脂肪酸酸价测定与血清胆固醇的测定

脂肪酸酸价测定与血清胆固醇的测定一、实验目的1.了解脂肪酸价测定的原理和方法；2.了解并掌握胆固醇测定的醋酸酐法。二、实验原理A、 天然油脂长期暴露在空气中会发生臭味，这种现象称为酸败。酸败是由于油脂水解释放出的游离脂肪酸，在空气中被氧化成醛或酮，从而有一定的臭味。酸败的程度用酸价来表示。酸价是中和1g油脂的游离脂肪酸所需KOH的毫克数。 油脂中的游离脂肪酸与KOH发生中和反应，从KOH标准溶液消耗量可计算出游离脂肪酸的量。反应式如下： RCOOH+KOH RCOOK+H2OB、 血清意胆固醇测定对高脂血症的诊断、冠心病和动脉粥样硬化和防治均有意义。血清总胆固醇升高常见原发性高胆固醇血症、肾病综合症、甲状腺机能减退、糖尿病等疾病。胆固醇的测定临床常用的比色法有两类：1、固醇化的氯仿式醋酸溶液中加入醋酸酐-硫酸试剂，产生蓝绿色。2、固醇的醋酸、乙醇式异丙醇溶液中加入高铁-硫酸试剂产生紫红色。 由于胆固醇颜色反应特异性差，直接测定往往受血液中其倔因素干扰，所以精细的方法是先经抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定量。 本实验采用醋酐-硫酸单一试剂显色法。本法测定100ml血清总胆固醇的正常值为125~200mg。 醋酐能使胆固醇脱水，再与硫酸结合生成绿色化合物。反应如下：三、实验器材A、1.油脂2.天平3.碱式滴定管4.三角烧瓶5.量筒6.水浴锅B、1.血清2.试管3.吸管4.容量瓶5.烧杯6.电子分析天平7.722型分光光度计四、实验试剂A、1.0.100mol/LKOH标准溶液2.1%酚酞指示剂：用70%~90%乙醇配置3.中性醇醚混合液B、1.胆固醇标准溶液2.硫脲显色剂五、实验步骤A、1.配置中性醇醚混合液 取95%乙醇和乙醚按1:1等体积混合，混合液加入酚酞指示剂数滴，用0.100mol/LKOH溶液滴定中和至红色。2.准确称取油脂1~2.000g于100ml三角瓶中，加入醇醚混合液50ml，振摇溶解（固体脂肪需水浴熔化再加入混合液）或40℃水浴中熔化至透明，溶液由红色变为无色，继续用0.100mol/LKOH标准液滴定至淡红色，1min不褪色为终点，记录KOH的用量V（ml）。B、醋酸酐法测胆固醇含量： 取干燥试管3支，分别标明“空白管”、“测定管”及“标准管”，按下表进行操作：空白管（+0.1ml乙醇）标准管测定管胆固醇标准液/ml0.1血清液/ml0.1硫脲显色剂/ml4.04.04.0 快速加入显色剂，立即混匀，于37℃水浴中保温10min，取出后，立即以显色剂作为空白调零点，在620nm波长处进行比色。六、数据与处理A、脂肪的酸价=cV×56.1M油1=4.50g V1=2.72ml 酸价=3.39M油2=4.33g V2=2.58ml 酸价=3.34B、第一次实验4.0ml显色剂+0.1ml无水乙醇标准液血清样品A620nm00.1760.142第二次实验4.0ml显色剂+0.1ml无水乙醇标准液血清样品A620nm00.1910.138七、实验讨论1.在测定脂肪酸酸价试验中滴定中性醇醚混合液的过程时变色点较难把握，容易滴过量，这会导致最终实验结果偏低；2.滴定油脂的过程中可能因脂肪酸未完全溶解混合