实验02酵母菌的纯培养（原卷版）

实验02酵母菌的纯培养配制培养基：称去皮马铃薯200g、切块加水1000ml，加热煮沸纱布过滤加20g葡萄糖加20g琼脂用蒸馏水定容至1000ml灭菌灭菌培养基：高压蒸汽灭菌法培养皿灭菌：干热灭菌法倒平板条件：50℃左右（酒精灯旁）操作步骤接种和分离：平板划线法培养酵母菌方法：将接种后的平板和一个未接种的平板倒置放到恒温箱中培养。条件：28℃左右。一、平板划线法注意问题：1、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因：划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。2、在第二次以及其后的划线操作时，从上一次划线的末端开始划线的原因：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。3、接种结束后，要将一个未接种的培养基一起培养原因：培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；4、未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明：培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。二、无菌技术的三个主要注意点①实验前应对操作空间、操作人员进行消毒，对所用器具和培养基进行灭菌。②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作。③避免已杀菌处理的材料再次污染。三、倒平板时的注意事项①琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不及时操作，琼脂会凝固。②可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。1．（2023·江苏·统考高考真题）下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（）A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定2．（2023·辽宁·统考高考真题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（

）A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高3．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培养B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物4．（2023·广东·统考高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（

）A．a点时取样、尿素氮源培养基B．b点时取样、角蛋白氮源培养基C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基D．c点时取样、角蛋白氮源培养基5．（2022·辽宁·统考高考真题）为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是（

）A．航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物B．细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀C．在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品D．采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征6．（2022·江苏·统考高考真题）下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（

）A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌7．（2021·北京·统考高考真题）人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是（）A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断8．（2021·山东·统考高考真题）解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（

）A．甲菌属于解脂菌B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力9．（2021·山东·统考高考真题）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（

）A．乙菌的运动能力比甲菌强B．为不影响菌的运动需选用液体培养基C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染10．（2021·广东·统考高考真题）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。回答下列问题：（1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有等。（答出两种方法即可）（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是。（答出两点即可）（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中可能是高密度培养的限制因素。（4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌。1．金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物，其具有耐高盐的特性，在环境中分布广泛。下列相关叙述错误的是（

）A．可从食物和人的粪便中分离得到金黄色葡萄球菌B．培养过金黄色葡萄球菌的培养基要灭菌后才能丢弃C．分离样品中的金黄色葡萄球菌时，用高盐液体培养基培养不能增加该菌的浓度D．在固体选择培养基上采用平板划线法接种，可获得金黄色葡萄球菌的纯培养物2．下列关于微生物实验操作的叙述正确的是（

）A．对酵母菌细胞进行计数时，通常使用细菌计数板B．平板划线时，只有在最后一个划线区域才可得到所需单菌落C．在统计样品活菌数时，需对每个稀释度进行涂布培养并计数D．在平板上划线和涂布时，均需避免弄破培养基表面3．酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图Ⅰ所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基。下列说法正确的是（

）A．传统葡萄酒发酵时，将葡萄冲洗去梗后榨汁装满消毒后的玻璃瓶B．对培养基进行高压蒸汽灭菌，需在压力为100kPa、温度为121℃的条件下C．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×106个/L，此数值可能低于实际的活菌数D．由图Ⅱ可知，丙瓶出现的原因可能是培养瓶密封不严，丁组酵母菌产酒精能力比乙弱4．下图为不同稀释度的酵母菌培养液涂布后的实验结果图，下列叙述正确的是（

）A．实验中使用接种环完成上述涂布过程B．涂布时避免涂布到琼脂边缘，因为沿着琼脂边缘计数菌落更加困难C．酵母菌扩大培养过程中需要使用液体培养基静置培养D．计数105稀释度下培养皿的菌落数，可以计算出每毫升培养液的酵母细胞个数5．某学习小组采用如下培养基进行酵母菌的纯化培养实验。有关叙述错误的是（

）组分马铃薯滤液葡萄糖琼脂水含量200g20g15g定容至1000mLA．该培养基是以葡萄糖为唯一碳源的选择培养基B．装有培养基的锥形瓶、培养皿等应进行干热灭菌C．将接种后的平板置于28℃左右的恒温摇床上振荡培养D．若同时计数酵母菌数量，应采用稀释涂布平板法接种6．产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究如图，据图回答下列问题：(1)图中I号培养基称为培养基（按功能分）；③过程所用的接种方法统计数目会比活菌实际数目少，原因是。(2)该培养基中加入的脂肪可以为目的菌提供。(3)在培养基的配制过程中，操作方法包括以下步骤，其正确顺序为。①溶化②调整pH③培养基的分装④称量⑤灭菌⑥倒平板(4)可用于判断培养基上生长菌落种类的依据是菌落的（至少写出两点）(5)在处理含油废水的同时，可获得蛋白质，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如下图，据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。(6)根据下图结果，计算每克土壤样品约含细菌个。7．酵母菌作为白酒发酵生产中的主酵菌群，通常在整个发酵过程中的前期，对发酵原料的转化利用能力及乙醇的生产能力较强，但随着发酵过程的进行，在窖池酸度下降至pH≤4．5后，酵母菌的生理代谢活动逐渐受到抑制，对发酵原料的转化利用能力及乙醇的发酵生产能力也逐渐下降，甚至停止。酒用耐酸性酵母菌的筛选及应用，将改善传统的白酒生产工艺，促进白酒生产的产量与产值的提高，将产生较大的经济效益。现开展对五粮液酒厂耐酸性酿酒酵母菌的分离与筛选。请回答下列问题：(1)从窖池底泥，黄浆水（窖底部的水，呈黄色，含有丰富的有机酸）中寻找耐酸酵母菌的原因是。(2)过程②需充分振荡的主要目的是。过程②所用培养基为酵母菌提供了营养。(3)过程③所用接种工具是，划线顺序是。酿酒酵母不能采用赖氨酸作为酵母氮源，因而在赖氨酸培养基上不能生长。将④中菌株经饥饿处理后接种到赖氨酸培养基，直到15d后仍无菌落生长，说明④中的菌种是。(4)对麦芽汁培养48h的酵母菌株，以16×40倍的显微镜镜检，筛选出菌体上多端出芽菌株，目的是。8．啤酒生产过程大致如下：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多，当糖度下降到一定程度后，结束发酵，最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程，回答以下问题：(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤2：制备选择培养基：在基本培养基的基础上，注意和添加高浓度葡萄糖。加琼脂后进行灭菌，制成固体平板。步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂