无烂根档案管理附 录 A（资料性）铁皮石斛不同组培阶段参考培养基及配制方法铁皮石斛不同组培阶段参考培养基种子萌发培养基：MS15g/L80g/L～100g/L增殖诱导培养基：MS0.2mg/L6-BA0.1mg/LNAA10g/L80g/L～100g/L壮苗生根培养基：MS0.2mg/LNAA5g/L80g/L不同阶段培养基蔗糖含量均为30g/L，分装前培养基pH调整为5.7～5.8。植物生长调节剂配制植物生长调节剂配制见表A.2。表A.2植物生长调节剂配制名称配制方法存储方式6-苄基嘌呤(6-BA)称取50mg6-BA于烧杯中先用适量0.1mol/L500mL烧杯2～3次，最后用去离子水定容至500mL冷藏(4避光保存萘乙酸(NAA)称取50mgNAA于烧杯中用适量95％乙醇溶液或无水乙醇充分溶解后加500mL注：本表中所用药品纯度均为BR级，本表中所用容器均需在使用前用去离子水清洗2~3次培养基配制根据培养基成分准备好各类容器、蒸馏水、琼脂、蔗糖、香蕉粉(或香蕉)和各种母液等；若使用香蕉，使用前先打成香蕉泥。按需要准确量取各种母液并充分搅拌均匀。母液加入顺序为大量元素、微量元素、有机成分、铁盐、植物生长调节剂。在母液中加入蔗糖和香蕉粉或香蕉，加蒸馏水至溶液体积约为400mL，搅拌，使糖充分溶解。另取容器，加入蒸馏水约500mL，再加入琼脂7g～9g，加热搅拌使琼脂溶化。将“A.3.3”和“A.3.4”配制溶液混合，搅拌均匀后加蒸馏水定容至1升。1mol/L1mol/L的氢氧化钠溶液调节培养基pH至5.7～5.8。根据不同需要