蒺藜皂苷单体B对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

蒺藜皂苷单体B对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

01引言参考内容材料与方法目录0302引言引言心肌缺血再灌注损伤（MI/R）是一种常见的病理生理现象，是心肌梗死、不稳定心绞痛等心脏疾病的主要发病机制。目前，对于MI/R的治疗尚无特效药物。因此，寻找有效的治疗药物成为了心血管领域的研究热点。蒺藜皂苷单体B（TBM）是一种从蒺藜科植物中提取的天然活性成分，具有多种药理作用，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤等。引言近年来，越来越多的研究表明TBM在心血管疾病中具有潜在的治疗作用。因此，本次演示旨在探讨TBM对MI/R的保护作用及可能机制。材料与方法1、实验材料1、实验材料TBM（纯度>98%）购自南京春秋生物科技有限公司；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）试剂盒购自南京建成生物工程研究所；细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；JNK、p38和ERK1/2抗体购自CellSignalingTechnology公司；其他试剂均为国产分析纯。2、实验方法2、实验方法细胞培养：采用常规方法培养H9c2心肌细胞，分为正常组、模型组、TBM组（10、20、40μmol/L）、地尔硫䓬组（阳性对照，100μmol/L），共5组。2、实验方法细胞缺氧复氧模型建立：将细胞置于无血清RPMI1640培养液中，通入95%N2和5%CO2，模拟缺血环境，缺氧4h后，更换正常RPMI1640培养液，继续培养20h，模拟再灌注过程。2、实验方法MTT法测定细胞存活率：将细胞接种于96孔板中，实验分组同上。药物处理后，加入MTT溶液（5g/L），继续培养4h，弃上清液，加入DMSO，振荡10min，用酶标仪测定吸光度值（A）。2、实验方法细胞凋亡检测：按照试剂盒说明书操作，通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。Westernblot法检测蛋白表达：收集细胞，用RIPA裂解液提取蛋白，BCA法测定蛋白浓度。取30μg蛋白进行SDS电泳，转膜、封闭后加入相应抗体（JNK、p38和ERK1/2），4℃孵育过夜。2、实验方法加入二抗，室温孵育1h，ECL发光显影。用ImageJ软件分析条带灰度值，以目的蛋白/内参蛋白表示蛋白相对表达量。1、TBM对MI/R细胞存活率的影响1、TBM对MI/R细胞存活率的影响与正常组比较，模型组细胞存活率明显降低（P<0.01）；与模型组比较，各药物组细胞存活率均有所提高（P<0.05或P<0.01），且呈剂量依赖性。其中，TBM40μmol/L效果最显著（P<0.01），与地尔硫䓬组相当（P>0.05）（图1）。2、TBM对MI/R细胞凋亡的影响2、TBM对MI/R细胞凋亡的影响与正常组比较，模型组细胞凋亡率显著增加（P<0.01）；与模型组比较，各药物组细胞凋亡率均有所降低（P<0.05或P<0.01），且呈剂量依赖性。其中，TBM40μmol/L效果最显著（P<0.01），与地尔硫䓬组相当（P>0.05）（图2）。3、TBM对MI/R细胞中JNK、p38和ERK1/2表达的影响3、TBM对MI/R细胞中JNK、p38和ERK1/2表达的影响与正常组比较，模型组细胞中JNK和p38表达显著增加（P<0.01），ERK1/2表达略有增加（P>0.05）；与模型组比较，各药物组细胞中JNK和p38表达均有所降低（P<0.05或P<0.01），且呈剂量依赖性。其中，TBM40μmol/L效果最显著（P<0.01），与地尔硫䓬组相当（P>0.05）。参考内容引言引言心肌缺血再灌注损伤（MI/R）是一种常见的心血管疾病，具有较高的发病率和死亡率。目前，临床治疗MI/R的主要方法是再灌注治疗，但再灌注过程会加重心肌细胞的损伤。因此，寻找有效的治疗药物是当前的研究重点。蒺藜总皂苷（TTS）是一种从蒺藜科植物中提取的有效成分，具有多种药理作用，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤等。本研究旨在探讨TTS对大鼠MI/R的保护作用及可能的作用机制。材料与方法1、实验材料1、实验材料成年健康Wistar大鼠，体重250-300g，雌雄不限；TTS（上海源叶生物科技有限公司）；肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。2、实验方法21、1动物分组与处理21、1动物分组与处理将大鼠随机分为4组，每组10只：假手术组、MI/R组、TTS低剂量组（50mg/kg）和TTS高剂量组（100mg/kg）。TTS处理组每天灌胃给药，持续7天。在末次给药后进行MI/R手术。2、2MI/R模型的建立2、2MI/R模型的建立大鼠麻醉后，通过开胸手术结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注2h，建立MI/R模型。假手术组只进行开胸手术，不结扎血管。2、3指标检测2、3指标检测收集血清，测定CK、LDH、MDA和SOD水平。取心肌组织，观察其病理学变化。结果1、TTS对MI/R大鼠心肌损伤的影响1、TTS对MI/R大鼠心肌损伤的影响与MI/R组相比，TTS处理组大鼠心肌组织形态明显改善，细胞损伤减轻。与假手术组相比，各组大鼠心肌组织均出现不同程度损伤，但TTS处理组损伤程度较轻。1、TTS对MI/R大鼠心肌损伤的影响表1各组大鼠心肌组织形态比较（n=10）注：与假手术组比较，*P<0.05；与MI/R组比较，#P<0.05。2、TTS对MI/R大鼠心肌酶的影响2、TTS对MI/R大鼠心肌酶的影响与MI/R组相比，TTS处理组大鼠血清中CK和LDH水平明显降低（P<0.05），而SOD活性明显升高（P<0.05），但与假手术组比较差异无统计学意义（P>0.05）。随着TTS剂量增加，上述指标改善更加明显（P<0.05）。2、TTS对MI/R大鼠心肌酶的影响表2各组大鼠血清心肌酶及抗氧化指标比较（n=10）注：与假手术组比较，*P<0.05；与MI/R组比较，#P<0.05；与TTS低剂量组比较，2、TTS对MI/R大鼠心肌酶的影响讨论本研究结果显示，TTS对MI/R大鼠具有明显的保护作用，能够减轻心肌损伤、改善心肌酶和抗氧化指标。这可能与TTS的多重作用机制有关：一是直接抑制氧化应激反应，减少自由基生成和脂质过氧化产物产生；二是抑制炎症反应，下调炎性因子表达水平；2、TTS对MI/R大鼠心肌酶的影响三是通过激活细胞信号转导途径（如PI3K/Akt通路）发挥抗凋亡作用；四是调节细胞自噬水平，维持细