高效液相色谱法测定牡丹皮丹皮酚含量

高效液相色谱法测定牡丹皮丹皮酚含量姓名：叶积财班别：09中鉴1班学号：0906503109摘要：目的:用高效液相色谱法(HPLC)测定牡丹皮中丹皮酚含量。方法:采用HPLC测定丹皮酚含量，0DS-C18色谱柱(150mmX4.6mm,5Mm),流动相为甲醇：醋酸：水(58：2:40)，检测波长274nm，流速1.0ml/min,柱温35°C。结果:线性范围在选定色谱条件下线性范围良好，丹皮酚的样品加样回收率为98.75%,RSD1.1%，所选牡丹皮的丹皮酚含量为1.51%。结论：所用方法分离度好、快速、简便、适用于丹皮酚的含量测定，可作为其质量控制方法。关键词：高效液相色谱法；丹皮酚；含量测定牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮，味辛，微寒，人心肝肾三经，有消炎抗菌，清热，活血散淤，降级血压之功效［1］。主要成分有丹皮酚、丹皮苷、丹皮原苷、芍药苷等。其中以丹皮酚为主要有效成分，为牡丹皮药材的质量控制标准。丹皮酚具有抗炎、降压、止血等多种药理作用［2］。本文对牡丹皮加工方法及含量测定进行系统的研究，为牡丹皮的合理开发利用提供依据，为质量控制提供有效的方法。1材料与仪器2690液相液相色谱仪，PDA996紫外检测器，QC-250超声波清洗器，牡丹皮，甲醇，95%乙醇，2000ml圆底烧瓶，10ml容量瓶，电子天平。2方法与结果牡丹皮的提取分离：取牡丹皮100g，粉碎。将其置2000ml圆底烧瓶中口450ml水，加10mL乙醇和40gNaCl,浸泡，浸泡时间选择120min为宜。用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约300ml，将蒸馏液放冷，有白色针状结晶析出，滤去结晶，干燥、称重。如结晶不纯，可重结晶一次。若在制取过程中得不到白色结晶，只有油珠状物质沉出，可在蒸馏液中加入少量晶种，摩擦瓶壁后，即有较大量的丹皮酚结晶析出。2.1色谱条件ODS-C18色谱柱(150mmX4.6mm，5^m)；流动相为甲醇：醋酸：水(58:2：40)；检测波长274nm，流速1.0ml/min，柱温35C，采用外标峰面积法计算含量，理论塔板数均大于104,对称因子均在0.95〜1.05与相邻杂质峰的分离度均大于2.0,切经DAD进行峰纯度检测，表明为单一成分峰。阴性对照试验：按样品处方量制备不含牡丹皮药材的阴性对照样品，按供试品的制备方法制备阴性对照溶液。结果表明，阴性对照溶液对丹皮酚测定无干扰。见图1。2.2对照品的制备精密称取丹皮酚对照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液0.1mg/ml。精密量取上述溶液2ml,置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液0.02mg/ml。2.3供试品制备精密称取牡丹皮药材粗粉0.5g,加入95%乙醇25ml,回流提取10h,溶液浓缩至干燥膏，甲醇超声溶解，转移至10ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜).45如滤过，取续滤液作为供试品。

图1牡丹皮HPLC图1牡丹皮HPLC图谱2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、16.0M注入高效液相色谱仪，按HPLC条件测定峰面积积分值，重复3次，取平均值，以对照品的量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。Y=5318.622+343984X，y=0.9997，表明丹皮酚进样量在0.025〜0.25临之间线性关系良好。2.5精密度试验精密吸取对照品溶液5卩l进样，在上述色谱条件下连续进行测定，得丹皮酚面积RSD0.98%(n=5)，表明该色谱系统具有较好的精密度。2.6稳定性试验取同一批样品溶液，按照上述色谱条件分别在0、2、4、6、8、12、24、36、48h进行测定，以丹皮酚峰面积计算RSD=1.0%，表明在4h内基本稳定。2.7重复性试验取同一批牡丹皮药材干燥粗粉各约0.5g，精密称定，加入95%乙醇25ml，回流提取10h,溶液浓缩至于燥膏，甲醇超声溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45M)滤过，各取续滤液作为供试品溶液，进样5M,按上述色谱条件连续进样3次，结果分别为1.48%，1.53%，1.50%，RSD1.49%2.8加样回收率试验采用加样回收法，取已知含量的样品分别加入丹皮酚对照品，按含量测定项测定样品中丹皮酚的含量，计算回收率，结果平均回收率为98.75%，n=5,RSD=1.1%。本法具有较好的回收率。2.9样品含量测定精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5M,按上述色谱条件测定丹皮酚的峰面积，以外标法计算丹皮酚的含量，每批样品测定丹皮酚含量，测定结果见表1。表1丹皮酚含董测定结果5=阳％）祥品丹皮酚含債Rsn1L504L2421.522L503L4741,733讨论因不同株植物同一采收期的含量有所差异，本实验采用统一株牡丹采样，以减少实验误差。不同采收期牡丹皮中丹皮酚的含量以开花期最高，随后逐渐减少［3］。经过紫外扫描法丹皮酚在274nm有最大吸收峰。对牡丹皮干燥药材设计正交试验考察提取条件，考察项目为溶剂（水、乙醇、丙酮）粉碎度（切片、粗粉、中粉）提取方式（回流、超声、索氏提取）提取时间（8h、10h、12h）结果表明最佳提取时间为95%乙醇回流提取10h。不同体系和比例的流动相，如甲醇一磷酸，甲醇一水，甲醇一醋酸一水，本实验结果显示以甲醇-醋酸-水溶液为流动相时丹皮酚的分离效果最好［4］。实验检测指标符合《中华人民共和国药典》规定时，以丹皮酚含量高低判定药材质量［5］。不同产地中丹皮酚的含量差异比较大，平均含量为1.08%〜2.51%。本文对牡丹皮进行了主要化学成分丹皮酚的含量测定。结果表明：本方法稳定性好，操作简便，干扰少，可准确测定样品中丹皮酚的含量，为观察牡丹的质量控制提供了实验依据。参考文献：［1］ 中华人们共和国药典（一部）［s］•北京：化学工业出版社，2005：234.［2］ 中华人民共和国卫生部•中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂（第12册）［S］.1997；30.［3］ 国家医药管理局中草药情报中心站•植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版，