SN-T 5655.6-2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第6部分：乳

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载0ICS67.50学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载0CCSX04中华人民共和国出入境检验检疫行业标准6SN/T

5655.—20236商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法

6

:it tCommercalkitesit tImmunoassayoffoodalergensinfoodst lPar6:t l-

- -

--

- -

-中华人民共和国海关总署 发

布学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6前 言本文件按照GB/T1.标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件为SN/T5655

《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》的第6部分。SN/T5655已经发布了以下部分:———第1部分:麸质;———第2部分:甲壳纲类动物;———第3部分:蛋类;———第4部分:花生;———第5部分:大豆;———第6部分:乳;———第7部分:扁桃仁;———第8部分:腰果;———第9部分:榛子;———第10部分:巴西坚果;———第11部分:夏威夷果;———第12部分:开心果;———第13部分:胡桃。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国沈阳海关、沈阳国际旅行卫生保健中心、大连民族大学。本文件主要起草人:王金玲、陈文锐、张莹、李莎、吴渺渺、李思德、刘津、梁颖婕、郑秋月。学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6引 言食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏反应。SN/T5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》规定了预包装食品中致敏原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生产质控和食品安全检验监管的检测需求。SN/T5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》拟由下列13个部分构成。———第1部分:麸质。———第2部分:甲壳纲类动物。———第3部分:蛋类。———第4部分:花生。———第5部分:大豆。———第6部分:乳。———第7部分:扁桃仁。———第8部分:腰果。———第9部分:榛子。———第10部分:巴西坚果。———第11部分:夏威夷果。———第12部分:开心果。———第13部分:胡桃。学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第6部分:乳1

范围β本文件规定了预包装食品中乳、酪蛋白、-乳球蛋白致敏原的酶联免疫吸附和乳致敏原的胶体金免β疫层析测定方法。第一法乳酶联免疫吸附法适用于预包装食品中乳致敏原成分的定量检测。第二法酪蛋白酶联免疫吸附法适用于预包装食品中酪蛋白致敏原成分的定量检测。-第三法β乳球蛋白夹心酶联免疫吸附法适用于未经发酵或水解的预包装食品中β-乳球蛋白致敏原-成分的定量检测。-第四法β乳球蛋白竞争酶联免疫吸附法适用于经过发酵或水解的预包装食品中β-乳球蛋白致敏原-成分的定量检测。第五法乳胶体金免疫层析法适用于预包装食品中乳致敏原的定性检测,也适用于预包装食品生产过程中为监控乳致敏原目的对生产原料和环境采样的定性检测。2

规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682

分析实验室用水规格和试验方法l i i iii i

i i

it iAOACGuidel i i iii i

i i

it iAnalyss.AppendixM

:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:com-muniyguidanceandbestpractces3

术语和定义下列术语和定义适用于本文件。13.1l乳

mikl哺乳动物分娩后从乳腺分泌的一种白色或带微黄色不透明液体。以生乳为原料可加工制成乳粉。乳中含有的酪蛋白和β-乳球蛋白在具有营养价值的同时也具有致敏性。23.2-i E酶联免疫吸附测定

enzymelnkedimmunosorbent-i E可溶性抗原或抗体结合到微孔板等固相载体上,基于免疫反应和酶催化显色的一种定性或定量检测方法。1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载633.3

G胶体金免疫层析

coloidalgoldassay;ICAG以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。注:通常为试纸条形式。第一法

乳

酶联免疫吸附法4

原理检测的原理是抗原抗体反应。微孔板中包被有针对乳致敏原的特异性抗体。样品中含有的乳致敏原和特异性抗体结合形成抗体-抗原复合物。加入过氧化物酶标记的抗体后,形成抗体-抗原-抗体复合物,其他物质在洗涤步骤中被除去。加入底物/发色剂呈显色反应。通过测定450nm

波长下吸光度值得出样品中乳致敏原含量。样品中乳致敏原含量与吸光度值成正比。5

试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合

GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。1 ii ii i i

ii

i t i5. 乳致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒:试1 ii ii i i

ii

i t icedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录

A。注:试剂盒详细信息见附录B。 /2 4 335.

1molL氢氧化钠(NaOH):称取40.0 /2 4 335.

1mol/L盐酸(HCl):取8.

mL浓盐酸(7%),用水定容至100mL。 145.

1×致敏原提取缓冲液:按照1∶10比例稀释10×致敏原提取缓冲液浓缩液[见B.e)], 141×

致敏原提取缓冲液可贮于2℃~8℃条件下保存12周。稀释前,若10×致敏原提取缓冲液浓缩液中有结晶,则先将其置于37℃水浴中温育,直至结晶完全消失,充分混匀后使用。5 3 1((25. 含添加剂1的致敏原提取缓冲液:称取1.5g添加剂1[见B.g)],溶解于15mL15 3 1((2化钠(NaOH)(5.2)中,搅拌直至完全溶解,加入700mL1×致敏原提取缓冲液

5.4),用1mol/L盐酸(HCl)(5.3)将pH

值调至9,再用1×致敏原提取缓冲液

5.4)定容到750mL,该提取缓冲液,可用于提取约45个样品。可在室温(0

℃~25

℃)条件下保存3周,不应冷藏,若出现晶体析出情况则即刻弃用。 1625.

1×提取液2:按照1∶2比例用蒸馏水稀释2×提取液2浓缩液[见B.f)]。稀释后的1× 1622可用于提取约45个样品,可在室温(0℃~25℃)条件下保存约3个月。 175.

1×洗涤缓冲液:按照1∶10比例稀释10×洗涤缓冲液浓缩液[见B.d)],稀释后的1× 17液可贮于2℃~8℃条件下保存4周。1条微孔板需约15mL1×洗涤缓冲液洗涤。 181 15.

1×酶标记物:用酶标记物缓冲液[见

B.c)]按照1∶11比例稀释11×酶标记物浓缩液 181 1B.b)],现配现用。如移取100μL11×酶标记物浓缩液到1mL的酶标记物缓冲液[见B.c)]中稀释混匀,足够1条微孔板使用。6

仪器和设备16. 酶标仪:具450nm

波长。12学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6236. 分析天平:感量0.1g。236. 涡旋混匀仪。45 3 6 16. 冷冻离心机:转速≥400045 3 6 16. 水浴锅:7℃,0℃,00℃。6 2 17 36. 单道移液器:6 2 17 36.

八道移液器:0μL~300μL。7

分析步骤17. 样品前处理和提取111 02 (7.. 固体样品:对不少于50g样品进行均质。称取1.0g样品到50mL离心管中,加入11 02 (好的1×提取液2(5.6),盖好管盖后用力上下颠倒混匀。在100℃的水浴中加热10min。用冰浴快速冷却至室温(0℃~25℃),加入16mL预热至60℃的含添加剂1的致敏原提取缓冲液

5.5),按照37.1.

进行下一步处理。3122 (7..液体样品:对不少于50mL样品进行均质。吸取1mL样品到50mL离心管中,加入4mL122 (备好的1×提取液2(5.6),盖好管盖后用力上下颠倒混匀。在100℃的水浴中加热10min。用冰浴快速冷却至室温(0℃~25℃),加入15mL预热至60℃的含添加剂1的致敏原提取缓冲液

5.5),按照37.1.

进行下一步处理。31324 ((7.. 将经过7.1.

或7.1.

处理的样品,涡旋混匀,置于60℃水浴中孵育101324 ((却,000r/min4℃离心10min或过滤,将上清液或滤清液用1×致敏原提取缓冲液

5.4)按比例1∶5[如移取100μL提取物上清液/滤清液到400μL1×致敏原提取缓冲液

5.4)中稀释混匀]稀释进行检测。至此稀释倍数为100倍。27. 测定221 127.. 将预先包被有乳致敏原特异性抗体的微孔板[见B.a)]插入微孔板架并做好标记21 12品均设置双平行。宜一次检测不要超过3条微孔板条(4个板孔),以避免过大的孔间时间差造成对定量结果的影响。22 1 2(( 2(127.. 平行加入100μL标准品1~5[见

B.h)~l)]和样品至微孔中,室温(0

℃~2522 1 2(( 2(1210min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔加入250μL1×洗涤缓冲液

5.7),进行洗涤后,在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL1×酶标记物

5.8),室温(0℃~25℃)孵育10min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔每次加入250μL1×洗涤缓冲液

5.7)洗涤并在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL底物/发色剂[见B.m)],轻轻地水平振摇使其均匀混合,室温(0

℃~25

℃)避光孵育10

min。孵育结束后,加入100μL

终止液[见113B.n)],水平振摇使反应完全,0min内读取450nm

1137.标准曲线制作和测定结果计算 ic以标准品2~5质量浓度为横坐标,以标准品平均吸光度值为纵坐标,绘制半对数曲线 ic中乳致敏原浓度()。也可使用试剂盒配套分析软件RIDASOFT

Win中cubisplne或4p模式进行标准曲线绘制和测定结果计算。3学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×100×f

×V 学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×100×f

×V …………(1)68

分析结果描述18. 结果分析11固体样品中乳致敏原含量按公式()计算:1sXs=

cs式中:sXs

———样品中乳致敏原含量,单位为毫克每千克(mg/kg);sc

———样品液中乳致敏原浓度,单位为毫克每升(mg/L);f ———样品稀释倍数;,V ———定容体积

0.02L;,k2m

———样品的质量,单位为千克(g);k2100———标准品浓度中包含的100倍稀释。液体样品中的乳致敏原含量按式()计算:lXl=c

×f …………(2)l式中:lXl

———样品中乳致敏原含量,单位为毫克每升(mg/L);lc ———样品液中乳致敏原浓度,单位为毫克每升(mg/L);f

———样品稀释倍数。1根据7.

制备样品液时的100倍稀释倍数已经包括在标准曲线中,样品稀释倍数f

只考虑除此12100倍以外的稀释倍数。计算结果保留小数点后两位有效数字。28. 结果表述乳致敏原测定结果用于标签标识管理。乳致敏原测定结果小于定量限时,结果表述为“未检出乳致敏原”;乳致敏原测定结果大于定量限时,结果表述为“检出乳致敏原”并报告具体测定值。9

质量控制19. 试剂失效1出现以下情况之一表明试剂失效,不应进行测定或测定结果作废:a)

贮存在试剂瓶中的发色剂颜色出现蓝色;6

5 8b)

加入终止液后标准品5(7.

6

5 829. 变异系数2在重复性条件下获得的两次独立测定结果的变异系数不应超过10%。10

检出限和定量限7 L 5 L本方法对乳致敏原的检出限为0.0mg/kg(

),定量限为7 L 5 L4学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载611

防污染措施12311. 食品样品的均质可能产生粉尘,为避免污染应在通风橱内进行样品均质的前处理操作。12311. 设备和器具用水冲洗后,用60%乙醇或异丙醇彻底清洁,以消除致敏原(蛋白质)污染。11. 在试验过程中应戴手套操作。在称量、均质样品、样品提取及试剂盒检测四个检测阶段更换手套。第二法酪蛋白

酶联免疫吸附法12

原理利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中的酪蛋白致敏原含量进行酶联免疫吸附测定。样品中的酪蛋白致敏原被微孔中预先包被的酪蛋白特异性抗体捕获,形成抗原-抗体复合物,加入过氧化物酶标记的抗体后,形成抗体-抗原-抗体夹心复合物,其他物质在洗涤步骤中被除去。加入底物/发色剂呈显色反应,通过测定450nm

波长下吸光度值得到样品中酪蛋白致敏原含量。样品中酪蛋白致敏原含量与吸光度值成正比。13

试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合

GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。1 l ii ii i i

ii

i1 l ii ii i i

ii

i t iProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM

:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录C。注:试剂盒详细信息见附录

D。2 4 334 S F i13.

1mol/L氢氧化钠2 4 334 S F i13.

1mol/L盐酸(HCl):取8.

mL浓盐酸(7%),用水定容至100mL。13.牛血清白蛋白(erva,ractonV),不含蛋白酶。 1513.

1×致敏原提取缓冲液

:按照1∶10比例稀释10×致敏原提取缓冲液浓缩液[见

D.e)], 15的1×致敏原提取缓冲液可贮于2℃~8℃条件下保存12周。稀释前,若10×致敏原提取缓冲液浓缩液中有结晶,则先将其置于37℃水浴中温育,直至结晶完全消失,充分混匀后使用。6 3 11

2 1

51 1

5213. 含添加剂1的致敏原提取缓冲液:称取1.56 3 11

2 1

51 1

52化钠(NaOH)(3.)中,搅拌直至完全溶解,加入700mL1×致敏原提取缓冲液(3.),用1mol/L盐酸(HCl)(3.)将pH

值调至9,再用1×致敏原提取缓冲液(3.)定容到750mL,该提取缓冲液,可用于提取约45个样品。可在室温(0℃~25℃)条件下保存3周,不应冷藏,若出现晶体析出情况则即刻弃用。 1713.

1×提取液2:按照1∶2比例用蒸馏水稀释2×提取液2浓缩液[见

D.f)]。稀释后的1×提 172液2可用于提取约15个样品,可在室温(0℃~25℃)条件下保存约3个月。2 1813.

1×洗涤缓冲液:按照1∶10比例稀释10×洗涤缓冲液浓缩液[见

D.d)],稀释后的1×洗涤 18冲液可贮于2℃~8℃条件下保存4周。1条微孔需约15mL1×洗涤缓冲液洗涤。 191 113.

1×酶标记物:用酶标记物缓冲液[见

D.c)]按照1∶11比例稀释11×酶标记物浓缩液 191 1D.b)],现配现用。如移取100μL11×酶标记物浓缩液到1mL的酶标记物缓冲液[见D.c)]中稀释5学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6混匀,足够2条微孔板使用。14

仪器和设备同第6章。15

分析步骤115. 样品前处理和提取11115.. 非水解的且为非乳基的婴幼儿食品、冰淇淋、葡萄酒、巧克力和饮料等样品1101

51

5 6固体样品:对不少于50g样品进行均质,称取1.0g样品到50mL离心管中,01

51

5 660℃的1×致敏原提取缓冲液(3.)。液体样品:对不少于50mL样品进行均质,吸取1mL样品到50mL

离心管中,加入19mL预热至60℃的1×致敏原提取缓冲液(3.)。充分混匀后,0℃水浴加热提取10min。用冰水快速冷却,置于冷冻离心机中4℃下4000r/min离心10min。必要时可使用滤纸再次过滤,收集滤液,取上清液或滤液进行检测。到此稀释倍数为20倍。12 1115.. 除15..12 110 51

4

4 1

71

65 1

4

4 1

71

60 51

4

4 1

71

65 1

4

4 1

71

61

5 5白蛋白(3.)、

mL1×提取液2(3.)和16mL预热至60

℃含添加剂1的致敏原提取缓冲液(3.),充分混匀。液体样品:对不少于50mL样品进行均质,吸取1mL样品到50mL离心管中,加入0.0g牛血清白蛋白(3.)、

mL1×提取液2(3.)和15mL预热至60℃含添加剂1的致敏原提取缓冲液(3.),充分混匀。在100℃水浴加热10min。用冰水快速冷却,置于冷冻离心机中4℃下4000r/min离心10min。必要时可使用滤纸再次过滤,收集滤液,取上清液或滤液进行检测。使用1×致敏原提取缓冲液(3.)对上清液进行1:

稀释(如100μL样品提取液加400μL1×致敏原提取1

5缓冲液(3.)),取稀释液进行检测。到此稀释倍数为1001

5215. 测定221 1215.. 将预先包被有酪蛋白致敏原特异性抗体的微孔板[见

D.a)]插入微孔板架并做好标记,标21 12品和样品均设置双平行。宜一次检测不要超过3条微孔板条(4个板孔),以避免过大的孔间时间差造成对定量结果的影响。22 1 21

81

9 212 1115..

平行加入100μL标准品1~5[见

D.h)~l)]和样品至微孔中,室温22 1 21

81

9 212 1110min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔加入250μL1×洗涤缓冲液(3.),进行洗涤后,在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL1×酶标记物(3.),室温(0℃~25℃)孵育10min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔每次加入250μL1×洗涤缓冲液(4.1.5)洗涤并在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL底物/发色剂[见

D.m)],轻轻地水平振摇使其均匀混合,0℃~25℃避光孵育10min。孵育结束后,加入100μL终止液[见

D.n)],水平振摇使反应完全,0min内读取450nm

波长吸光度值。注:强酸性或强碱性样品提取液应调节pH

值至7.5±0.

后再检测。315. 标准曲线制作和测定结果计算3 ic以标准品2~5质量浓度为横坐标,以标准品平均吸光度值为纵坐标,绘制半对数曲线 ic中酪蛋白致敏原浓度()。也可使用试剂盒配套分析软件RIDASOFT

Win中cubisplne或4P模式6学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×20×f

×V 学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×20×f

×V …………(3)6进行标准曲线绘制和测定结果计算。16

分析结果描述116. 结果分析13固体样品中酪蛋白致敏原含量按公式()计算:3sXs=

cs式中:sXs

———样品中酪蛋白致敏原含量,单位为毫克每千克(mg/kg);sc ———样品液中酪蛋白致敏原浓度,单位为毫克每升(mg/L);f

———样品稀释倍数;,V

———定容体积

0.02L;,km

———样品的质量,单位为千克(g);k20

———标准品浓度中包含的20倍稀释。4液体样品中的酪蛋白致敏原含量按式()计算:4lXl=c

×f …………(4)l式中:lXl

———样品中酪蛋白致敏原含量,单位为毫克每升(mg/L);lc ———样品液中酪蛋白致敏原浓度,单位为毫克每升(mg/L);f

———样品稀释倍数。2根据15.1.

制备样品液时的20倍稀释倍数已经包括在标准曲线中,样品稀释倍数

f

只考虑除此220倍以外的稀释倍数。若按步骤15.1.

用1×提取液2处理的样品,则稀释倍数为100倍,从标准曲线读出的酪蛋白浓度应再乘以5,才是样品中酪蛋白的浓度。计算结果保留小数点后两位有效数字。216. 结果表述2酪蛋白致敏原测定结果用于标签标识管理。酪蛋白致敏原测定结果小于定量限时,结果表述为“未检出酪蛋白致敏原”;酪蛋白致敏原测定结果大于定量限时,结果表述为“检出酪蛋白致敏原”并报告具体测定值。17

质量控制117. 试剂失效1出现以下情况之一表明试剂失效,不应进行测定或测定结果作废:a)

贮存在试剂瓶中的发色剂颜色出现蓝色;1

5 8b)

加入终止液后标准品5(3.

1

5 8217. 变异系数2在重复性条件下获得的两次独立测定结果的变异系数不应超过10%。18

检出限和定量限1 5本方法使用致敏原提取缓冲液时,对酪蛋白的检出限为0.2mg/kg(L),定量限为0.01 57学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6L 7 5 L(

);使用提取液2时,对酪蛋白的检出限为0.1mg/kg(L),定量限为L 7 5 L19

防污染措施同第11章。第三法

β-乳球蛋白

夹心酶联免疫吸附法20

原理-- -- -利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中的β-- -- -于各种未经水解的食品原料和加工食品。样品中游离的β乳球蛋白被微孔中预先包被的β乳球蛋白特异性抗体捕获,形成抗原-抗体复合物,加入过氧化物酶标记抗体后,形成酶标记抗体-抗原-抗体夹心复合物,其他物质在洗涤步骤中被除去。加入底物/发色剂呈显色反应,通过测定450nm

波长下吸光度值得到样品中β乳球蛋白致敏原含量。样品中β乳球蛋白致敏原含量与吸光度值成正比。21

试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合

GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。 -1i i ii i i

ii

i -1i i ii i i

ii

i t itveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendix

M

:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录E。注:试剂盒详细信息见附录F。2 4334 S F i21.

1mol/L氢氧化钠2 4334 S F i21.

1mol/L盐酸(HCl):取8.

mL浓盐酸(7%),用水定容至100mL。21. 牛血清白蛋白(erva,ractonV),不含蛋白酶。 15221.

1×致敏原提取缓冲液:按照1∶10比例稀释10×致敏原提取缓冲液浓缩液[见F.d)], 152的1×致敏原提取缓冲液可贮于室温(0℃~25℃)条件下保存4周。稀释前,若10×致敏原提取缓冲液浓缩液中有结晶,则先将其置于37℃水浴中温育,直至结晶完全消失,充分混匀后使用。6 3 1 /1

3 21

4 2221. 含添加剂1的致敏原提取缓冲液:称取1.5g6 3 1 /1

3 21

4 22化钠(NaOH)(9.)中,搅拌直至完全溶解,加入700mL1×致敏原提取缓冲液(1.1.2),用1molL盐酸(HCl)(9.)将pH

值调至9,再用1×致敏原提取缓冲液(1.1.2)定容到750mL,该提取缓冲液,可用于提取约45个样品。可在室温(0℃~25℃)条件下保存3周,不应冷藏,若出现晶体析出情况则即刻弃用。 1721.

1×提取液2:按照1∶2比例用蒸馏水稀释2×提取液2浓缩液[见F.e)]。稀释后的1× 172液2可用于提取约15个样品,可在室温(0℃~25℃)条件下保存约3个月。2 1821.

1×洗涤缓冲液:按照1∶10比例稀释10×洗涤缓冲液浓缩液[见F.c)]。稀释后的1× 182冲液可在室温(0℃~25℃)条件下保存4周。1条微孔需约15mL1×洗涤缓冲液洗涤。222

仪器和设备同第6章。8学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×100×f

×V 学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

m ×100×f

×V …………(5)623

分析步骤123. 样品前处理和提取111 05 2

4 722

6 323.. 固体样品:对不少于50g样品进行均质。称取1.0g样品到50mL离心管11 05 2

4 722

6 3品,称取加入0.0g牛血清白蛋白(1.)],加入4mL制备好的1×提取液2(1.),盖好管盖后用力上下颠倒混匀。在100℃的水浴中加热10min。用冰浴快速冷却至室温(0℃~25℃),加入16mL预热至60℃的含添加剂1的致敏原提取缓冲液(1.),按照23.1.

进行下一步处理。1272 2

6323.. 液体样品:对不少于50mL样品进行均质。吸取1mL样品到50mL离心管中,加入1272 2

63备好的1×提取液2(1.),盖好管盖后用力上下颠倒混匀。在100℃的水浴中加热10min。用冰浴快速冷却至室温(0℃~25℃),加入15mL预热至60℃的含添加剂1的致敏原提取缓冲液(1.),按照23.1.

进行下一步处理。13 14 2

52

523..将经过21.2.

或21.2.

处理的样品,涡旋混匀,置于60℃水浴中孵育10min后13 14 2

52

5速冷却,000r/min4℃离心10min或过滤,将上清液或滤清液用1×致敏原提取缓冲液(1.)按比例1∶5[如移取100μL提取物上清液/滤清液到400μL1×致敏原提取缓冲液(1.)中稀释混匀]稀释进行检测。至此样品的稀释倍数为100倍。223. 测定221 - 1223.. 将预先包被有β乳球蛋白致敏原特异性抗体的微孔板[见F.a)]插入微孔板架并做好21 - 12标准品和样品均设置双平行。宜一次检测不要超过3条微孔板条(4个板孔),以避免过大的孔间时间差造成对定量结果的影响。22 1 22

81 22

81223.. 平行加入100μL标准品1~5[见

F.g)~k)]和样品至微孔中,室温(022 1 22

81 22

81210min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔加入250μL1×洗涤缓冲液(1.),进行洗涤后,在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL1×酶标记物[见F.b)],室温(0℃~25℃)孵育10min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔每次加入250μL1×洗涤缓冲液(1.)洗涤并在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL底物/发色剂[见F.l)],轻轻地水平振摇使其均匀混合,室温(0℃~25℃)避光孵育10min。孵育结束后,加入100μL终止液[见1 13F.m)],水平振摇使反应完全,0min内读取450nm

1 1323. 标准曲线制作和测定结果计算- ic以标准品2~5质量浓度为横坐标,以标准品平均吸光度值为纵坐标,- ic中β乳球蛋白致敏原浓度()。也可使用试剂盒配套分析软件

RIDASOFT

Win中cubi

splne模式进行标准曲线绘制和测定结果计算。24

分析结果描述124. 结果分析1- 5固体样品中β乳球蛋白致敏原含量按公式()- 5sXs=

cs式中:Xs

———样品中β-乳球蛋白致敏原含量,单位为毫克每千克(mg/kg);9学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6s -c

———样品液中β乳球蛋白致敏原浓度,s -f ———样品稀释倍数;V ———定容体积,为0.2L;km

———样品的质量,单位为千克(g);k100———标准品浓度中包含的100倍稀释。6l液体样品中的β-乳球蛋白致敏原含量按式()计算:6lXl=c

×f …………(6)式中:lXl

———样品中β-乳球蛋白致敏原含量,单位为毫克每升(mg/L);lc ———样品液中β-乳球蛋白致敏原浓度,单位为毫克每升(mg/L);f

———样品稀释倍数。1根据23.

制备样品液时的100倍稀释倍数已经包括在标准曲线中,样品稀释倍数f

只考虑除此12100倍以外的稀释倍数。计算结果保留小数点后两位有效数字。224. 结果表述-- -ββ乳球蛋白致敏原测定结果用于标签标识管理。β-乳球蛋白致敏原测定结果小于定量限时,-- -β表述为“未检出β乳球蛋白致敏原”;-乳球蛋白致敏原测定结果大于定量限时,结果表述为“检出β乳球蛋白致敏原”并报告具体测定值。25

质量控制125. 试剂失效1出现以下情况之一表明试剂失效,不应进行测定或测定结果作废:a)

贮存在试剂瓶中的发色剂颜色出现蓝色;5 2b)

加入终止液后标准品5(4.

mg/kg)吸光度值5 2225. 变异系数2在重复性条件下获得的两次独立测定结果的变异系数不应超过10%。26

检出限和定量限- L 1 L本方法对β乳球蛋白的检出限为0.4mg/kg(

),定量限为- L 1 L27

防污染措施同第11章。第四法

β-乳球蛋白

竞争酶联免疫吸附法28

原理--利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中的β乳球蛋白致敏原含量进行酶联免疫吸附测定。适用--于经过水解加工的食品原料和加工食品。样品中游离的和固定的β乳球蛋白竞争抗体结合位点,第一10学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6-次洗涤后,加入过氧化物酶标记的二级抗体,与固定的β-乳球蛋白抗体结合,未结合的酶标记物在后续-的洗涤步骤被除去。加入底物/发色剂呈显色反应。通过测定450nm

波长下吸光度值得出样品中β乳球蛋白致敏原含量。样品中的β-乳球蛋白致敏原含量与吸光度值成反比。29

试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合

GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。 -1i i ii i i

ii

i -1i i ii i i

ii

i t itveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendix

M:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录

G。注:试剂盒详细信息见附录

H。 122 )29.

1×缓冲液:按照1∶10比例稀释10×缓冲液浓缩液[见

H.d)],稀释后的1×缓冲液可在 122 )条件下保存4周。1条微孔需约15mL(0℃~25℃

1×缓冲液。该缓冲液既可用于洗板,也可用于样品和抗体的稀释。 2

2 131 2

229.

1×抗体:用1×缓冲液(9.)按照1∶11比例稀释11×抗体浓缩液[见

H.c)], 2

2 131 2

2移取100μL11×抗体浓缩液[见

H.c)]至1mL1×缓冲液(9.)中稀释混匀,足够2条微孔反应使用。30

仪器和设备同第6章。31

分析步骤131. 样品前处理和提取1022

2 5 2

2称取不少于50g或量取不少于50mL样品,充分混合均匀。称取2.0g或吸取2022

2 5 2

250mL离心管中,加水至50mL,在室温(0℃~25℃)条件下涡旋振荡10min,样品均液按1∶20的比例用1×缓冲液(9.

)稀释(例如:0μL

样品加950μL1×缓冲液(9.

))。至此稀释倍数为500倍。231. 测定221 - 1231.. 将预先包被有β乳球蛋白致敏原特异性抗体的微孔板[见

H.a)]插入微孔板架并做好21 - 12标准品和样品均设置双平行。宜一次检测不要超过3条微孔板条(4个板孔),以避免过大的孔间时间差造成对定量结果的影响。22 1 2

322

21 22

21 1 2131..平行加入50μL22 1 2

322

21 22

21 1 21轻轻地水平振摇使其均匀混合,室温(0℃~25℃)孵育2h。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔加入250μL1×缓冲液(9.),进行洗涤后,在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100μL1×酶标记物[见

H.b)],室温(0℃~25℃)孵育30min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔每次加入250μL1×缓冲液(9.)洗涤并在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入50μL底物[见

H.k)]和50μL发色剂[见

H.l)],轻轻地水平振摇使其均匀混合,室温(0℃~25℃)避光孵育15min。孵育结束后,加入100μL终止液[见

H.m)],水平振摇使反应完全,立即读取450nm

波长吸光度值。11学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

B 0×100%…………(7学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载

B 0×100%…………(7)

m×1000×f

×V …………(8)6331. 标准曲线制作和测定结果计算37- ic以标准品2~6质量浓度为横坐标,公式()计算的百分比为纵坐标,绘制半对数曲线,计算样7- ic中β乳球蛋白致敏原浓度()。也可使用试剂盒配套分析软件

RIDASOFT

Win中cubi

splne模式进行标准曲线绘制和测定结果计算。-7β乳球蛋白标准品和样品液的百分比吸光度值按公式()-7A=

B式中:A

———百分比吸光度值;B

———β-乳球蛋白标准品或样品液的平均吸光度值;B0———标准品1的平均吸光度值。32

分析结果描述132. 结果分析1- 8固体或半固体样品中β乳球蛋白含量按公式()- 8sXs= cs式中:-s - nXs ———样品中β-s - nc ———样品液中β乳球蛋白致敏原浓度,单位为纳克每毫升(g/mL);f ———样品稀释倍数;5V ———定容体积,0mL;5km———样品的质量,单位为千克(g);k1000———单位换算系数。样品稀释倍数应为使用1×缓冲液稀释上清液或滤液的稀释倍数20倍,若除此稀释步骤外还有进一步稀释,也要考虑进去。计算结果保留小数点后两位有效数字。- 9液体样品中β乳球蛋白致敏原含量按式()- 9lXl=c

×f/1000 …………(9)l式中:-l - nXl ———样品中β-l - nc ———样品液中β乳球蛋白致敏原浓度,单位为纳克每毫升(g/mL);f ———样品稀释倍数;1000———单位换算系数。此处试样稀释倍数为500倍。计算结果保留小数点后两位有效数字。232. 结果表述2-- -ββ乳球蛋白致敏原测定结果用于标签标识管理。β-乳球蛋白致敏原测定结果小于定量限时,-- -β表述为“未检出β乳球蛋白致敏原”;-乳球蛋白致敏原测定结果大于定量限时,结果表述为“检出β乳球蛋白致敏原”并报告具体测定值。12学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载633

质量控制133. 试剂失效1出现以下情况之一表明试剂失效,不应进行测定或测定结果作废:a)

贮存在试剂瓶中的发色剂颜色出现蓝色;0 8b)

加入终止液后标准品1(

mg/kg)吸光度值<0 8233. 变异系数2在重复性条件下获得的两次独立测定结果的变异系数不应超过10%。34

检出限和定量限- 1 L 0 L本方法对β乳球蛋白致敏原的检出限为2.0mg/kg(

- 1 L 0 L35

防污染措施同第11章。第五法 乳 胶体金免疫层析法36

原理利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中的乳致敏原进行胶体金免疫层析试纸条检测。样品中的乳致敏原与预包被在反应管内的标记抗体发生反应,形成抗原-抗体结合物。此抗原-抗体结合物被预包被在免疫层析试纸条上的特异性抗体捕获,形成抗体-抗原-抗体的夹心复合物,并在检测区显色,通过目测判读检测结果。37

试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合

GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。1 l ii ii i i

ii

i t i37. 乳致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒1 l ii ii i i

ii

i t iProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录I。注:试剂盒详细信息见附录J。237. 吸附缓冲液,按照附录

K执行。2 :

0 22 , 2344537. PBS-吐温

缓冲液

8.gNaCl,0.gKCl,1.44gNaHPO4

0.24gKH :

0 22 , 23445pH

至7.2~7.,用蒸馏水定容至1L。37. 氯化钠(NaCl)。37. 棉签拭子13学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载638

仪器和设备1238. 分析天平:感量0.1g。1238.

匀浆机。338.涡旋混匀仪。3438. 离心机:转速≥4000r/min。45 1 538. 单道移液器:00μL~1000μL,5 1 539

分析步骤139. 环境拭子的采样111 3 3

512 313 3 3

339.. 吸取1mLPBS-吐温缓冲液11 3 3

512 313 3 3

339.. 用浸润的棉签拭子(9.1.1)的棉头,擦拭大约10cm×10cm

面积的待检测环境表面。39.. 将擦拭取样后的棉签拭子(9.1.2)放回装有PBS-吐温缓冲液(7.)的离心管中,充分浸洗并挤压使棉头与缓冲液充分融合和释放,挤干棉签拭子,并丢弃。14 239.. 从离心管中取0.

mL14 23注:若棉签采样拭子(9.1.2)含有肉眼清晰可见的致敏原颗粒,则可能含有的致敏原超过1000mg/kg,建议将棉3签拭子采样处理后离心管中的样品液,进一步稀释后,再用于检测。239. 清洁用水的采样22直接取0.

mL清洁用水用于检测。2339. 食品样品前处理和提取33139.. 液体样品:对不少于5mL具有代表性的样品进行均质。3132 0 3

42 439.. 固体样品:称取50.0g样品,向其中加入450mL水和4.032 0 3

42 4机中于室温(0℃~25℃)000r/min,离心5min,取上清液用于检测。无离心条件时,可用粗滤纸过滤,得到滤清液用于检测。若离心后产生脂肪层,取脂肪层下的清液用于检测。脂肪含量高的样品,宜进行冷冻离心以去除脂肪。33 3

2022 439.. 含多酚类的样品:对于如啤酒、葡萄酒、可可、调味料、33 3

2022 4进行样品前处理。吸取1mL液体样品或称取1.0g均质后的固体样品,加入已含有9mL吸附缓冲液的样品管中,室温(0℃~25℃)孵育10min~15min,边孵育边振荡。孵育结束后置离心机中于室温(0℃~25℃)000r/min,离心5min,取上清液用于检测。注:若样品中可能含有的致敏原浓度超过1000mg/kg,则建议将样品提取液进一步稀释后,再进行检测。密封好的上清液或滤清液在2℃~8℃避光保存不超过2d。439. 样品的测定41 2 1 213

23

3 21向预包被标记抗体的反应管[见J.a)]中加入0.1 2 1 213

23

3 21于39.、9.、9.

步骤得到的样品提取液,充分混匀,于室温(0℃~25℃)孵育5min。向反应管中放入乳致敏原试纸条[见J.b)],反应5min,目测读取检测结果。注:强酸性或强碱性样品提取液调节pH

值至7.5±0.

后再检测。539. 测定结果评估和表述55139.. 试纸条反应区包括2条结果条带,从上至下分别为质控带(C)和检测带(T)。当质控带(C)出5114学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载41. 本方法对环境表面的拭子采样的检出限针对脱脂奶粉为0.

μg/100学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载41. 本方法对环境表面的拭子采样的检出限针对脱脂奶粉为0.

μg/100cm

(当采样面积为10cm41.3

本方法对其他样品表面的拭子采样的检出限为1μg/100cm

(当采样面积为10cm×10cm6现蓝紫色条带,检测结果有效,否则检测结果无效。5239.. 当质控带(C)出现紫色条带,检测带(T)未出现蓝紫色条带,检测结果为阴性,结果表述为“未52检出乳致敏原”。5339.. 当质控带(C)和检测带(T)均出现蓝紫色条带,检测结果为阳性,结果表述为“检出乳致敏原”。5340

质量控制140. 试剂失效1C试纸条未出现蓝紫色质控带(

),检测结果无效。C240. 内部质控2定期或必要时使用乳致敏原质控品或实验室自行制备的人工添加样品进行检测质量控制。41

检出限1 L41. 本方法对食品样品及清洁用水中乳致敏原的检出限为1mg/kg(1 L22×10cm

时),或0.

μg/采样拭子(当采样面积是自行确定时,应明确所记录的采样范围)。22时),或1μg/采样拭子(当采样面积是自行确定时,应明确所记录的采样范围)。42

方法局限性本文件的胶体金免疫层析方法适用于检测乳致敏原,检测结果为定性检测结果,无法获得定量检测结果。若样品中含有特别高浓度的乳致敏原(>1000mg/kg),则检测带的颜色可能会变浅,甚至完全抑制其形成。若样品可能含有特别高浓度的目标检测致敏原,则建议对样品进行大倍数稀释。43

防污染措施同第11章。15学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6附 录

A(资料性)乳致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒评价结果1)1A. 线性和范围15 5线性范围为2.

mg/kg~67.05 52A. 检出限和定量限27 5对乳致敏原的检出限为0.0mg/kg(L),定量限为2.07 53A. 正确度3对人工加标的饼干基质回收率范围为98.0%~116.0%,对人工加标的婴幼儿豆粉基质回收率范围为93.3%~104.0%,对人工加标的巧克力基质回收率范围为108.0%~128.0%,对人工加标的不含乳冰淇淋基质回收率范围为

98.0%

~112.0%,对人工加标的蛋糕基质回收率范围为

94.0%

~102.0%,对人工加标的婴幼儿米粉基质回收率范围为102.0%~105.0%,对人工加标的薯片基质回收率范围为108.0%~112.0%,对人工加标的全麦面包基质回收率范围为98.0%~104.0%,对人工加标的面包基质回收率范围为98.0%~105.3%,对人工加标的鸡蛋面基质回收率范围为94.3%~97.0%,对人工加标的麦片基质回收率范围为105.3%~108.0%,对人工加标的黄油饼干基质回收率范围为106.0%~107.0%,对人工加标的玉米粉基质回收率范围为94.3%~98.0%,对人工加标的沙拉酱基质回收率范围为104.0%~109.3%

,对人工加标的各类香肠样品使用水稀释的回收率范围为70.

%~93.0%。4A. 特异性4对谷物类、豆类、种子类、肉类、坚果、香料、调料、食品添加剂、果汁、蛋等84种食品样品交叉反应率为0。5A. 精密度5对巧克力、饼干、蛋糕、婴幼儿豆粉、婴幼儿米粉、薯片、全麦面包、面包、鸡蛋面、麦片、黄油饼干、不含乳冰淇淋、玉米粉、沙拉酱进行不同浓度的人工加标,变异系数范围为2.1%~7.6%,平均值为5.3%,回收率范围为91.0%~112.0%,回收率平均值为101.4%。6A. 耐变性69 1 9分别对3个实验条件进行耐变性实验:样品/标准品加样量(0μL,10μL),孵育时间9 1 91311min),孵育温度(8℃,0℃)。实验结果表明,131)

1)

本评价结果仅适用于rbipharmRIDASCREEN

FAST

Mik试剂盒。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。16学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6附 录 B(规范性)乳致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒2)1B. 试剂盒组成1::

77a)

预包被乳致敏原特异性抗体的48孔可拆分微孔板

8×6::

77b)

11×酶标记物浓缩液

0.

mL/瓶×1瓶;c)

酶标记物缓冲液:

mL/瓶×1瓶;1132d)

10×洗涤缓冲液浓缩液:00mL/瓶×1瓶;1132e)

10×致敏原提取缓冲浓缩液:00mL/瓶×1瓶;f)

2×提取液2浓缩液:0mL/瓶×3瓶;g)

添加剂1:g×1瓶;33 53 53 53 5h)

标准品1:1.

mL/33 53 53 53 5i)

标准品2:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量为2.

mg/kg;j)

标准品3:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量为7.

mg/kg;k)

标准品4:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量为22.

mg/kg;l)

标准品5:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量为67.mg/kg;1m)

底物/发色剂:0mL/瓶×1瓶;11n)

终止液:4mL/瓶×1瓶。12B. 试剂盒验收和保存22122 223243B.. 每个批号试剂盒应进行回收率测试的验收试验,2122 223243B.. 试剂盒于2℃~8℃避光保存,使用前回复至室温(0℃~25℃)。B.. 不同批号试剂盒中组分不应混用。B.. 超过有效期的试剂盒不应使用。B. 试剂盒评估31B.. 定期进行回收率评估,回收率应在80%~120%之间。31324B.. 回收率评估可使用商品化乳致敏原质控品或实验室自行制备的人工添加样品。324B. 标准曲线谱图1标准曲线谱图示例见图B.。12)

2)

rbipharmRIDASCREEN

FAST

Mik试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。17学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载61图B. 标准曲线谱图示例118学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载3)

本评价结果仅适用于rbipharmRIDASCREEN

FAST学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载3)

本评价结果仅适用于rbipharmRIDASCREEN

FASTCasen试剂盒。给出这一信息是为了方便本文件的6附 录 C(资料性)酪蛋白致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒评价结果3)1C. 线性和范围15 5线性范围为0.

mg/kg~13.05 52C. 检出限和定量限21 L 5使用致敏原提取缓冲液时,对酪蛋白的检出限为0.2mg/kg(

),定量限为0.1 L 57 L 5 L提取液2时,对酪蛋白的检出限为0.1mg/kg(

),定量限为7 L 5 L3C. 正确度3866 22 2对人工加标的脆爆米基质回收率范围为80.6%~101.2%,对人工加标的巧克力基质回收率866 22 2为94.1%~114.0%,对人工加标的冰淇淋基质回收率范围为106.0%~111.0%,对人工加标的葡萄酒基质回收率范围为100.0%~113.3%,对人工加标的冰茶粉基质回收率范围为102.7%~108.0%,对人工加标的婴幼儿米粉基质回收率范围为104.0%~106.0%,对人工加标的婴幼儿豆粉基质回收率范围为102.0%~108.6%,对人工加标的肉泥辅食基质回收率范围为108.0%~110.0%,对人工加标的果蔬辅食基质回收率范围为102.0%~107.9%,对人工加标的橙汁基质回收率范围为97.0%~104.2%,对人工加标的苹果汁基质回收率范围为99.3%~108.0%,对人工加标的果汁饮料基质回收率范围为102.0%~109.4%,对人工加标的烘焙预混粉基质回收率范围为102.0%~107.3%,对人工加标的饼干基质回收率范围为105.7%~108.2%,对人工加标的玉米粉样品回收率范围为104.

%~107.8%,对人工加标的早餐谷物样品回收率范围为103.

%~105.7%,对人工加标的蛋糕样品回收率范围为105.

%~108.2%,对人工加标的含坚果玉米片样品回收率范围为105.

%~109.4%,对人工加标的大豆粉样品回收率范围为105.

%~108.8%,对人工加标的豆奶样品回收率范围为105.

%~4109.0%,对人工加标的米饼样品回收率范围为104.

%~109.2%。4C. 特异性对谷物类、豆类、种子类、肉类、坚果、香料、调料、食品添加剂、果汁、蛋等85种食品样品使用不同的样品提取方法后检测交叉反应率均为0。5C. 精密度5对巧克力、白葡萄酒、红葡萄酒、冰茶粉、婴幼儿米粉、婴幼儿豆粉、肉泥辅食、果蔬辅食、冰淇淋、橙汁、苹果汁、果汁饮料、烘焙预混粉、饼干、脆爆米、玉米粉、早餐谷物、蛋糕、含坚果玉米片、大豆粉、豆奶、使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。19学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6米饼进行不同浓度的人工加标,变异系数范围为3.9%~8.3%,平均值为6.3%,回收率范围为89.0%~111.4%,回收率平均值为101.7%。6C. 耐变性699 1 9 1 1 3分别对4个实验条件进行耐变性实验:样品提取水浴温度(5℃,90℃),样品/标99 1 9 1 1 3(0μL,10μL),孵育时间(

min,1min),孵育温度(8℃,0℃)。实验结果表明,参数的变化对检测结果无显著影响。20学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6附 录

D(规范性)酪蛋白致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒4)1D. 试剂盒组成1::

77a)

预包被抗体的48孔可拆分微孔板

8×6::

77b)

11×酶标记物浓缩液

0.

mL/瓶×1瓶;c)

酶标记物缓冲液:

mL/瓶×1瓶;1132d)

10×洗涤缓冲液浓缩液:00mL/瓶×1瓶;1132e)

10×致敏原提取缓冲浓缩液:00mL/瓶×1瓶;f)

2×提取液2:0mL/瓶×1瓶;g)

添加剂1:g×1瓶;33 53 53 53 5h)

标准品1:1.

mL/33 53 53 53 5i)

标准品2:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量为0.

mg/kg;j)

标准品3:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量为1.

mg/kg;k)

标准品4:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量为4.

mg/kg;l)

标准品5:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量为13.

mg/kg;1m)

底物/发色剂:0mL/瓶×1瓶;11n)

终止液:4mL/瓶×1瓶。12D. 试剂盒验收和保存22122 223243D.. 每个批号试剂盒应进行回收率测试的验收试验,2122 223243D.. 试剂盒于2℃~8℃避光保存,使用前回复至室温(0℃~25℃)。D.. 不同批号试剂盒中组分不应混用。D.. 超过有效期的试剂盒不应使用。D. 试剂盒评估31D.. 定期进行回收率评估,回收率应在80%~120%之间31324D.. 回收率评估可使用商品化乳致敏原质控品或实验室自行制备的人工添加样品。324D. 标准曲线谱图1标准曲线谱图示例见图D.。14)

4)

rbipharmRIDASCREEN

FASTCasen试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。21学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载61图D. 标准曲线谱图示例122学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5)

本评价结果仅适用于rbipharmRIDASCREEN

FAST学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5)

本评价结果仅适用于rbipharmRIDASCREEN

FASTβLactoglobuln试剂盒。给出这一信息是为了方便本6附 录 E(资料性)β-乳球蛋白致敏原夹心酶联免疫吸附检测试剂盒评价结果5)1E. 线性和范围11 5线性范围为0.67mg/kg~4.01 52E. 检出限和定量限21对β-乳球蛋白的检出限为0.4mg/kg(L),定量限为0.67mg/kg(L)13E. 正确度3对人工加标的巧克力基质回收率范围为88.0%~112.7%,对人工加标的冰淇淋基质回收率范围为80.7%~89.3%,对人工加标的脆米花基质回收率范围为89.8%~104.9%,对人工加标的香肠基质回收率范围为80.7%~82.6%,对人工加标的葡萄酒基质回收率范围为86.0%~91.6%,对人工加标的婴幼儿米粉基质回收率范围为90.0%~94.9%,对人工加标的婴幼儿豆粉基质回收率范围为88.0%~96.9%,对人工加标的婴幼儿辅食基质回收率范围为76.0%~91.0%,对人工加标的饼干基质回收率范围为86.0%~96.2%,对人工加标的烘焙预混粉基质回收率范围为90.9%~92.8%,对人工加标的早餐谷物基质回收率范围为86.0%~95.2%,对人工加标的豆奶基质回收率范围为92.0%~97.1%,对人工加标的玉米粉基质回收率范围为88.7%~100.6%,对人工加标的蛋糕基质回收率范围7为84.0%~105.1%

,对人工加标的果汁样品回收率范围为94.

%~106.0%。74E. 特异性4对谷物类、豆类、种子类、肉类、坚果、香料、调料、食品添加剂、果汁、蛋等85种食品样品使用不同的样品提取方法后检测交叉反应率均为0。5E. 精密度5对巧克力、脆米花、香肠、葡萄酒、婴幼儿米粉、婴幼儿豆粉、婴幼儿辅食、饼干、烘焙预混粉、早餐谷物、豆奶、玉米粉、蛋糕、果汁进行不同浓度的人工加标,变异系数范围为3.9%~8.4%,平均值为66.2%,回收率范围为92.0%~113.0%,回收率平均值为106.6%。6E. 耐变性99 1 91 1 3分别对4个实验条件进行耐变性实验:样品提取水浴温度(5℃,90℃),样品/标99 1 91 1 3(0μL,10μL),孵育时间(

min,1min),孵育温度(8℃,0℃)。实验结果表明,参数的变化对检测结果无显著影响

。文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。23学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6附 录 F(规范性)-β乳球蛋白致敏原夹心酶联免疫吸附检测试剂盒6)-1F. 试剂盒组成1:6a)

预包被β-乳球蛋白抗体的48孔可拆分微孔板

8×6孔;:6b)

1×酶标记物:

mL/瓶×1瓶;1132c)

10×洗涤缓冲液浓缩液:00mL/瓶×1瓶;1132d)

10×致敏原提取缓冲浓缩液:00mL/瓶×1瓶;e)

2×提取液2:0mL/瓶×3瓶;f)

添加剂1:g×1瓶;3 β3 1β3 5β3 5β3 5βg)3 β3 1β3 5β3 5β3 5βh)

标准品2:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白含量为0.67mg/kg;i)

标准品3:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白含量为0.

mg/kg;j)

标准品4:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白白含量为1.

mg/kg;k)

标准品5:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白白含量为4.

mg/kg;1l)

底物/发色剂:0mL/瓶×1瓶;11m)

终止液:4mL/瓶×1瓶。12F. 试剂盒验收和保存22122 223243F.. 每个批号试剂盒应进行回收率测试的验收试验,2122 223243F.. 试剂盒于2℃~8℃避光保存,使用前回复至室温(0℃~25℃)。F..不同批号试剂盒中组分不应混用。F.. 超过有效期的试剂盒不应使用。F. 试剂盒评估31F.. 定期进行回收率评估,回收率应在80%~120%之间。3132F.. 回收率评估可使用商品化β-乳球蛋白致敏原质控品或实验室自行制备的人工添加样品。324F. 标准曲线谱图41标准曲线谱图示例见图F.。16)

6)

rbipharmRIDASCREEN

FASTβLactoglobuln试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。24学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载61图F. 标准曲线谱图示例125学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6SN/T5655.—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6附 录

G(资料性)β-乳球蛋白致敏原竞争酶联免疫吸附检测试剂盒评价结果7)1G. 线性和范围10线性范围为5.

mg/kg~810.

mg/kg。02G. 检出限和定量限21 L 0 L对β-乳球蛋白致敏原的检出限为2.0mg/kg(

),定量限为1 L 0 L3G. 正确度3对人工加标的低致敏性婴幼儿配方粉基质回收率范围为88.6%~102%。4G. 特异性4对谷物类、豆类、种子