NY-T 4353-2023 蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的测定 液相色谱-串联质谱法

KS6708020CCSR31中华人民共和国农业行业标准NY/T4353-2023蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的测定液相色谱-串联质谱法Determinationofmcthykclcnocystcinc,sclcnotmcthionim*andsclcnocystcinc

invegetablesbyliquidchromatography-tandemmassspectrometry2023-08-01实施2023-04d12023-08-01实施屮屮人比共和1对农收农村部发布NY/T4353-2023NY/T4353-2023IINY/T4353-2023NY/T4353-2023II本文件按照GB/T1.1—2020＜标准化工怍导则第1部分：标准化文件的结构和起孕规则》的规定起革。语注意本文件的某些内容0J能涉及专利。本文件的发布机构不承拘识别专利的贲任。本文件中农业农村部农产品质tt安全监管司提出。本文件由农业农村部农产品苕养标准专家委员会归门。本文件起孕笮位：汀.內省农收科学院农产品质墩安全与标准研究所，江rt省农学会、江时省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所。本文件主要起草人：廖FL根、张莉.向建军、万鹂、裒面娟、沈思言、张大文、拽益华、罗林广、載廷灿.邱索艳.熊艳。蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的测定

液相色谱-串联质谱法1范困本文件规定了蔬菜中甲基晒代肀胱気酸、晒代蛋気酸和晒代肀胱気酸;Vft的液相色谱申联质谱测定方法-本文件适用f蔬菜中甲基柄代半胱氨酸.柄代蛋氨酸和硒代半胱氨酸含虽的測定.2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注H期的引用文件，仅该h期对应的版本适用r•本文件：不注h期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改中)适用r本文件，GB/T6682分析实賒室川水规格和试验方法3术语和定义本文件没冇需要界定的术语和定义《4原理试样屮聃代氨桂酸用蛋0酶水解捉取.经超滤行离心净化.用液相色讲申联质讲仪检测.基质匹配标准溶液校准.外标法定蛍。5试剤和材料5.1除另有规定外.所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.2试剂5.2.1甲醇(CH.OH)：色谱纯。52.2甲酸(HCOOH)：色进纯.5.2.3蛋白酶(proteaseXIV.CAS号,9036-06-0)!酶活力＞3.5U/mg.4抗坏血酸(C6H8Ot，CAS号：50-81-7).5.2.5三羟甲基氨基甲烧(C,H„NO”CAS号,7786-1).5.2.6盐酸(HC1).浓度为36%-38^.5.3试剂配制5.3.1蛋(JW溶液(5.0mg/mL),称取蛋lJW(5.2.3)250mg,用水稀_定容至50mL,摇匀.备用.现用现配，5.3.2抗坏血酸溶液(0.2mol/L)：称取抗坏血酸(5.2.4)3.52g，用水稀释定容至100mL.摇匀用.现用现配。5.3.3三羟甲基気基甲烷-ft険(Tris-HCI)缓冲溶液(10.0mmol/L.pII7.5)：称取0.606g三羟甲基気堪屮烷(5.2.5＞溶于450niL水中.用盐酸(5.2.6)调节到pH7.5.加水稀释至500mL.摇匀，备用，5.3.4甲妝溶液(0.1%):黾取甲酸(5.2.2)0.1mL.用水稀释定容至100mL.播匀.备川.5-4标准品5.4.1甲基吶代半胱気酸(CJI.NOjSe.CAS号：26046902)：纯度為98%,或经R家认证并授予标准物M/14353-2023M/14353-2023IINY/T4353-2023质证书的标准物质。5.4.2硒代蛋氨酸＜CSH,NO:Se.CAS号J464-42-2）:纯度）98%.或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.4.3納'代半胱^Sf（C3H,NO:Se.CAS5｝：10236585）:纯度為95%,或经W家认证并授子标准物质证书的标准物质、5.5标准溶液配制5.5.1甲基®代半脒氨酸标准储备溶液（1000mg/L.按Se计）：取甲基抽代半胱氨酸＜5.3.2）标准品23.1mg（梢确至0.01mg）,fiflOmL容fi瓶中.用水溶解并定容。于0V-41冷《保存.有效期为1个月.5.5.2硒代蛋衩酸标准储备溶液（1000mg/L.按Se计）：取W代蛋铤酸（5.4.2）标准品24.8mg（枏确至0.01mg）.jg于10niL祥呈瓶中.用水溶解并定容，于0V冷藏保存，有效期为丨个月.5-5.3硒代卞胱気酸鉍准储备溶液（1000mg/L.按Se计〉：取晒代半胱気酸标准品（5.4.3）21.2mg（精确至0.01mg）,置于10mL容S瓶屮，用0.5mL甲酸＜5.2.2）溶解后，用水溶解并定容，于Ot-4*C冷铒保存.有效期为1个月。5.5.4混合秘准工作溶液（1.0nig/L.按Se计〉：分别S取0.05mL标准储汝溶液（5.5.1,5.5.2,5.5.3）于50mL容ft瓶中.用水稀释并定容至50mL.现用现配，5,6材料5.6.1微孔滤膜：水相.0.2256.2超滤离心管：15mL/3ku,或性能相当者。6仪器设备6-1液相色谱申联质谱仪：配有电喷雾离子源（ES1）.分析天f■:感go.ooooik和o.oig。pH计.精度0.1,6.4涡旋混合仪。6.5恒水浴振荡器.6.6商速肉心机，转速不低于12000r/min。6.7组织捣碎机。7试验步骤7.1试样的制备将蔬菜样品町食部分经组织捣碎均分成2份.装人洁净容器内.作为试烊密封并标明标记。7.2试样提取与净化称取试样2g（梢确至0.01g＞，g于50mL离心行屮.依次加人蛋0酶溶液（5.3.1）2.0mL,抗坏血酸溶液（5.3.2）0.25mL和丁ris-HCL缓冲溶液（5.3.3）7.75niL,涡旋混匀.于恒温水浴振荡器上371C条件下振荡提取12h，12000r/min离心10min。提取液经0.22pm滤膜过滤转移至15mL离心管中.再将过滤后5.0mL提取液转移至超滤离心讶（5.6.2）中，4000r/min离心10min.取0.1mL超滤液加人0.9mL甲酸溶液（5.3.4）.混匀待测，7.3标准曲线绘制取空白试样.按7.2处理得到超滤溶液.准确fi取0.1mL.分别准确移取适费混合标准工作溶液（5.5.4）•用甲酸溶液（5.3.4）稀释定容至1.0mL.fid制成浓度为0.2ng/mL、O.5ng/mL,1.0ng/tnL、2.0ng/mL,5.0ng/mL和10.0ng/mL堆质匹fid标准系列溶液，液相色谱串联质谱仪测定，以待测物待征离子质S色谱图峰面积为纵坐标、对应浓度为横坐标绘制标准曲线。7<741液帽色灞•，条件»>iBlT»C.fl.XOnitnX|iM)mm.KH*R••我fl味帽**)Aib>班祥看：IO.OpLtc)ft速i(X>2itiLminid>1111.15VielMtJlHLA\1甲觭水堉滅<5.3^hB为甲«<3.2.1>.佛遘洗序ft衣I表1韉赓浼质種序AiMBwXXO1.5柿4-t0Im0100么1l⑽•C.0l⑽0742质0黎考篆件»鸚乎坤I电，零高f«hb»h鎭方武I庄离rmiiC)柃M/F式：名反应EMid>嘩蒡电屮.Af源溢哎.較解ft溢度M丑气汝.邊，參数应优化凝ttSiH f<I.SWAf<4MH傳能姗阽X2、表2Z性囊子对.X■萬子M和礮《«■定忭离F財•珣槽•曾<網z-eV)«•礪甲•硒代擎技韁齩I/9&<2S)l«C9/$6.1讀1麟)IU,9/9^(25)_代醑觐齩1科l&!>.«4纛>IMm.s<n»>•Kftttl・1灿139.Mg>IM74.1<IS>148/71.1(15>743定ttMS在PlHMiAJfrftF.iK择溶*中甲事明代牟貌觐廉.承代蛋铒《扣《代半醃氡匿的保朗时_与》«RKM:檐I.作鹱屮屮UM代t醃城M.M代代貌跌《的保明柑ctM廉件2.5；U内.11柃別_的离f的帽*<I ^nr?a<的•求表3定拽《3鰣相X稾子李霪的允件相11编筹tflttw子蕈It.*->20-50爾鶴«.•±2S:so744定邏MS•Hn••Il.的VOK鎵•*_•(!•MA9,•■M«,糟__识场I.V«RRff•••&.*杆解液屮待M物嗚屯M均应存itS检M的线汴范闲内，10超出纹件拒闲.应由ft试费或将iA样解液》«咕F.lli!l»«磨瀛作_曲•释后盧鶬颺定.攀Att殲定SM.iAH^Mk屮的峰鏖织V-II鴻的崎iAIF'MC不珀dl<>Ati£&讲吒讲暮"F.确代氰V«>>4淋离f«観&供mV.Rt承A.\Y7I4353-2023试》T屮中•确代tn*明，*代霣諷貌孩驗的:tli<w、汁）以场•讣ttih.托公式⑴计算-f-XVXA<1Wr= -•**•，"•》"•*•••，••••*"•"•・•••••*・••・••■•••••••••<1mXIOOOu iAH屮碱刑埘计it鐘的的的，學似为龙rQ.<mRkK）>e.由如准•浅或嶙点瑚押的iAH漪液中KM绝分场綾哝遭的的M.申Kr泠的免每喪碍<11«rtii-11V 的教M.黎忪为《Q<inL>i/. 梅《液的K样供的IM 试锌味靈的ttfi.笮位为％（«>:«^«AJRUf 的W<f/i1.•l¥«JP6«tt7.9轜密遣6*tt1»ftbftWW2次觼 农的*«4、科WiJ算f均的的：O10X他A比中咿tti