DB13-T1384-8-2011饲料中氯羟吡啶的测定液相色谱-串联质谱法

ICS65.120

B46

DB13

河北省地方标准

DB13/T1384.8—2011

饲料中氯羟吡啶的测定

液相色谱－串联质谱法

Determinationofcopidolinfeed

LC-MS/MSmethod

DB13/T1384.8—2011

饲料中氯羟吡啶的测定

液相色谱－串联质谱法

1范围

本标准规定了饲料中氯羟吡啶的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于饲料中氯羟吡啶的测定。

本标准的方法检出限为20μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqISO3696：1987〉

3原理

试样中氯羟吡啶经甲醇提取，用中性氧化铝柱净化分离，浓缩后用甲醇溶解，液相色谱-串联质谱

定性定量测定。.

4试剂和溶液

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇。

4.2中性氧化铝萃取柱：1g，6mL。

4.3氯羟吡啶标准品：纯度均应大于95%。

4.4氯羟吡啶标准贮备液：分别准确称取己知纯度的氯羟吡啶标准品10mg（精确至0.000lg），

置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇超声使之完全溶解，定容至刻度，摇匀。该溶液中氯羟吡啶浓度为

100g/mL，于4℃保存可使用6个月。

4.5氯羟吡啶标准工作液：准确移取氯羟吡啶标准储备液5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇

定容至刻度，该溶液中氯羟吡啶浓度均为10g/mL，于4℃保存可使用1个月。

4.6正己烷。

4.7氨水。

5仪器和设备

除实验室常用仪器和设备外，还包括以下仪器和设备。

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

5.2电子天平：感量为0.lmg和1mg。

1

DB13/T1384.8—2011

5.3旋涡混匀器。

5.4滤膜：孔径0.45μm，有机相。

5.5高速离心机。

5.6中性氧化铝固相萃取柱：500mg，6mL，或相当者。

6试样的制备

6.1提取

准确称取样品5g（精确至0.00lg）于50mL离心管中，加入甲醇10mL，旋涡混合，于振荡器振荡

30min，5000r/min离心5min，取上清液再加入10mL水、500μL氨水、10mL正己烷，涡旋30s，8000

r/min离心5min，取下层清液待净化。

6.2净化

将上清液移入中性氧化铝柱中，用20mL甲醇洗脱，将过柱液及洗脱液全部接收于50mL离心管

中，氮吹至干，用lmL甲醇溶解残渣，过0.45μm微孔滤膜，待测。

7分析步骤

7.1测定

7.1.1液相色谱条件

色谱柱：C18，5μm，150mm×2.lmm（内径）或相当者。

水（A）+甲醇（B）。

流速：0.25mL/min。

梯度：0～4.0min10％～90％B；4.0min～8.0min90％B，8.1min～10.0min10％B。

柱温：25℃。

进样量：25μL。

7.1.2串联质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测。

扫描方式：选择离子检测（MRM）。

雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气。

电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值。

定性离子对(m/z)：192.2/174.2，192.2/101.0。

定量离子对定量离子对(m/z)：192.2/101.0。

7.2定性、定量

氯羟吡啶标准工作溶液在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作

溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中

泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。氯羟吡啶标准物质质谱图参见附录A。

7.3空白试验

2

DB13/T1384.8—2011

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

8结果计算

结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值：

V

X=c•.......................................(1)

m

式中：

X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）。

c——从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）。

V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)。

m——样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

9重复性

同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于15％。

3

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AA

附录A

（资料性附录）

氯羟吡啶标准质谱图

表A.1氯羟吡啶标准物质质谱图

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DB13/T1384.8—2011

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由河北省质量技术监督局提出。

本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、石家庄市疾病预防控制中心、

北京出入境检验检疫局技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。

本标准主要起草人：张岩、杨立学、李挥、张宏、丛斌、卢晓宇、吕品、贾茜、李强、李志平、马

春玲、米振杰、沈磊、高振同、武英利。

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AA

附录A

（资料性附录）

氯羟吡啶标准质谱图

表A.1氯羟吡啶标准物质质谱图

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DB13/T1384.5—2011