农药环境安全性评价

农药环境安全性评价2/13/20241农药使用的利与弊农药的重要地位

防治病、虫、草、鼠害，调节农作物生长全世界由于病、虫、草、鼠害而损失的农作物收获量相当于潜在收获量的三分之一，如果一旦停止用药或严重的用药不当，一年后将减少收成25－40％（与正常用药相比），两年后将减少40－60％以至绝产。

我国平均每年挽回粮食2500万吨、棉花40万吨、蔬菜800万吨、果品330万吨，减少经济损失约300亿元。2/13/20242背景农业部农药检定所农药登记前、登记、登记后的管理、监督、检测11个处室药政处、生测室、分析室、残留室、监督处、信息处、咨询中心、生物中心……120人，在编86人2/13/20243背景生物中心2800m2实验室，200m2全自动控制温室室内生测试验：杀虫剂、杀菌剂、除草剂、卫生杀虫剂环境试验：农药对非靶标生物毒性、环境行为特征试材培养：虫、菌、草、蚊、蜚蠊、蜂、鸟、鱼、蚕20人，在编6人实习博士、硕士研究生、本科生5-10人2/13/20244农药使用的利与弊农药对环境的污染问题——农药残留

农药残留的急性毒性问题农药残留的慢性、亚慢性毒性问题农药残留对农药产品贸易的影响农药残留对农产品贸易的影响

2/13/20245农药使用的利与弊农药对环境的污染问题——环境中的归宿

归宿：水、土壤、空气

影响因子：温度、湿度、光照、降雨、微生物、pH2/13/20246农药使用的利与弊农药对环境的污染问题——环境生物毒害对有益生物的影响

蜜蜂、鱼类、鸟类、家蚕天敌，赤眼蜂、青蛙蚯蚓、土壤微生物对生物链的影响2/13/20247农药使用的利与弊农药对环境的污染问题——环境激素

在已经列为环境激素的名单中，有40多种是农药，其中的六六六、DDT等目前已被禁用，但仍有多种仍在广泛应用环境激素对人和动物最明显的危害是使生殖机能下降。科学研究表明，由于环境激素的危害，人类男性的精子数和精液正迅速减少，生殖健康受到影响。环境激素还会使人和动物体内内分泌紊乱，导致神经系统受损。此外环境激素还会降低机体的免疫力而诱发肿瘤。已有许多研究表明睾丸癌、前列腺癌、乳腺癌的发生都与环境激素有关。2/13/20248农药登记管理——农药安全性1982年开始恢复对农药登记管理重点的转变药效产品质量农产品残留环境2/13/20249农药环境安全性评价的主要内容环境行为非靶标生物2/13/202410农药环境安全性评价的主要内容环境行为农药环境行为是指农药进入环境后，在环境中迁移转化过程中的表现与特征。包括物理行为、化学行为与生物效应等三个方面。直观地反映了农药对生态环境污染影响的状态。2/13/202411农药环境安全性评价的主要内容环境行为挥发作用土壤吸附作用淋溶作用土壤降解作用水解作用光解作用生物富集作用2/13/202412农药环境安全性评价的主要内容农药对非靶生物毒性试验

在靶生物与非靶生物并存的环境中，使用农药难免对非靶生物会造成一定的危害。不同的农药品种，由于其施药对象、施药方式、毒性及其危及生物种类的不同，其影响程度也随之而异。环境生物种类很多，在评价时只能选择有代表性的，并具有一定经济价值的生物品种，其中包括陆生生物、水生生物和土壤生物作为评价指标。

2/13/202413农药环境安全性评价的主要内容非靶标生物毒性试验鸟类毒性蜜蜂毒性天敌毒性（赤眼蜂、蛙类）鱼类毒性水生生物毒性（水蚤、藻类）家蚕毒性（根据农药性质和用途而定）蚯蚓毒性和土壤微生物影响（土壤处理）主要后茬作物敏感性（高活性除草剂：如磺酰脲类等）2/13/202414农药环境安全性评价的主要内容土壤降解2/13/202415土壤降解的概念成土因子与田间耕作条件的共同作用下，土壤中的残留农药逐步由大分子分解成小分子直至失去毒性和生物活性的全过程。土壤是农药在环境中的贮藏库，也是农药在环境中的集散地。土壤中农药残留量的大小、持留时间的长短、农药在土壤中的降解性能，是评价农药对整个环境危害影响十分重要的指标。农药在土壤中的持留愈长，对环境的污染以及对各种环境生物，以至对人类的潜在威胁也愈大。表示：降解半衰期：t0.5

2/13/202416土壤降解的试验方法试验材料土壤农田耕层土壤新鲜，有代表性，3~4种风干，过筛（2mm）,冷藏贮存理化性质测定：pH、有机质、代换量、土壤质地农药纯品/原药配制水溶液，有机溶剂助溶（少量，无干扰：丙酮、乙醇）培养箱：0~50℃残留分析仪器设备、材料前处理：旋转蒸发器、震荡器化学试剂分析仪器：气相色谱、液相色谱、色谱-质谱联用仪

2/13/202417土壤降解的试验方法试验方法称量：20g，三角瓶，混入农药：农药的用量最好用田间的实际用量来换算，或将土壤中农药的起始浓度调至10ppm（新要求：田间用量的倍量）调节含水量：田间持水量的60%。培养：在25±1℃恒温条件下培养定期采样测定：直至土壤中农药的降解量达到两个半衰期以上，即降解量>75%，或者90%以上时可终止试验（用于水田的农药，则同时要做在渍水条件下的降解试验）2/13/202418土壤降解的试验方法计算公式Ct=C0e-ktt0.5=Ln2/kC0：初始浓度Ct：t时间时的浓度k：降解速率常数t：培养时间t0.5：半衰期2/13/202419土壤降解的试验方法质量要求残留分析方法：准确度：添加回收率70~110%灵敏度：小于初始浓度10%*1/3初始浓度按照加入量，在土壤中的平均含量采样点：至少7个点，其中5个点浓度为初始浓度的20%~70%2/13/202420土壤残留评价——特性等级的划分等级半衰期（月）残留性降解性1<1低残留B易降解21~3低残留A较易降解33~6中残留B中等降解46~12中残留A较难降解5〉12长残留难降解2/13/202421农药环境安全性评价的主要内容水解2/13/202422水解的概念农药在水环境中的降解是农药在水环境中引起的化学降解的现象。非生物降解的主要形式之一。它是评价农药在水体中残留特性的指标。一般的农药，在高温、偏碱性的水体中容易降解。表示：降解半衰期：t0.5

2/13/202423水解的试验方法试验材料缓冲溶液pH5.0pH7.0pH9.0农药纯品/原药配制水溶液，有机溶剂助溶（少量，<1%，无干扰：丙酮、乙醇）培养箱：0~50℃pH剂、灭菌锅残留分析仪器设备、材料前处理：旋转蒸发器化学试剂、玻璃器皿分析仪器：气相色谱、液相色谱、色谱-质谱联用仪2/13/202424水解的试验方法试验方法配制药液：缓冲溶液，≦0.01mol/L或饱和浓度的一半培养：50℃，5天水解〈10%，稳定，停止试验水解〉10%，进一步做，25℃、50℃培养，从0时起，采样7次以上，直至>90%如有高毒降解产物，需同时测定灭菌：高温高压，缓冲溶液与容器，校正pH2/13/202425水解的试验方法计算公式

Ct=C0e-ktt0.5=Ln2/kC0：初始浓度Ct：t时间时的浓度k：降解速率常数t：培养时间t0.5：半衰期2/13/202426水解的试验方法质量要求残留分析方法：准确度：添加回收率70~110%灵敏度：小于初始浓度10%*1/3温度要求：±0.5℃平行样误差：<2.5%采样点：至少7个点，其中5个点浓度为初始浓度的20%~70%2/13/202427农药水解特性等级划分等级半衰期（月）降解性1<1易降解21~3较易降解33~6中等降解46~12较难降解5〉12难降解2/13/202428农药环境安全性评价的主要内容光解2/13/202429光解的概念

残留在大气、作物、水体和土壤表面的农药在阳光的作用下遭受光降解的能力。重要的非生物降解途径。对农药残留、药效、毒性均有重大影响。表示：降解半衰期：t0.5

2/13/202430光解试验试验材料蒸馏水农药纯品/原药配制水溶液，有机溶剂助溶（乙腈，无光敏性）光化学反应仪：光源（汞灯或氙灯）、光反应管、马达、温控装置紫外强度计、照度计残留分析仪器设备、材料前处理设备化学试剂、玻璃器皿分析仪器：气相色谱、液相色谱、色谱-质谱联用仪2/13/202431光解试验试验方法配制药液：蒸馏水培养：50℃，5天反应：于光化学反应装置中光源：汞灯或氙灯，距光反应管13.5cm温度：25±2℃，压缩机或风机控温采样：7次以上检测2/13/202432光解试验计算公式

Ct=C0e-ktt0.5=Ln2/kC0：初始浓度Ct：t时间时的浓度k：降解速率常数t：培养时间t0.5：半衰期2/13/202433光解试验质量要求残留分析方法：准确度：添加回收率70~110%灵敏度：小于初始浓度10%*1/3蒸馏水：pH6.0~7.5光源：推荐氙灯，光谱特性与太阳光相似采样点：至少7个点，其中5个点浓度为初始浓度的20%~70%2/13/202434农药光解特性等级划分等级半衰期（t0.5）降解性1000W氙灯(h)300W汞灯(min)1<3<5易降解23~65~15较易降解36~1215~30中等降解412~2430~60较难降解5>24>60难降解2/13/202435农药环境安全性评价的主要内容土壤吸附作用2/13/202436土壤吸附作用的概念农药吸附作用是指农药被吸持在土壤中的能力。农药在固液两相之间分配达到平衡的比值。表示：吸附常数Kd农药吸附能力的强弱决定于农药的水溶性，分配系数与离解特性等。水溶性小，分配系数大，离解作用强的农药，容易被土壤吸附；土壤性质对农药吸附作用的影响也很大。有机质含量高，代换量大，质地粘重的土壤，就容易吸附农药。农药吸附性能的强弱对农药的生物活性、残留性与移动性都有很大影响。评价移动性、持留性、生物活性、环境毒性的重要指标。2/13/202437土壤吸附作用试验方法试验材料土壤3种以上性质差异较大：以pH、有机质、粘粒含量衡量风干，过筛农药纯品/原药溶于0.01mol/LCaCl2溶液，有机溶剂助溶（少量，无干扰：丙酮、乙腈）恒温振荡器、离心机残留分析仪器设备、材料前处理设备化学试剂、玻璃器皿分析仪器：气相色谱、液相色谱、色谱-质谱联用仪2/13/202438土壤吸附作用试验方法预试验称量土壤，加入药液(<5mg/L)，保持一定的水土比5：1，10：1，20：1，100：1恒温振荡：25±2℃，24小时离心，取上清液，测定农药含量同时设置两组空白：土壤+0.01mol/LCaCl2溶液，0.01mol/LCaCl2农药溶液计算吸附率若吸附率>25%，进行解析试验和高级吸附试验2/13/202439土壤吸附作用试验方法解析试验分出上清液，土壤固相中加入0.01mol/LCaCl2溶液24小时振荡，离心分离测定上清液农药含量重复操作一次合计两次农药含量计算解析率若吸附率<75%，进行质量平衡试验2/13/202440土壤吸附作用试验方法高级吸附试验配置药液：0.04,0.2,1.0,5.0mg/L操作同预试验求出吸附系数2/13/202441土壤吸附作用试验方法质量平衡试验选择适当的提取剂，提取、检测土壤中的农药含量验证吸附试验过程中的农药质量平衡2/13/202442土壤吸附作用试验方法数据处理吸附率M-Ce×V0xA=×100=×100MMM：平衡时未加土壤的溶液中农药含量Ce：土壤吸附平衡时，水相中浓度V0：水溶液体积

x：吸附于土壤中的农药量2/13/202443土壤吸附作用试验方法数据处理解析率

(C1-C2)V-(V0-V)CeD=×100XC1：第一次解析浓度C2：第二次解析浓度V0：吸附试验前水相的体积V：吸附试验后水相的体积2/13/202444土壤吸附作用试验方法数据处理吸附常数

Cs=Kd

×Ce1/nCs=x/MCs：土壤对农药的吸附浓度Kd：土壤吸附系数1/n：Cs与Ce关系曲线斜率求得：

LnKd=LnCs-1/nLnCe2/13/202445土壤吸附作用试验质量要求水、土壤残留分析方法：准确度：添加回收率70~110%灵敏度：水中小于最小平衡浓度1/3助溶剂：<0.2%质量平衡试验回收率>75%2/13/202446农药土壤吸附性等级划分等级Kd吸附性1>200易吸附250~200较易吸附320~50中等吸附45~20较难吸附5<5难吸附2/13/202447农药环境安全性评价的主要内容土壤淋溶作用2/13/202448土壤淋溶作用试验

农药淋溶作用是指农药在土壤中随水垂直向下移动的能力。影响农药淋溶作用的因子与影响农药吸附作用的因子基本相同，恰好成反相关关系。一般来说，农药吸附作用愈强，其淋溶作用愈弱。另外与施用地区的气候、土壤条件也关系密切。在多雨，土壤砂性的地区，农药容易被淋溶。农药淋溶作用的强弱，是评价农药是否对地下水有污染危险的重要指标。2/13/202449土壤淋溶作用试验试验材料

3-4种代表性土壤砂土、砂壤土、粉砂壤土、粘壤土风干，过筛2/13/202450土壤淋溶作用试验薄层层系法柱淋洗法2/13/202451土壤淋溶作用试验薄层层系法

制泥浆，涂于层析板（0.5-1mm），晾干点药，以水为展开剂展开放射性标记农药：显影法求出Rf值普通农药：薄板平均分成6段，检测各段含量

2/13/202452土壤淋溶作用试验柱淋洗法2cm内径塑料或玻璃柱，装成30cm高土柱上端加药，定量、定速淋洗，收集测定淋出液淋洗后，土柱切成6段，测定各段农药含量2/13/202453土壤淋溶作用试验数据处理

Rf=lmax/Lmaxlmax：原点至色谱斑点中心距离Lmax：原点至展开剂前沿的距离2/13/202454土壤淋溶作用评价等级Rf移动性10.9-1极易移动20.65-0.89易移动30.35-0.64中等移动40.1-0.34不易移动50-0.09不移动2/13/202455农药环境安全性评价的主要内容挥发性

农药挥发作用是指在自然条件下农药从植物表面、水面与土壤表面通过挥发逸入大气中的现象。农药挥发作用的大小除与农药蒸气压有关外，还与施药地区的土壤和气候条件有关。农药残留在高温、湿润、沙质的土壤中比残留在寒冷、干燥、粘质的土壤中容易发挥。农药挥发性的大小，也会影响农药在土壤中的持留性及其在环境中在分配的情况。挥发性大的农药一般持留较短，而在环境中的影响范围较大。

2/13/202456农药环境安全性评价的主要内容生物富集作用生物富集作用是指农药从环境中进入生物体内蓄积，进而在食物链中互相传递与富集的能力。农药生物富集作用大小与农药的水溶性、分配系数以及与生物的种类，生物体内的脂肪含量，生物对农药代谢能力等因子有关。农药的生物富集能力愈强，对生物的污染与慢性危害愈大。

2/13/202457生物富集作用测定生物富集系数的方法有静态法与动态法两种。对一般农药，通常先采用静态法试验。用静态法测定BCF时，国外常用的鱼种有迥鱼、鲤鱼、虹鳟、鲢鱼等，在我国建议用鲤鱼作试验。试验用两种浓度，各重复一次，并设加药不养鱼与养鱼不加农药的两种空白对照。前者通过测定来校正试验鱼缸中因挥发与降解所造成的农药浓度的变化，后者用作在试验结束时检查试验组鱼体重量有无异常变化与测定鱼体内的脂肪含量。试验农药用纯品，难溶于水的可用少量低毒、不易降解的有机溶剂（如叔丁醇或二甲亚砜）助溶，加量<0.1ml/L。2/13/202458生物富集作用于0、6、24、48、96、144、192小时时分别从各处理中取水样测定农药含量的变化，并喂给适量饲料（20mg/g鱼）至第8天时取出全部鱼样，称体重后每组分成两份测鱼体内农药含量。试验结果计算：用对照组水体中农药的含量，来校正养鱼组水体中的农药含量，求出被鱼体摄入农药的真实值。在试验结束时水体中农药含量变化已达到平衡，则此时鱼体对农药的富集系数为：BCF=Cfs/CwsCfs：已达到平衡时鱼体内农药含量（ppm)Cws：已达到平衡时水体中农药含量(ppm)如果在试验结束时，水体中农药浓度尚未达到平衡，则用上述公式求出的富集系数值应注明是8天的结果，即用BCF8天表示。2/13/202459农药的理化性质对生态环境安全性影响

蒸气压

农药进入环境后在气、水、土各介质间迁移、扩散与再分配特性受农药蒸气压影响很大，蒸气压愈大，农药就愈容易从土壤或水域环境转向大气空间，这样就容易进一步引起农药的光降解作用；农药在土壤中的移动性能，受农药蒸气压影响也很大。2/13/202460农药的理化性质对生态环境安全性影响水溶性

水溶性的大小对农药在环境中的移动性、吸附性、生物富集性以及农药的毒性都有很大影响。水溶性大的农药容易从农田流向水体，或通过渗漏进入地下水之中，也容易被生物吸收，导致对生物的急性危害；水溶性弱脂溶性强的农药，容易在生物体内积累，引起对生物的慢性危害。2/13/202461农药的理化性质对生态环境安全性影响分配系数

分配系数是指农药在互不相溶的两种极性与非极性溶剂中的分配能力，分配系数大的农药容易在非生物物质与生物体内富集，分配系数小的农药，容易在环境中扩散，从而也扩大了农药的污染范围。2/13/202462农药的理化性质对生态环境安全性影响化学稳定性

农药的稳定性是指农药进入环境后遭受物理、化学因子影响时分解难易程度的指标，这是评价农药在环境中稳定性基础资料。2/13/202463农药的理化性质对生态环境安全性影响杂质

一般优质农药其杂质成份对农药影响不大，但有些农药的杂质成份则成了影响环境安全的主要对象，如666中的几点种异构体，氟乐灵中的亚硝烟弥漫胺，甲胺磷中的不纯物等，因此农药的纯度和不纯物的成份必须在基础资料中提供。2/13/202464农药对非靶标生物的毒性作用鸟类2/13/202465鸟类毒性试验试验材料鹌鹑：孵化后饲养30天大小均匀、体重基本一致，健康、活泼雌雄各半实验条件25±2℃，自然光照器材：鸟笼

2/13/202466鸟类毒性试验试验方法1：经口一次性染毒法一次性给药预试验：较大间距设置4~5个浓度组，得到最低全致死浓度和最高全存活浓度正式试验：设置5~7个浓度组，每组10只，设空白对照，2~3个平行

25±2℃，自然光照，正常饲养观察7天，记录死亡数统计，求出LD50和９５％置信限2/13/202467鸟类毒性试验试验方法２：喂饲法将药剂定量拌入饲料或转入胶囊按体重算出每只鹌鹑的食药量，一次性喂饲预试验：较大间距设置4~5个浓度组，得到最低全致死浓度和最高全存活浓度正式试验：设置5~7个浓度组，每组10只，设空白对照，2~3个平行

25±2℃，自然光照，正常饲养观察7天，记录死亡数统计，求出LD50和９５％置信限2/13/202468鸟类毒性试验2/13/202469鸟类毒性试验数据处理

寇氏法直线内插法概率单位图解法计算机软件2/13/202470鸟类毒性试验质量控制投喂药品或饲料期间，农药含量不能低于规定含量的８０％试验结束时，对照组死亡率不得超过１０％。鸟类应适应环境条件和食物，减少外部因素的影响。观察不正常行为、中毒症状。2/13/202471鸟类毒性评价标准LD50（mg/kg）毒性级别>500低毒50~500中毒10~50高毒<10剧毒2/13/202472农药对非靶标生物的毒性作用蜜蜂摄入毒性触杀毒性2/13/202473蜜蜂毒性试验试验材料意大利成年工蜂要求健康、蜂龄一致供试药剂：原药或制剂以蒸馏水配制，难溶于水的，以少量有机溶剂助溶器材：蜂笼（上下纱网）生化培养箱点滴器、烧杯……2/13/202474蜜蜂毒性试验摄入毒性将蜂引入蜂笼，每笼20只配制药蜜：药液：蜂蜜=2：1装入小烧杯，加脱脂棉，倒置于蜂笼上部试验宜在25℃±2℃微光条件下进行预试验：间距较大的4~5个浓度，得到最低全致死浓度和最高全存活浓度正式试验：设5~个浓度，每组30只，，2~3个平行，设空白对照，记录24小时死亡数统计数据，计算LC50及95%置信限2/13/202475蜜蜂毒性试验触杀毒性试验宜在25℃±2℃微光条件下进行供试农药用丙酮溶解用麻醉法先将蜜蜂麻醉（麻醉时的死亡率不得大于10%）于蜜蜂的前胸背板处，用微量注射器点滴1.7ul药液。预试验：间距较大的4~5个浓度，得到最低全致死浓度和最高全存活浓度正式试验：设5~7个浓度，每组30只，，2~3个平行，设空白对照，记录24小时死亡数统计数据，计算LD50及95%置信限2/13/202476蜜蜂毒性试验2/13/202477蜜蜂毒性试验质量控制试验期间，农药含量不能低于规定含量的８０％试验结束时，对照组死亡率不得超过１０％。观察不正常行为、中毒症状。2/13/202478蜜蜂毒性评价2/13/202479农药对非靶标生物的毒性作用家蚕2/13/202480家蚕毒性试验试验材料家蚕：常用品种二龄供试药剂：原药或制剂以蒸馏水配制，难溶于水的，以少量有机溶剂助溶恒温培养箱、熏蒸箱（60*40*70cm，带燃烧室）、培养皿（9cm）等2/13/202481家蚕毒性试验食下毒叶法熏蒸法2/13/202482家蚕毒性试验食下毒叶法在培养皿内饲养，每组20头浸泡桑叶：不同浓度的药液定量5mL/10g桑叶投喂24小时预试验：间距较大的4~5个浓度，得到最低全致死浓度和最高全存活浓度正式试验：设5~7个浓度，2~3个平行，设空白对照，记录24、48、96小时、三龄死亡数统计数据，计算LC50及95%置信限2/13/202483家蚕毒性试验熏蒸法培养皿内，放新鲜桑叶，20头家蚕放入熏蒸箱，接通通风装置将药物放于电热蚊香加热器上加热记录家蚕反应症状8小时后取出正常饲养，观察至48小时或至三龄起统计8、24、48小时死亡率设置9个重复，同时设空白对照统计数据，计算LC50及95%置信限2/13/202484家蚕毒性试验质量控制空白对照死亡率不超过10%保证家蚕正常的饲养条件控制记录：摄食：减少和拒食不适：逃避、昂头、晃头、甩头、扭曲挣扎、吐水体症：大小、体色、肿胀、侧倒、静卧死亡率2/13/202485家蚕毒性试验2/13/202486家蚕毒性评价LC50(mg/kg桑叶)毒性级别田间施药浓度/LC50风险级别>200低毒>10极高风险20~200中毒1.0~10高风险0.5~20高毒0.1~1中等风险<0.5剧毒<0.1低风险2/13/202487农药对非靶标生物的毒性作用鱼类2/13/202488鱼类毒性试验静态法：整个过程不更换药液不易挥发、难降解的农药流动法：恒定浓度的药液流动经过有鱼的试验容器，适用语易水解、易挥发、耗氧量大的农药半静态法：最常用间隔12或24小时更换药液，保持药液不低于初始农药浓度的80%2/13/202489鱼类毒性试验2/13/202490鱼类毒性试验试验材料鲤鱼的幼鱼（3-4cm)、斑马鱼（3cm)等健壮无病，大小一致驯养7-14天，喂食（1-2次/天），曝气充氧光照12-16h试验前24h停止喂食驯养期间死亡不超过5%水：自来水，曝气24以上，硬度50-250mg/LpH6-8.5溶氧量：5.8mg/L以上药液：蒸馏水溶解，可加有机溶剂/乳化剂助溶，1-2天配制一次，低温保存2/13/202491鱼类毒性试验试验条件：20℃，自然采光预备试验较大间距浓度梯度，每缸5尾24h，确定最低全致死浓度和最高全存活浓度，确定正式试验浓度范围正式试验5-7个浓度组，每缸10尾，96小时，设空白对照3-6小时内特别注意观察，之后每24h观察一次，记录平衡、游动、呼吸、体色变化温度、pH、溶氧量数据处理：96h-LC50,寇氏法、直线内插法、计算机软件2/13/202492鱼类毒性试验质量控制空白对照死亡率不超过10%以重铬酸钾为参考物质，斑马鱼试验，24-LC50必须处于200-4—mg/L之间溶氧量不低于5.8mg/L保证其他条件正常2/13/202493鱼毒性评价LC50（mg/L）毒性级别>10低毒1~10中毒0.1~1高毒<0.1剧毒2/13/202494蛙类毒性试验农药对蛙类的毒性测定，选用泽蛙的蝌蚪为试验材料。供试农药用制剂或原药，对难于溶于水的农药，可用少量内酮与吐温-80助溶，用量不得>0.1ml/L。试验材料取自田间自然繁殖的蝌蚪，采回后先预养一天，再选健壮、个体均一的蝌蚪供试验用；试验容器为直径18cm、高9cm的玻璃缸，加入1000ml试液，每个处理投放10头蝌蚪，重复三次。正式试验前先用预试。然后在最高安全浓度与最低全致死浓度范围之间按等比级差设5-7个处理，并设空白对照，试验在自然气温条件下进行。试验开始后24小时、48小时观察记录蝌蚪的死亡率，用概率统计法求出LC50值与95%的可信限值。农药对蛙类的毒性分级标准，可参照鱼类的毒性分级标准。

2/13/202495蚯蚓毒性试验为了使试验结果具有可比性，采用人工配制的标准土壤作为试验材料，将农药按一定的级差，配成5-7个等级，分别均匀地加入1公斤土壤中，调节到一定的湿度后，装于2升的培养缸中。每个处理养入个体大小相近的健壮蚯蚓10条，在20±2℃和有适量光照条件下进行试验。供试农药用制剂或纯品，对难溶于水的农药，可用丙酮助溶。拌入土壤后先将丙酮挥发掉后再做试验。蚯蚓的毒性试验需连续进行14天，于第7与14天时测定蚯蚓的死亡率，用概率法求半致死浓度LC50与95%的可信限值。上述方法得到的试验结果，建议按照LC50值的大小将农药对蚯蚓的毒性划分为三个等级：<1ppm的为高毒农药，1-10ppm的为中毒农药，>10ppm的为低毒农药。2/13/202496土壤微生物毒性试验本试验用测定土壤微生物呼吸强度的方法，评价施用农药后对土壤微生物总活性影响的指标。供试土壤要用两种有代表性的新鲜土壤，并要提供pH值、有机质、代换量、土壤质地等数据。供试农药最好用制剂，也可用原药或纯品。每种土壤设1ppm、10ppm、100ppm三组不同浓度处理，并设空白对照，每组重复三次。难溶于水的农药，可用丙酮助溶。2/13/202497土壤微生物毒性试验将药液先与少量土混匀，待丙酮发净后，再均匀拌入到处理的土壤中。每个处理用土50克，将土壤含水量调节成田间持水量的60%，装于100ml小烧杯中，与另一个装有标准碱液的小烧杯一起置于2升容积的密闭瓶中，于25±1℃的恒温箱中培养。试验开始后的第5、10、15天时更换出密闭瓶中的碱液测定吸收的CO2含量。当打开密闭瓶更换碱液时，同时更换了密闭瓶中的空气，以保证密闭瓶中的氧压维持在一定水平。用土壤中CO2释放量的变化，反映土壤微生物受农药抑制的程度，并以此为依据，建议将农药对土壤微生物的毒性划分成以下三个等级：用1ppm处理土壤，在15天内抑制值>50%的为高毒农药；用10ppm处理的土壤，抑制值>50%的为中毒的农药；抑制值<50%的为低毒农药2/13/202498水蚤毒性试验

试验用的蚤种选用常用的大型蚤（Daphniamagna），蚤龄6-24小时，试验