饲料中粗灰分的测定

饲料中粗灰分的测定原理：试样在550度灼烧后，所得残渣，用质量分数表示。残渣中主要是氧化物，盐类等矿物质，也包括混入饲料中的沙石，土等，故称粗灰分。实验步骤：1.用分析天平称取以灼烧的坩埚质量。2.在已知质量的坩埚中称取2~5克式样，在电炉上低温炭化至无烟为止。3.炭化后，将坩埚移入高温炉中，与（550±20）度下灼烧3h,取出，在空气中冷却约1分钟，放入干燥器冷却30分钟，称重。注意事项：1.样品自然放在坩埚中，勿压，避免样品氧化不足。2.样品开始炭化时，应有坩埚盖，防止损失，并打开部分坩埚盖，便于气流流通。3.炭化时，温度应逐渐上升，防止火力过大而使部分样品颗粒被逸出的气体带走。4.灼烧温度不宜超过600度，否则会引起磷硫等盐的挥发。饲料中钙的分析测定原理：将试样有机物破坏，钙变成溶于水的离子，并与盐酸反应生成氯化钙，在溶液中加入草酸铵溶液，使钙成为草酸钙白色沉淀，然后用硫酸溶液溶解草酸钙，再用高锰酸钾标准滴定溶液滴定游离的草酸根离子，根据高锰酸钾标准滴定溶液的用量，可以计算出式样的含钙量。实验步骤：1.试样溶液制备。①称取2~5克试样于坩埚中一炭化一550±20度炭化3h。②向盛有灰分坩埚中加（1+3）HCL10毫升，并滴浓HNO3（2~3）滴，小心煮沸。③用滤纸过滤于100毫升容量瓶中一用热水洗涤5~6次一用水定容即可。2•草酸钙沉淀。①移取10毫升溶液一烧杯中一加水100毫升一调PH值2.5~3.0（指示剂甲基红两滴，滴氨水，红变橙黄，滴盐酸呈红色）。②电炉上煮沸，滴加10毫升草酸铵溶液，且不断搅拌一一煮沸5分钟一一静置过滤。3.沉淀洗涤。过滤沉淀一一用氨水溶液洗沉淀6~8次，至无草酸根离子为止。4•沉淀溶解与滴定。①滤纸+沉淀——烧杯中——硫酸溶液10毫升，50毫升水——加热至80度左右。②用0.0493mol/L高锰酸钾标准滴定溶液滴定至终点，30秒不退色。5.空白试验。一张滤纸一一干净烧杯一一硫酸溶液10毫升，50毫升水——加热至80度左右——用0.0493mol/L高锰酸钾标准滴定溶液滴定至终点。注意事项：1.每种滤纸空白滴定消耗高锰酸钾标准滴定溶液的用量有差异，至少每盒滤纸做一次空白滴定。2.洗涤草酸钙时，必须沿滤纸边缘向下洗，使沉淀集中于滤纸中心，以免损失。3.每次洗涤过滤时，都必须等上次洗涤液完全滤净后再加，每次洗涤不得超过漏斗体积的2/3. 4.洗涤液氨浓度小，可边冲水边倒入废液池。饲料中总磷的测定（钼黄比色法）实验原理：将试样中有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的络合物，在波长400nm下进行比色测定。此法测得结果为总磷量，其中包括动物难以吸收利用的植酸磷。实验步骤：1.试样的分解。①称取2~5克试样于坩埚中 电炉低温炭化至无烟 高温炉550±20度灰化3h——冷却。②向盛有灰分坩埚中加盐酸10毫升，浓硝酸溶液2~3滴，小心煮沸。③用滤纸过滤于100毫升容量瓶中——用热水洗涤5~6次——用水定容，摇匀，为试样分解液。2.P标准曲线的绘制。准确移取磷标准溶液0,1,2,5,10,15毫升于50毫升容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色试剂10毫升，用水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，以0毫升溶液为参比，用10mm比色池，在400nm波长下，用分光光度计测定各个溶液的吸光度。以50毫升溶液中磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。3•式样的测定。①准确移取试样分解液2毫升——50毫升容量瓶中一一加10毫升钒钼酸铵显色剂——用水稀释至刻度——摇匀，放置10分钟。②以0毫升溶液为参比，用10mm比色池，在400nm波长下，用分光光度计测定溶液吸光度。③用标准曲线查的式样分解液的含磷量。注意事项：1•比色时，待测试样溶液中磷含量不宜过高，最好控制在每升含磷0.5mg以下。2.待测液在加入显色剂后需要静置10分钟，在进行比色，但也不静置过久。饲料中水溶性氯化物的测定原理：酸性条件下，加入过量硝酸银溶液，使试样溶液的氯化物形成氯化银沉淀，用硫氰酸铵溶液回滴过量的硝酸银，根据消耗的硫氰酸铵溶液的体积计算出试样中氯化物的含量。步骤：1.氯化物的提取。分析天平称取试样5毫克——干锥形瓶中——加氨水100毫升——硫酸铁溶液50毫升——磁力搅拌器搅拌20分钟——静置10分钟——干过滤于锥形瓶中。2.滴定。取25毫升滤液到锥形瓶中——加浓硝酸5毫升。硝酸银标准溶液10毫升——加硫酸铁指示剂5毫升——硫氰酸铵标准滴定溶液滴定至终点，即出现淡橙红色，且30秒不退色。注意事项:1.氨水与硫酸铁溶液要标准添加。2.干过滤时不要摇晃，尽量过滤上清液，可缩短时间。液态蛋氨酸羟基类似物的检测原理：液态蛋氨酸羟基类似物为褐色黏液，有含硫氨基团的特殊气味，易溶于水。分子式:C5H10O3S，其中C5H10O3S含量在88%以上。在酸性介质中，KBrO3与KBr反应生成Br?,Br2再与蛋氨酸羟基类似物反应，将2个溴原子加到蛋氨酸羟基类似物的硫原子上，当到达滴定终点后，过量的溴可以使溶液呈亮黄色。因此可以根据溶液反应前后自身颜色的变化判断滴定终点。步骤：称取0.5g（准确至0.0002g）于250mL三角瓶中，加50mL酸溶液，充分混匀后，用溴酸钾-溴化钾标准滴定溶液滴定溶液至亮黄色为终点。同时做空白试验。注意事项：1、称取试样时，应缓慢滴加溶液，不可过快，导致加入量过大。2、滴定过程中，接近滴定终点时应缓慢滴加，注意颜色变化，以半滴量加入，并且充分摇匀。饲料中氟的测定（离子选择性电极法）原理：氟是动物机体必要的元素之一，缺乏会引起动物缺乏症，过量也会导致动物中毒。氟主要沉积在骨骼组织和牙齿中，在岩石中也自然存在。饲料中氟的含量，对动物影响非常大。因此要严格检测饲料原料和配合饲料的氟的含量，并根据检测结果和动物种类合理利用饲料原料，以保证配合饲料的氟含量在国家卫生标准规定的允许范围内。氟的测定方法有比色法和离子选择电极法。比色法又分为扩散-氟试剂比色法和灰化蒸馏-氟试剂比色法。比色法具有灵敏度高、色泽稳定、重现性好、结果准确等特点。离子选择电极法的测定范围宽、干扰小，简便，是国家规定的标准方法（GB13083-1991）,适用于含量较高、变化范围较大和干扰大的饲料。氟离子选择电极的氟化镧单晶膜对氟离子产生选择性数据的对数响应，氟电极和饱和甘汞电极在被测试液中，电位差可随溶液中氟离子浓度的变化而变化，电位变化符合能斯特方程式。步骤：1、氟标准工作液的制备：分别吸取氟标准溶液0，1，2,4，6，8，10mL置于编好号的7个50mL容量瓶中，再分别加入1mol/L的盐酸溶液10mL，总离子强度缓冲液25mL，加水至刻度，混匀。2、试液的制备：称取0.2g左右的CaHPO4（2号）于已清洗干燥的50mL容量瓶中，再加入1mol/L的盐酸溶液10mL，轻轻振荡，提取1h。之后加入总离子强度缓冲液25mL，加水至刻度，混匀。3、测定：将氟电极和甘汞电极与测定仪的负端和正端连接，将电极插入盛有水的聚乙烯烧杯中，并预热仪器，更换2-3次水，待电位值到达320-330mV后，即可进行标准试液的电位测定。按质量浓度由低到高的顺序依次测定氟标准工作液的平衡电位。以电位电极做作坐标，lgc（F-）作横坐标。同法测定试液的平衡电位，从标准曲线上读取试液的含氟量。注意事项：1、此法较快速，也可避免灰化过程引入的误差。但植物性饲料样品中，尚有微量有机氟，预测定总氟量时，可将样品灰化后，使有机氟转化为无机氮，再进行测定。2、每次氟电极使用前，应在水中浸泡(活化)数小时，至电位为320-330mV以上。以后每次测定均用水清洗，用吸水纸擦干，再进行下一次测定。经常用的氟电极应泡在去离子水中，若长期不用，则应干放保存。3、电极长期使用后，会发生迟钝现象，可用金相纸或牙膏擦拭，以活化表面。4、根据能斯特方程可知，当浓度改变10倍，电位值只改变59.16mV(25°C),也即理论斜率为59.16，据此可知氟电极的性能好坏。一般实际中，电极工作曲线斜率$57mV时，即可认为电极性能良好，否则需要查明原因。5、为了保持电位计的稳定性，最好使用电子稳压交流电源，如在夏、冬季或在室温波动大时，应在恒温室或空调室进行测量。6、本方法所用试剂均为分析纯，水均为不含氟的去离子水。全部贮于聚乙烯塑料瓶中。减少容器本身的氟含量对测定结果的影响。饲料级硫酸铜添加剂含量的测定原理：试样用水溶解后，在微酸性的条件下，加入适量的碘化钾与二价铜离子作用，析出等物质的量的碘，以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定析出的碘。根据消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液体积，计算试样中硫酸铜含量。步骤：称取0.5g左右(CuSO4・5H2O),置于具塞三角瓶中，加入100mL水使之溶解，再加入4mL冰乙酸和2g左右的碘化钾，混匀后，在暗处防止10min。然后用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定，直至出现淡黄色，加入3ml淀粉指示剂，之后变为墨蓝色，继续滴定至蓝色消失，接近乳白色为止，即为终点。注意事项：1、样品体积称量不易过大，造成消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积过大，对资源造成浪费，也同时增加实验操作的复杂性。2、吸取冰乙酸时速度要快，避免刺激性气味逸出。同时应保证在一定温度下，防止结冰或挥发。3、滴定时应密切关注颜色变化，直至溶液蓝色消失，接近乳白色。若溶液变回蓝色，应补加硫代硫酸钠标准滴定溶液1-2滴。大豆制品中脲酶活性的测定原理：大豆是营养价值很高的蛋白质饲料，但是大豆中含有对动物有害的胰蛋白酶抑制因子、血球凝集素、皂角苷、甲状腺肿诱发因子以及抗凝固因子等抗营养因子，从而导致其蛋白质适口性下降、生物学价值降低，引起动物腹泻、胰腺肿大，以致影响到动物的正常发育，其中最主要的就是胰蛋白酶抑制因子。其中脲酶含量与抗胰蛋白酶活性呈高度正相关，且测定方法简单、快速、经济，因此，国内外常用脲酶活性作为校验大豆制品加热程度和抗营养因子水平的判断指标。脲酶活性测定的方法有定性法和定量法。定性法简单、快速，但不宜作为仲裁法。定量法又包括比色法、滴定法和pH增值法。大豆制品中脲酶活性定义：在(30±0.5)C和pH7.0的情况下，每克大豆制品每分钟分解尿素释放的氨态氮的质量。单位用每克(U/g)表示。大豆制品中的脲酶在一定条件下(pH值、温度)，可以将尿素水解为氨，用过量的盐酸溶液吸收后生成氯化铵，再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定剩余的盐酸，根据消耗的氢氧化钠标准滴定溶液量，即可计算出由脲酶水解放出的氨氮量，从而计算出脲酶活性。等当点时，pH值为4.7左右。步骤：一、样品中脲酶活性的测定：1、样品准备：准确称取0.2g(精确至0.1mg)，置于玻璃试管中。加入10mL尿素缓冲液，立即盖好试管盖剧烈振摇后，将试管马上置于(30±0.5)C恒温水浴锅中，准确及时30min±10s。取下后立即加入0.1mol/L盐酸溶液10mL，振摇后迅速冷却到20Co2、滴定：将试管中内容物全部转移至200mL的三角瓶中，并用少量蒸馏水洗涤试管，洗涤液倒入三角瓶中。再加入甲基红指示剂、溴甲酚绿指示剂各2滴，以0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至蓝绿色，记录氢氧化钠滴定溶液消耗量。二、空白测定：1、另取试管做空白试验。准确称取0.2g（精确至0.1mg），置于玻璃试管中。加入0.1mol/L盐酸溶液10mL,振摇后加入10mL尿素缓冲液，立即盖好试管盖居IJ烈振摇后，将试管马上置于G0±0.5）°C恒温水浴锅中，准确及时30min±10s。取下后迅速冷却到20Co2、滴定：将试管中内容物全部转移至200mL的三角瓶中，并用少量蒸馏水洗涤试管，洗涤液倒入三角瓶中。再加入甲基红指示剂、溴甲酚绿指示剂各2滴，以0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至蓝绿色，记录氢氧化钠滴定溶液消耗量。注意事项：1、若样品粗脂肪含量高于10%，则应先进行不加热的脱脂处理后，再测定脲酶活性。2、若测得样品脲酶活性＞1U/g，则称样量应减少到0.05go3、注意几组样品同时反应的时间的一致性，避免试样反应时间过长或不足，对最终结果造成较大影响。4、注意滴定终点的颜色变化，到红色褪去，且出现亮黄色并且30s不褪色时，即为滴定终点。5、样品转入玻璃试管中以及振摇试管中溶液时应注意，避免将样品粘附在试管壁上，减少反应样品的质量，导致结果偏大。饲料中水分及挥发性物质的测定原理：样品在103度烘箱内，在大气压下烘干，直至恒重。遗失的质量为水分。在该温度下干燥，不仅饲料中的吸附水被蒸发，同时一部分胶体水分也被蒸发，另外还有少量其他易挥发物质挥发。步骤：1.洁净的称样皿——（103±2）度烘箱中烘1h——干燥器中冷却30分钟后称重，准确至0.002g.（重复操作，直至2次质量之差小于0.0005g为恒重）。2.分析天平称取2g左右式样到称样皿中——盖子无需盖严，留缝——103度烘箱中烘4h——取出盖好盖子，冷却30分钟——称重。注意事项：1•实验未进行预先干燥处理，若进行，则计算公式如下:w（原试样总水分）=w（预干燥减重）+{1-w（预干燥减重）}*w（风干试样水分）2•加热时试样中有挥发性物质可能与水分一起损失，列如短链脂肪酸，有机酸等。3.某些含脂肪高的试样，烘干时间长会质量增加，脂肪氧化所致应以质量增加前称重结果为准。4.含糖份高的易分解成易焦化试样，应使用减压干燥法测水分。饲料中粗蛋白的测定原理：各种饲料的有机物质在催化剂（如硫酸铜，硫酸钾或硫酸钠，硒粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和氨态氮（在一定处理条件下也包括硝态氮）都转变为氨，并被浓硫酸吸收变为硫酸铵；而非含氮物质，则以二氧化碳，水，二氧化硫的气体状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨，随汽水顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿作混合指示剂，用盐酸标准滴定溶液滴定，求出氮的含量，再乘以一定的换算系数（通常用系数6.25计算），即得出试样中粗蛋白质的含量。步骤：一。半微量水蒸气蒸馏法。1•试样的消化：分析天平称取0.3g试样至消化管——加1勺催化剂再加10毫升浓硫酸（可少过量）——消化炉上消化至透明澄清（此时为硫酸铵）2.氨的蒸馏。①试样冷却，加水20毫升至100毫升的容量瓶中，冷却后稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。②20g/L硼酸35毫升至锥形瓶中，指示剂甲基红+溴甲酚绿各一滴，使半微量装置的冷凝管末端侵入此溶液（硼酸吸收液）③清洗反应室3次——加10毫升样本液——蒸馏水冲洗进样入口——加400g/L氢氧化钠10毫升——冲洗，入口处加水密封，防止漏气——打开通气夹——蒸馏4分钟——冷凝管末端离开吸收液面，蒸馏1分钟——水洗冷凝管末端——洗液流入锥形瓶中——停止蒸馏（计时时刻为吸收液变为蓝色时。）注意：蒸汽发生器应加甲基红数滴，硫酸数滴，蒸馏过程中，此溶液保持橙红色，否则补加硫酸。3.滴定：用0.0049mol/L的盐酸标准滴定溶液滴定至终点，溶液由蓝绿色变为灰红色。4.在测定饲料试样中含氮量的同时，应做一次空白对照测定，即各种试剂的用量及操作步骤完全相同，但不加样品，可以校正因试剂准所发生的误差。二。全量法既定氮分析仪法。1.试样的消化。分析天平称取0.3g式样——消化管——1勺催化剂——加10毫升浓硫酸——消化炉上消化至透明澄清（此时为硫酸铵）。2•氨的蒸馏。①试样冷却——蒸馏水洗消化管盖内侧——呈蓝色。②20g/L硼酸35毫升——锥形瓶——指示剂甲基红，溴甲酚绿各一滴——蒸馏装置冷凝管末端要侵入此溶液（硼酸吸收液）。③设定氢氧化钠加入量为（7*10）毫升，蒸馏时间5分钟——将消化管，锥形瓶放入指定的位置——拉下防护门，蒸馏——结束，用水冲洗冷凝管米端——洗液均流入锥形瓶内。3.滴定。用0.974mol/L的盐酸标准滴定溶液滴定，至溶液有蓝绿色变为浅粉色，记录数据。注意事项：一。半微量法。1.清洗仅应室，蒸馏过程要注意各处螺丝夹得开关。2.注入试样液和氢氧化钠后，要水洗，并水封，防止漏气。3.当吸收液变蓝绿时开始计时。4.注意电炉和仅应室的状态，控制适宜的反应条件。二。半自动定氮分析仪方法。1.蒸馏完毕应先取下接受瓶，再关电源，以免酸液倒流。2.一次蒸馏后必须彻底洗净碱液，以免再次使用时引起误差。3.含硝酸盐多的饲料，用凯氏定氮法测定粗蛋白时，很多硝酸盐还原而损失。4.无水硫酸钾，无水硫酸钠：提高浓硫酸沸点，提高消化效力。硫酸铜：催化作用，做蒸馏时碱性反应的指示剂。硒粉：催化效能较强，可大大缩短消化时间，用量不宜过多，时间不可过久，控制消化温度，否则引起氮素损坏。饲料中粗脂肪的测定原理：1.油重法：用乙醚等有机溶剂反复浸提饲料样品，使其中脂肪溶于乙醚，并收集于盛醚瓶中，然后将所有的浸提溶剂加以蒸发回收，直接称量盛醚瓶中的脂肪重，即可计算出饲料样品中的脂肪含量。2.残余法：样品经脂溶性溶剂反复抽提，使全部脂肪除去，根据样品质量和残渣质量之差计算脂肪含量。何为粗脂肪？将试样放在特别的仪器中，用脂溶性溶剂（乙醚，石油醚，三氯甲烷等）反复抽提，可把脂肪抽提出来，浸出的物质除脂肪外还有一部分类脂物质，如游离脂肪酸，磷脂，蜡，色素以及脂溶性维生素，所以称为粗脂肪。高于总脂肪酸含量测定常用方法有油重法，残余法，浸泡法等。步骤：1.索氏提取器干燥处理。抽提瓶（内有数粒沸石）——（103±2）度烘箱，烘干30分钟——干燥器冷却30分钟——称重——重复操作至两次之差小于0.0008g为恒重。2•试样的称取与烘干。分析天平称试样1.3g——滤纸包一一铅笔注明标号——103度烘箱烘干2h——干燥器冷却——称重。（此步骤中，要带手套称重，且保证滤纸包长度可全部浸于石油醚中为准。）3.试样的反复抽提。滤纸包——抽提管——抽提瓶加石油醚60~100毫升——60~75度水浴加热——石油醚回流——控制回流速度和时间（。抽提前，先将滤纸包浸泡在石油醚较长时间，可减少抽提时间；一般控制回流10次/h，共回流约50次，本实验中，滤纸包已在石油醚浸泡20h以上，回流（3~4）次/h,共回流2h；检查抽提管流出的石油醚挥发后不留下油迹为抽提终点。）4.抽提后的烘干称重。取出滤纸包——干净表面皿——晾干——装入称样皿——103度烘箱烘至恒重——称重。注意事项：1.全部称重操作，样品包装时要带乳胶或尼龙手套。2.测定样品在浸提前必须粉碎烘干，以免在浸提过程中样品水分随乙醚溶解样品中糖类而引起误差。3.除样品需干燥外，索氏提取器也应干燥。4.本实验所用提取试剂为石油醚，需要无水，无醇，无过氧化物，否则会使测定结果偏高，或者过氧化物会导致脂肪氧化，在烘干时有引起爆炸的危险。5.加热乙醚或石油醚严禁用明火直接加热。6.若反复加热会使脂类氧化而增重。饲料中粗纤维的测定（酸碱洗涤法）原理：用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，经酸除去全部淀粉，糖，部分蛋白质，碱性矿物质和植物碱；经碱除去大部分蛋白，脂肪，部分半纤维素，木质素；再用醚，醇，丙酮除去单宁，色素，脂肪，腊脂等醚可溶物；经高温灼烧扣除矿物质的质量，所余量为粗纤维，一纤维素为主，有少量的半纤维素和木质素等。步骤：1•称滤袋重一一铅笔标注——称0.6g羊草试样一一滤袋封口一一平放样品架。2.（酸煮）样品架——纤维分析仪消煮器——（0.13±0.005）mol/L硫酸溶液1900~2000毫升一一密封一一按加热，搅拌按钮一一设定时间40分钟（温度显示达100度，按计时按钮，开始倒计时）。3.（水洗）40分钟后一一关加热，搅拌按钮，关开关一一打开废液阀一一倒掉废液一一废液排净，关闭废液阀一一打开容器盖一一倒入1900~2000毫升蒸馏水（90~100）度一一打开搅拌开关一一盖好盖冲洗4分钟一一排净废液一一关闭废液阀。重复两次水洗，至呈中性。4.（碱煮）加（0.23±0.005）mol/L氢氧化钾1900~2000毫升一一密封一一按加热，搅拌按钮一一设定时间40分钟（温度显示达100度，按计时按钮，倒计时开始。）5.（水洗）跟酸煮水洗步骤一样。6.取出样品架一一干净陶瓷盘中——用手将滤袋水分轻挤掉——103度烘箱中烘3h——冷却——称重。7.滤袋——坩埚（已知质量）——电炉炭化至无烟——高温电炉500度灰化2h——冷却——称重。补充：本实验所用试样为羊草，若为其他式样，补充操作如下：挤掉水分的滤袋一一干净烧杯一一加丙酮浸没滤袋一一2~3分钟取出滤袋一一轻轻挤出丙酮一一通风橱