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XXXX大学--------------------实验报告年级:2010级系:XX医学班:1班组:1组姓名:XXXxxxxxxxxxx教师签名:日期:2012-13-32实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验目的和要求掌握紫外可见分光光度计的基本操作;掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法;掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择;掌握标准曲线绘制及应用。实验原理邻二氮菲(1,10—邻二氮杂菲)是一种有机配位剂,可与Fe2+形成红色配位离子:在pH=3~9范围内,该反应能够迅速完成,生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰,摩尔吸收系数为1.1×10-4,反应十分灵敏,Fe2+浓度与吸光度符合光吸收定律,适合于微量铁的测定。实验中,老师我们又见面了采用pH=4.5~5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度;采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。实验仪器与试剂752S型分光光度计标准铁储备溶液(1.00×10-3mol/L)邻二氮菲溶液(0.15%,新鲜配制)盐酸羟胺溶液(10%,新鲜配制)NaAC缓冲溶液50ml容量瓶7个1cm玻璃比色皿2个铁样品溶液实验步骤标准系列溶液及样品溶液配制,按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液。编号1234567(铁样品溶液)1.00×10-3mol/L标准铁溶液0.00ml1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml10%盐酸羟胺溶液1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml0.15%邻二氮菲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00mlNaAC缓冲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度并摇匀。系列标准溶液浓度(mol/L)02×10-54×10-56×10-58×10-51×10-4——吸收曲线绘制用1cm比色皿,以1号溶液作为参比溶液,测定4号溶液在各个波长处的吸光度,绘制吸收曲线,并找出最大吸收波长。测定波长480nm482nm484nm486nm488nm490nm492nm494nm496nm498nm吸光度0.6270.6280.6300.6320.6340.6360.6380.6450.6510.657测定波长500nm502nm504nm506nm508nm510nm512nm514nm516nm518nm吸光度0.6600.6660.6730.6790.6820.6840.6850.6780.6690.661测定波长520nm522nm524nm526nm528nm530nm532nm534nm536nm538nm吸光度0.6450.6160.5910.5660.5380.5060.4710.4360.3950.356选择的最大吸收波长为:λmax=512nm绘制吸收曲线如下:标准曲线制作在选定最大吸收波长处,用1cm比色皿,以1号溶液作为参比溶液,分别测定2至7号溶液的吸光度,平行测定3次,计算吸光度平均值,绘制标准曲线。编号234567(样品溶液)吸光度A10.2330.4600.6850.9121.1280.5337样品溶液4.65×10-57样品溶液4.65×10-5mol/ml实验数据处理样品中铁的计算Cx=4.65×10-5×50.00/2.50=9.30×10-4mol/L摩尔吸光系数计算在标准曲线的直线部分选择量两点,读取对应的坐标值,计算邻二氮菲配位物在最大吸收波长出的摩尔吸光系数:ε=(0.460-0.233)/(0.00006-0.00004)=2.00×10-5
实验注意事项1、测定系列标准溶液和样品溶液时,必须使用同一只比色皿。2、比色皿放入分光光度计样品室前,必须使用吸水纸将外表面擦拭干净。3、比色皿在换装不同浓度溶液时,必须使用待测溶液润洗至少三次。4、在比色皿未放入分光光度计测定光路时,必须将样品室舱打开。讨论及思考如果绘制你的标准曲线线性不好或者标准曲线有部分发生偏离,请分析原因。答:标准曲线部分偏离的原因可能是:我感觉的数据如果有问题主要是感觉分光光度计不够精确,使用旋钮每次旋出相同的测定数值可能都不一样,有时小范围内甚至可能发生往大旋,波长数
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