植物检疫学植物检疫性真菌病害

第五章检疫性真菌病害

小麦矮腥黑穗病Wheatdwarfbunt

小麦印度腥黑穗病Wheatkarnalbunt

烟草霜霉病Tobaccobluemold马铃薯癌肿病Potatowart榆树枯萎病Dutchelmdisease复习思考题植物检疫性真菌常见检疫检验技术直接检验染色检验洗涤检验保湿萌芽检验别离培养检验1.直接检验适用范围：具明显病症的植物材料主要工具：放大镜或解剖镜，主要是利用肉眼现场快速初检2.染色检验法原理：染病的组织，或病原菌本身，经特殊的化学药品处理后，可带有特殊的颜色例如：马铃薯癌肿病〔Synchytriumendobioticum〕薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花红〞染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。3.洗涤检验法原理：种子外表常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温溶液等主要试验流程如下：称取样品洗脱孢子〔振荡〕离心富集镜检计数影响检验结果的因素：种子外表的病菌孢子不一定能完全洗涤下来；离心管内，悬浮液外表常形成一层极难沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子；将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀；操作不够严格，造成人为误差。4.保湿萌芽检验原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内萌芽检验等三种方法，其中保湿培养检验法是国内外最常用的一种方法。吸水纸法无菌吸水纸〔3层〕灭菌培养皿○○○○○

吸水1－1.5cm培养、观察12h光照黑暗交替恒温所观察到的结果示意图如下5.别离培养检测常规植物病理学方法小麦矮腥黑穗病

Wheatdwarfbunt分布：是麦类黑穗病中危害最大、防治最难的一种病害，它于1847年及1860年先后发现于捷克和美国，在全世界范围内传播和蔓延，目前已在欧洲、北美、南美、澳洲、亚洲、非洲等40多个国家发生。寄主：禾本科5个族，18个属，65个种。主要栽培植物有冬小麦、大麦、黑麦，冰草属为天然发病的主要禾草寄主。危害性：1962年美国减产68.7％，1972年西部7州，平均减产17％，损失1.2亿Kg。菌瘿可存活10年以上。病症：系统侵染性，表现为：病株特矮〔1/3～1/2〕，分孽特多〔>1倍〕，病穗特密，病粒特硬，有鱼腥臭味。病原菌：TilletiacontroversaJ.G.Kühn,inRabenhorst,Hedwigia13:188(1874)Positioninclassification:

Tilletiaceae,Tilletiales,Exobasidiomycetidae,Ustilaginomycetes,Basidiomycota,Fungi形态特征：冬孢子，冬孢子萌发。生物学特征：冬孢子萌发-2～15〔3~8〕℃，弱光400～600lx，土壤含水量35～88％，萌发周期长>3个月。冬孢子内含有内源孢子萌发抑制剂。生理分化：美国15小种，德国8个小种。初侵染来源：土壤带菌，冬孢子可存活1年，菌瘿可存活3～10年。传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水。发病规律：侵染期长，12月～4月，1～2月是盛期，幼嫩分蘖处侵入，细胞间蔓延，50天到生长点，随寄主生长，菌丝进入穗原始体，到各个花器，破坏子房，形成冬孢子堆。长时间3～8℃低温利于侵染；冬麦区苗期日平均温度0～10℃达45d以上，即使没有雪覆盖也同样利于发病。TCK的循环:流行因素：大面积感病品种、足够菌源、冬季日均温0～10℃的日数?40d、稳定积雪70d以上，积雪厚度10cm以上。国内适生区域：西北高原冬麦区和新疆、青藏高原晚播冬麦区极为适宜病害的发生，属高度危险区；江淮流域及华北、东北冬麦区根本适合病害发生，属危险区；西南高海拔地区有时也具备病菌入侵条件，也可能受害；春麦区不发病。检验与检测：直接检查：放大镜菌瘿洗涤检查：50g＋100ml无菌水，振荡5min，10～15ml离心3min，定容，制片观察。冬孢子鉴定：孢子形态鉴定〔网脊高度、胶鞘厚度、网目径、孢子大小、不育细胞等〕。冬孢子自发荧光实验：TCK孢子于荧光显微镜下有自发荧光现象，而TCT孢子那么无。冬孢子萌发试验：5℃、17℃下，光照。矮腥孢子5℃下21d开始萌发，17℃不萌发。PCR技术：引物5`-TGACAACGGATCTCTTGGTT-3`、5`-TCACCAACTCCAAGCAATCT-3`,206bp处有特异扩增带。检疫和防治进口小麦和原粮必须进行检疫，病麦需除害处理带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，130℃30min或120℃1h。病区用40％五氯硝基苯，种子重量0.5％的药量拌种，并在播种沟内施药处理。或单用1％的药量拌种重病地应轮作倒茬或改种春小麦。冬小麦晚播可减轻发病。种植抗病品种。小麦印度腥黑穗病

Wheatkarnalbunt分布：印度、巴基斯坦、尼泊尔、阿富汗、伊拉克、土耳其、黎巴嫩、叙利亚、原苏联、瑞典、美国、墨西哥、澳大利亚等。寄主：小麦、硬粒小麦、六倍体小麦危害及重要性：产量影响不大，对品质影响较大，3%面粉具臭味〔三甲胺〕。病症：局部侵染性，局部黑穗病，麦粒的一局部被侵染，小穗顶端麦粒黑斑，颖片张开，主要侵染胚乳，一般不侵染胚，在种子腹面表皮下形成冬孢子堆，反面胚乳局部仍完好。病原菌：

Tilletia

indica

Mitra

异名：Neovossia

indicaPositioninclassification:

Tilletiaceae,Tilletiales,Exobasidiomycetidae,Ustilaginomycetes,Basidiomycota,Fungi冬孢子：棕褐色，球形，近球形，22～49μm，外壁棘状突起，1.5～5μm；未成熟黄色，透明胶质鞘，成熟消失，外壁有尖形尾丝。不孕细胞球形，近球形，泪珠状，半透明，淡黄褐色，附着菌丝体残体，13～33μm。冬孢子萌发：4月以上休眠期，萌发产生10～190μm先菌丝，上产生65～185个担孢子，长镰刀形，可不配对结合，而直接产生芽管，作侵染菌丝用。ApartiallymatureteliosporeshowingornamentationinmedianviewApartiallymatureteliosporeshowingornamentationinsurfaceview初侵染来源：种子带菌，土壤带菌，秸秆和粪肥等带菌。冬孢子可存活5年。传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水;也可气传。生理分化：异宗配合，印度7个生理小种。发生规律：冬孢子萌发的适温15～22℃，扬花期先菌丝产生的担孢子随气流传播到麦穗上，产生次生担孢子，上生芽管，从颖片、外稃和内稃开张的气孔侵入。在一定温度范围内，该病流行与湿度正相关，与温度反相关。因此，扬花期遇多云、寡日照、细雨多雾的高湿天气适宜发病。检验方法：直接检查：根据病粒的特有病症鉴定洗涤检验发病轻的麦粒可用0.2％NaOH浸24h〔18～25℃〕，吸去多余液体，实体显微镜下观察。乌黑发亮的种子有病，淡褐色无病。PCR技术：扩增引物为5’-CGTGTGAGCCATGCTACGACT-3’和5’-AACTTCCAAGGCGACCGTTT-3’，在743bp处有一特异性扩增带，其他近似种或相关种均未出现该扩增带。检疫和防治：严格检疫高温灭菌：带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，85℃，相对湿度80％，处理3min可以杀死孢子，处理5min可以杀死菌瘿。农业措施：小麦与鹰嘴豆间作，适时早播，病轻。化学防治：三唑类和苯并吡咯类拌种，喷洒药剂〔萎锈灵〕等。烟草霜霉病

Tobacoobluemold分布与危害：1891年澳大利亚首先报道，后传入欧洲、非洲、美洲和亚洲，现广泛分布，中国尚未发现。苗床和田间均发病，蔓延速度极快，引起大量植株枯死，是烟草的消灭性病害。1960年欧洲流行，法国和比利时烟草损失80～90％，1961年损失干烟叶100,000吨。寄主范围：专性侵染，寄主范围窄，主要侵染烟草，自然条件下，还可侵染番茄、辣椒、茄子和马铃薯等茄科植物，人工接种可侵染矮牵牛、酸浆和灯笼草等。病症：发病时期：主要在苗期，大田期也发生。发病部位：主要为害叶片。病症特点：因病原菌的生理型不同，受害部门也有差异，如美国流行的是美国生理型。主要危害幼苗，成株感染较少，不易感染茎部；欧洲流行提澳洲生理型，其危害特点是除危害烟草幼苗外，还能危害烟茎和成株。病叶外表和边缘表现淡黄色、黄绿色、暗绿色的病斑，病斑为圆形、近圆形、多角形或形状不规那么。病害开展迅速时，病斑可相互连接起来，布满整个叶片，或没有明显的界限。病叶反面密生灰蓝色或灰褐色的霜霉层，干烟叶一般表现为灰白色或灰褐色，苗床上的病苗表现为灰蓝色。条件适宜时，叶外表也产生霜霉层，随着病斑的开展，逐渐变褐色，甚至深褐色，最后成为枯褐色。干烟叶上病斑外表有突起，老病斑边缘有一圈青褐色环，与马铃薯晚疫病病症相似。烤后的烟叶病症尚隐约可见；空气湿度大时，病斑更为明显。④烟草霜霉病与其他病害的病症区别：烟草霜霉病的病斑有时容易与烟草黑胫病叶部病症相混淆。因黑胫病叶部病斑圆形，表现青褐色大斑，呈水渍状，反面霉层稀少，毛短色白，与霜霉病仍有区别。另外，烟草霜霉病染病部位产生霜状霉层，不仔细观察与烟草白粉病产生的白色粉状霉层也易于混淆，但因霜霉病的霜状霉层大多局限于病叶反面，而白粉病的粉状霉层那么在叶片的正反两面都产生，只要仔细观察亦不难区别。病原菌：PeronosporahyoscyamideBaryf.sp.tabacina(Adam)Skalicky异名

PeronosporatabacinaD.B.AdamPeronosporahyoscyamideBaryPeronosporanicotianaeSpeg英文名称：bluemouldoftobacco；tobaccobluemould；downymildew；angulartobaccoleafspot；tobaccoblackfire；tobaccowildfire分类地位：Chromista藻物界〔也称假菌界)、Oomycota,Oomycetes,Peronosporales,Peronosporaceae病原菌形态特征

细胞内菌丝产生细胞内吸器，孢囊梗在叶片的下外表通过气孔口伸出，长450-750μm，二叉式分枝，基局部枝成锐角，上部呈直角，顶端弯曲，末端尖，上生孢子囊；孢子囊透明无色，柠檬形，大小16-28×13-17m，每个孢子含8-22核；卵孢子黄褐色到红褐色，球形，大小24-75m,周围光滑或粗糙的外膜，枯燥时收缩成棱角状皱纹，在死亡叶片、叶柄和茎的叶肉中大量存在。病原菌生物学特征：在适宜湿度条件下，孢子囊生成的最低温度为1-2℃，最适宜温度为15-23℃

，最高温度为30℃

，而在最适温度条件下，孢子形成所需的最适湿度范围是叶面相对湿度97-100%。孢子囊萌发的温度范围为：最低l一2℃，最适为15－22℃，30℃有少量萌发，35℃萌发率为0.1%。卵孢子有极强的抗逆性，经贮存4年后仍能存活；在80℃下烘烤4天，然后在35℃、RH50—60％条件下发酵，孢子仍有侵染能力。致病性分化：本病菌的美国生理型和澳洲生理型致病性不同。澳洲生理型存在有3个生理小种。传播途径：

气流传播：气流传播是烟霜霉病得以造成重大危害的主要途径，而孢囊孢子是进行气流传播的主要病原体，根据气流及温度、湿度条件，孢子在两小时之内，可传播200km最高可达1600km，由于孢子所具有的高度传播能力，在南欧和北非早春的气体孢子可直接成为初侵染的来源。

卵孢子传播：在美国东南部烟区，存在于病土中的卵孢子和存在于病残烟组织中的越冬菌丝的旧苗床是翌年春季侵染来源，在加拿大甚至中欧和北欧，卵孢子也是翌年侵染的主要来源，Krober曾报告50个月的卵孢子仍可造成较低的侵染率，但田间发病那么很稀少。在南欧，卵孢子在初侵染上的传播一直未能肯定。虽然如此，由于卵孢子所具有的特殊抗逆性，存在于烟株下部叶片的卵孢子，可能是病害远地传播的另一途径。发病规律：越冬：菌丝体在田间或温室的病株、自生烟苗、野生烟草上越冬；卵孢子能在病株残体和土壤中越冬。发病条件：温度和湿度时影响病害发生和流行的主要因素，夜间温度10℃，白天21℃，有间歇小雨或结露时间长或叶面湿润，光照弱等有利于病害发生。适生区域：中国大局部烟草种植区。检验方法1.病症检查：

根据现行抽样规定，对每批烟叶按上、中、下三层以对角线抽取烟叶,来自烟霜霉病疫区的烟叶，每品种每批抽样总数应不少于5万张，每品种、各等级烟叶抽样总数应为1万至2万张。抽取的烟叶样品，应在杜绝污染的条件下适当回潮，使叶面舒张，然后在4x40W-5x40W白色荧光灯照射下检查病斑，病斑淡褐黄色，常受叶脉所限，呈不规那么圆形，易于透光，叶反面可见霜霉霉层，可以直接用立体显微镜〔50x〕观察孢梗及孢囊群体，也可在光学显微镜下鉴定病原。2.洗涤检验孢子囊：3.组织透明法检验卵孢子：卵孢子大多聚生于叶脉附近，可剪取小块病斑组织〔约0.5cm〕滴加少许PH7磷酸缓冲液〔0.02M〕在-20C冻融过夜，然后用0.02MPBS〔PH=7〕匀浆，匀浆液经80um及90um双层筛过滤并清洗取集20um筛上物离心，检查沉淀液。也可在密闭条件下有高速粉碎机〔10000rpm〕粉碎，再将粉碎后的叶组织用网目约80um的细目筛过后取筛下物，经乳酚油透明后检查。4.试植检查：为观察子叶或幼苗戡期的病症，可将种子用0.2%NaClO灭菌后，植入盛有2%琼脂培养基或任何用于植物水培的盐类培养基的密封玻皿内，每200ml培养基平面可播养1000粒种子，在20C光照条件下培养，种子出苗后的2周内，观察烟种幼苗有无染病迹象，对可疑幼苗所生成的霉层进行镜检鉴定。5.烟丝检查

仔细挑选带有暗绿色或灰褐色病斑的烟丝碎片，在双筒解剖镜下检查，选取有霜霉层病斑的碎片,置于载玻片上，滴上2-3滴苯胺兰乳酚油，用解剖针挑开铺平，加盖玻片，在酒精灯上离火焰几公分高缓缓加热煮沸，注意不要过火，以免液体喷出玻片外，并从盖玻片外补充苯胺兰乳酚油，保持不干。煮沸5--10分钟，待玻片冷却后，用吸水纸吸去多余液体即可镜检。叶片组织染成淡蓝色，卵孢子呈淡黄色至黄褐色，孢子囊和梗染成蓝色。如叶片透明度不够，还可重复加热煮沸，直至完全透明。如果需要检查的病叶较多，也可以在凹玻片上煮沸，待透明后再转到玻片上镜检。检疫和防治1.1966年我国政府公布烟霜霉病为对外检疫对象，1990年又公布法令，禁止从疫区进口烟叶及种子和有关易感植物，对因科研需要自疫区引进烟属植物幼苗的，应在指定的隔离检疫圃隔离试种，以严防此病传入。2.灭除病原。任何新区一旦发生烟霜霉病，应立即采取封锁病区，铲除发病点的措施，除处理苗床或病田外，也要消灭病菌的各种越冬场所，包括消灭感病烟株病残体，欣赏烟属和野生烟属植物，禁止病区温室栽培试验用的烟属植物。3.防治方法

药剂防治。瑞毒霉结合代森锰共同使用，由于瑞毒霉的内吸作用，可以延长药效期，取得增效的防治作用。防治烟草霜霉具有完全保护作用的药剂15种。抗病育种。栽培烟草品种间，虽然感病性存在着差异，但迄今未发现稳定的高抗品种，目前采取栽培烟与澳大利亚及南美的当地烟种，如与N.debneyi、N.excelsior等进行种间杂交，获得较好的结果。栽培防治。种子播种前消毒，加强苗床管理，对发病苗床应采用蒸气来菌，或用2%福尔马林进行土壤薰蒸，或更换新苗床，烧毁病株及残体；去除粉兰烟及野生烟，定期进行田间调查，发现病株及时拔除，消灭带病昆虫，防止人为携带等措施。马铃薯癌肿病

Potatowart分布：

日本、缅甸、尼泊尔、印度、巴基斯坦、黎巴嫩、巴勒斯坦、以色列、冰岛、丹麦、挪威、瑞典、芬兰、前苏联、波兰、捷克、斯洛伐克、匈牙利、德国、瑞士、荷兰〔比利时、卢森堡、葡萄牙曾有过报道，但病菌未定殖下来〕、英国、爱尔兰、法国、西班牙、意大利、前南斯拉夫、罗马尼亚、保加利亚、希腊、突尼斯、肯尼亚、坦桑尼亚、津巴布韦、南非、澳大利亚、新西兰〔南部岛屿〕、加拿大〔纽芬兰〕、美国〔宾夕法尼亚、马里兰、西弗吉尼亚〕、墨西哥、厄瓜多尔、秘鲁、巴西、玻利维亚、智利、阿根廷、乌拉圭。寄主植物

除为害马铃薯外，经人工接种的其他植物包括茄属、碧冬茄属、烟草属、酸浆属及Capsicastrumspp.属的一些种，此菌还侵染番茄。危害情况

主要在地下局部，侵染茎基部、匍匐茎和块茎，病菌侵入寄主刺激细胞组织增生，长出畸形、粗糙、疏松的肿瘤，瘤块大小不一，小的只出现一块隆起，大的覆盖整个薯块，有的圆形，有的形成交织的分枝状，极似花椰菜。地下的癌瘤初呈乳白色，渐变成粉红色或褐色，最后变黑、腐烂。在高感品种上，腋芽处，枝尖、幼芽均可长出卷叶状癌组织，叶反面出现无叶柄、叶脉的畸形小叶，主茎下部变粗、质脆呈畸形，尖端的花序和顶叶色淡，组织变厚易碎。有的植株矮化，分枝增多，后期保持绿色的时间比健株长。凡地上部出现病症的，地下部不结薯，几乎全为癌瘤。马铃薯癌肿病菌为害整个整个薯块病症〔HansStachewicz〕病原菌：马铃薯癌肿病菌学名

Synchytriumendobioticum(Schib)Percival

异名

Chrysophlyctisedobiotica(Schilb)；SynchytriumsolaniMassee

英文名

wartdiseaseofpotato；potatowartdisease；blackwartofpotato；potatoblackscab

分类地位

真菌界Fungi；壶菌门Chytridiomycota；壶菌目Chytridiales；集壶菌科Synchytriaceae；集壶菌属Synchytrium形态特征

病菌休眠孢子囊球形或长圆形，锈褐色，壁厚，分为三层，内壁薄而无色，中壁光滑，金黄褐色；外壁厚，色较暗，具有不规那么的脊突。直径25-75m〔有的报道为×m〕。癌肿病菌的休眠孢子囊在春季萌发形成游动孢子，卵形或梨形，具单鞭毛，这是本菌特点之一。其内含物挤出形成夏孢子囊堆，并分隔成4-9个夏孢子囊。夏孢子囊堆近球形，直径47-72×81-100m〔有资料报道为40.3-77×31.4-64.4〕，单个夏孢子囊壁薄，呈淡黄色，成熟后散出游动孢子。当条件不适宜时，配子成对结合成双鞭毛的合子，合子侵入寄主细胞，发育成休眠孢子囊，也可称为越冬休眠孢子囊，它单个地存在于寄主细胞内。生物学

休眠孢子囊需要相当长的休眠期〔几个月至30年或更长〕，才能萌发分化为孢子囊，并释放游动孢子。休眠孢子囊的抗逆性很强，100℃湿热2.5m或60℃湿热2h才能杀死；通过牲畜消化道仍可存活。休眠孢子在土壤中可长期存活。一般可存活6-8年，有的人认为可存活30年以上。游动孢子或双鞭毛的接合子寿命很短，无适宜寄主，一般2-3小时后死亡。土壤水分是夏孢子囊和休眠孢子囊萌发、释放游动孢子，以及游动孢子活动和侵入寄主的重要条件。

癌肿病菌以菌体进行繁殖，其特征是菌体内生，整个菌体转化为一个或多个繁殖体。传播途径

病原菌主要以病种薯及病土进行远距离传播。农事操作人畜传带，喂食病薯的牲畜粪，雨水和灌溉水等都可能近距离传播。国外报道，设在病区内的马铃薯食品加工厂，其污水排放也是近距离扩散的主要疫源。检验方法：

1.直接检验：有无肿瘤2.土壤检验：漂浮法收集休眠孢子囊3.染色检验：0.1％升汞或1％饿酸固定，！％酸性品红或3％龙胆紫染色，观察有无单鞭毛的游动孢子和双鞭毛的接合子4.病原菌形态观察：夏孢子囊堆和休眠孢子囊。

检疫措施：

一、处理方法：划分疫区、封锁疫区、严格检疫

二、防治方法：

1.建立无病种薯繁育基地，推广经过茎尖脱毒、组织繁殖、无土栽培、工厂化生产或家庭网箱生产的脱毒微型种薯和常规抗病品种。

2.种植抗病品种。是最经济有效且为世界各发病国家普遍采用的较为实用的方法。

3.合理轮作。可采取与燕麦、玉米、亚麻、向日葵、油菜及豆灯等作物长期轮作，能有效地减轻发病。

4.药剂和生物防治。用噻唑钠或生石灰作土壤处理，对癌肿病有防治效果。5.在出苗70%至齐苗期，亩用三唑酮有效成份60-75克〔即亩用15%三唑酮成药400-500克〕兑水2000斤灌窝和蕾期各用半量喷雾1次，每次喷药水120斤。榆枯萎病

Dutchelmdisease分布

印度、前苏联、伊朗、土耳其、丹麦、挪威、瑞典、波兰、捷克、斯洛伐克、匈牙利、德国、奥地利、瑞士、荷兰、比利时、英国、法国、西班牙、葡萄牙、意大利、前南斯拉夫、罗玛利亚、保加利亚、希腊、加拿大、美国寄主植物榆属:美洲榆Ulmus

americana

、山榆U.glabra、糙枝榆U.fulva和翼枝长序榆U.alata高度感病:荷兰榆U.hollandica中度感病；榔榆U.parvifolia、白榆、光叶榆、英国榆和帕劳榆较抗病。危害情况最具消灭性的病害之一、两次大规模的流行20世纪初期：法国→中欧→南欧→英国→北美→西南亚→中亚，后果：榆树大面积死亡，如美国1930～35年，250万株死树70年代：英国＋北美中西部→北美→欧洲→中亚→西南亚，后果：大局部成年榆树死亡，如英国南部，1970～78年，230万棵榆树中有75％死亡；葡萄牙，1979年80％的榆树死亡。为害病症新稍萎嫣→叶片变成黄褐色→死亡枯槁的叶片往往悬挂在枝条上一段时间不脱落病症从一个枝条迅速蔓延到另一个枝条，渐向较大枝条扩展，最后涉及全株，导致整株榆树死亡病枝颜色较深,横切面深褐色的条纹和斑点,呈褐色环；纵剖面褐色长条纹状；树杈处有许多害虫的坑道ArowofdeadelmtreesaffectedbytheDutchElmDiseaseinBelgiumaround1920病原菌：榆蛇口壳

Ophiostomaulmi(Buisman)Nannf.新榆蛇口壳

O.novo-ulmi

Brasier异名

Ceratocystis

ulmi

榆长喙壳分类地位

Fungi;Ascomycota;Ascomycetes

;粪科菌亚纲Sordariomycetidae;蛇口壳目Ophiostomatales;蛇口壳科Ophiostomataceae;蛇口壳属Ophiostoma.无性态：发簇孢属Sporothrix和粘束孢菌属Graphium病原形态：

异宗配合。子囊壳黑色，基部球形，具长颈，以褐色假根状菌丝表生或埋生在基质上。O.ulmi：壳基宽100-150

m，颈长280-510

m，颈基宽18-42

m，颈顶宽11-16

mO.novo-ulmi：壳基宽75-140

m，颈长230-640

m，颈基宽19-36

m，颈顶宽9-14

m。子囊球形至卵形，壁薄，易消解，子囊孢子透明，单胞、桔瓣形，大小为4.5-6×1-1.5

m，成熟后，随膨胀的胶质物从长颈内流出，聚集成奶白色的粘性孢子滴。生物学特性致病力培养基上生长速度最适温度菌落形态O.ulmi弱导致第一次流行慢30℃蜡质光滑O.novo-ulmi强导致第二次流行快20～22℃绒毛型越冬菌丝体、子囊孢子、分生孢子在衰弱的病株内或被砍伐的病树、死树内的虫道和蛹室中越冬田间主要随昆虫传播。已肯定的介体有:欧洲榆小蠹、欧洲大榆小蠹、美洲榆小蠹、闪光边材小蠹、炸黑小蠹、短体边材小蠹、额沟黑小蠹、腹瘤小蠹,虽然传播介体种类很多,但最主要的是前3种小蠹虫。远距离传播：苗木、原木、木制品和包装箱垫的榆木传播途径夏秋季，小蠹虫的雌虫成在病死树木或快死的榆树上食蛀产卵，来年春天与羽化出来的成虫身上和体内大量的病菌孢子，这些昆虫取食健康的树木，使得孢子由取食部位侵入树体内部。通过根接也能传播病菌。侵染规律抗病性:欧美榆一般感病，亚洲榆比较抗病。春季和初夏形成的导管孔径大，并无分隔，这个时期是榆树的高感阶段。不同地区，各传病介体起的作用不同。在北美，欧洲榆小蠹和美洲榆小蠹同时存在，但由于前者的繁殖速度大于后者，所以就更为重要；而在英国，欧洲大榆小蠹的羽化时期适逢榆树的最感病阶段，所以是比较重要的介体。长期干旱而炎热的天气以及充足的肥料也有利于病害的发生。影响发病因素严格施行检疫,禁止从榆枯萎病疫区引进榆属苗木和原木,对传病介体昆虫的检疫也需引起重视.外观病症检验病原菌鉴定分子生物学方法：已选择出对病菌产生的霉素有特异性的单克隆抗体,它可检测和定位出植物组织中的毒素,是一种很灵敏的鉴定手段.检疫与检验营林防治：对发病的枝条及时修剪,处理,对根部感病的树,施行毁根,嫁根,已死和频死的树要彻底烧毁.化学防治：喷施杀虫剂防治介体昆虫,亦可给病树注射缝隙磷,二甲砷酸,杀死寄居树干的传病介体.利用杀菌剂进行喷施和茎干注射可起治疗和保护作用,较有效的杀菌剂为多菌灵和涕必灵生物防治：绿色木霉,丁香假单胞,荧光假单胞，镰刀菌和菊属植物提取物对菌也有抑制效果.

在介体生防方面,已合成欧洲大榆小蠹的性外激素,还发现一种寄生蜂,另外苏云金杆菌和木酶亦对防治小蠹虫有效果。抗病品种防治方法复习思考题1．试述小麦矮腥黑穗病的病症特点、病原菌形态特点；病害发生规律和流行条件；在国内的适生区域以及检疫检验方法。2．试述小麦印度腥黑穗病的病症特点、病原菌形态特点；病害发生规律和流行条件；在国内的适生区域以及检疫检验方法。3．试述马铃薯癌肿病的病症特点、病原菌形态特点；病害发生规律和流行条件；在国内的适生区域以及检疫检验方法。4．试述烟草霜霉病的病症特点、病原菌形态特点；病害发生规律和流行条件；在国内的适生区域以及检疫检验方法。5．检疫性病原真菌的检验方法主要有那些？第六章

检疫性细菌病害

植物检疫性病原细菌的检验方法

梨火疫病FireBlight

玉米细菌性枯萎病Stewart’sbacterialwiltofcorn

柑橘黄龙病CitrusYellowshoot

椰子致死黄化病CoconutLethalYellowing复习思考题植物病原细菌检疫检验技术直接检测：直观检验和生长检验间接检测活菌检测免疫吸附别离法噬菌体检验非活菌检测血清学检测1、活菌检测别离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴别培养基别离纯化得到的细菌浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感病植物，观测发病情况。例如：浙江大学等在1％灭菌水琼脂中加75×10－6的苯并咪唑，做平板，加感病植物叶片，针刺＋摩擦接种，培养〔光、温、湿度〕，短期获得病症。主要应用于水稻细菌性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。2.免疫吸附别离法原理：接合血清学与平板别离技术，利用与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸附稀释培养法平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下：常用溶入丙酮的硝酸纤维素或指甲油作包被洗涤液使用包被缓冲液3.噬菌体检验原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞，在液体培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变清，在固体平板上培养，那么出现许多边缘整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类。4.非活菌检测非活菌检测的方法很多，下表是检测病原细菌常用的一些方法，前9种血清学方法，均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定，又能直接用于病种或病株，甚至是无症感染组织的检测。5.血清学检验原理：方法：酶联免疫吸附实验〔ELISA〕、免疫荧光抗体法免疫荧光抗体法：将荧光染料〔异硫氢酸荧光黄或罗丹明〕与抗体以化学方法接合，再与抗体反响，形成有荧光标记的抗体—抗原复合物，在荧光显微镜下，可观察到黄绿色荧光。梨火疫病

Fireblightofpear分布：1878年首先由burrill描述，在纽约发生，后由Erwin命名，是第一个被确定的植物细菌病害。主要分布于北美洲于西北欧，中欧、地中海、东南欧及大洋州和亚洲也有分布。大约40多个国家。梨火疫病的地理分布寄主：梨火疫病菌寄主范围很广，能为害梨、苹果、山楂、木旬子、李等４０多个属220多种植物，大局部属蔷薇科Pomoideae亚科。危害性：仁果类果树的一种消灭性病害。一棵多年生的梨和苹果树发病后可在几星期内死亡病症：侵害花、果实、枝条和叶片。花:侵染后变深褐色，枯萎。叶片:从叶缘沿叶脉扩展，先呈水浸状，后黑褐色。嫩稍:先水浸状，后褐色至黑色，向下弯曲，呈鱼钩状。果实：病部褐色凹陷，扩展到全果，潮湿时病部生粘稠的细菌溢，初乳白色，后红褐色。病枝:叶片凋萎，幼果僵化，但病叶病果不脱落，远望似火烧状，故称火疫病。伤口：初期水浸状，后下陷，呈溃疡斑，病健交界处产生龟裂纹，韧皮部红褐色，有黏液状菌脓。严重时，病害从嫩稍很快扩展到枝条、主干，直至根部，全株死亡。Advancedfireblightonfruit-notebacterialoozeonfruit.

Fireblightinnurserystock

主要鉴定特征：梨火疫病最典型的病症是花、果实和叶片受火疫病菌侵害后，很快变黑褐色枯萎，犹如火烧一般，但仍挂在树上不落，故此得名。目前国际上将其病症据受侵害的部位，分成５个阶段。〔1〕花枯萎：侵染开放的花引起花枯萎。一般发生于早春，病菌直接从花器侵入，初为水渍状斑，花基部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可扩展至花梗及花簇中其它的花；在温暧潮湿条件下，花梗上有菌脓渗出。随着枯萎开展，花梗、花等变褐至黑褐色，条件适宜时可继续侵染杀死小枝并形成小溃疡斑。〔2〕溃疡枯萎：是指前一季越冬溃疡边缘的病菌重新复活的结果。初症是在复活的溃疡附近的健康树皮组织上出现窄的水渍状区，几天后，树皮内部组织出现褐色条斑，随后病菌侵入附近繁殖枝内部并引起萎蔫死亡。这些枝条特别是嫩枝与下面谈及的枝枯萎有明显区别，即在萎蔫之前枝尖芽褪色〔黄至桔黄色〕。〔3〕枝枯萎：细菌直接侵入前1～3叶的枝尖，然后杀死整个枝条及支持枝。初症是枝尖萎蔫，但萎蔫前不褪色，象拐杖状。条件适宜时，几天内可移动15～30cm，造成整枝死亡，病枝、枝皮、叶通常变黑。潮湿时，枝条上出现菌脓。后期，终芽前出现的枝枯萎一般不会萎蔫，且仅在枝最上部出现坏死。随着病菌不断深入，并侵染主干，皮层收缩，下陷，形成溃疡斑。〔4〕病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞，或由风引起的伤口侵入叶片，初叶边坏死，并向中脉、中柄、茎扩展，后变黑，通常有菌脓。〔5〕损伤枯萎和砧木枯萎：这二种比较特殊，前者主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起，如果实很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种EMAL-26、EMLA-9和MARK-39砧木。通常是由感病的接穗在这些砧木上发病后引起，最终成溃疡带而杀死树体。病原菌：学名：Erwiniaamylovora〔Burrill〕Winslow异名：MicrococcusamylovorusBurrilBacillusamylovorus(Burrill)TrevisanBacteriumamylovorus(Burrill)Chester

分类地位：原核生物界(Procaryotes),薄壁菌门(Gracilicutes),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)欧文氏菌属(Erwinia)解淀粉欧文氏菌

形态特征：直杆菌，有荚膜，周生鞭毛，能运动，大小为0.9-1.8×0.6-1.5µm，多数单生，有时成双或短时间内3-4个呈链状。革兰氏染色阴性。在蔗糖培养基上27℃下培养3d，菌落直径3～4mm，白色至奶油色，半球形隆起，有黏性，外表光滑，边缘整齐，中心绒环状。

生物学特性：兼性厌氧，过氧化物酶阳性，氧化酶阴性，好气条件下利用葡萄糖产酸不产气，厌氧条件产酸缓慢。明胶碟形液化缓慢。不产生硫化氢，不利用丙二酸盐。葡萄糖酸盐氧化和七叶苷水解不稳定。氯化钠浓度高于2％以上时生长延缓，至6％－7%时那么完全抑制。抗青霉素，对氯霉素、链霉素和土霉素敏感。细菌生长的温度范围6～37℃，最适温度25～27.5℃，致死温度45～50℃，10min，最适酸碱度为PH6.0。梨火疫病菌以简单的细胞分裂繁殖，一个细胞在条件适宜时，３天内在寄主植物组织中能到达109细胞，每个细胞都是一个侵染源，感染寄主而引起病害的开展。除蛋白酶外，病菌不产任何有助于侵入寄主的酶，主要是在环境条件适宜时，通过胞间组织侵入薄壁组织的病菌产生胞外多糖。胞外多糖在病害开展过程中起重要的作用，其是菌脓的重要成份。菌脓的理化性质随湿度变化而变化，干时皱、硬，大时膨胀易被雨水扩散，中等湿度的菌脓粘易被昆虫、风传播。发病规律：病菌在病株病疤边缘组织处越冬，挂在树上的病果也是越冬场所，如果冬季温和，病菌还能在病株树皮上度过，来年早春病菌在上年的溃疡处迅速繁殖，遇到潮湿、温和的天气，从病部渗出大量乳白色粘稠状的细菌分泌物，即为当年的初侵染源，通过昆虫、雨滴、风、鸟类以及人的田间操作将病菌传给健株。病菌亦通过伤口、自然孔口〔气孔、蜜腺、水孔〕、花侵入寄主组织，有一定损伤的花、叶、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。传播途径近距离传播：雨水是果园短距离传播的主要因子，其次风亦是中短距离传播的重要因子，往往在沿着盛行风的方向，病原菌以单个菌丝、菌脓或菌丝束被风携带到较远距离。除次之外，昆虫对病菌的传播扩散起一定的作用。传病昆虫包括蜜蜂在内有77个属的100多种昆虫，其中密蜂的传病距离约为200~400m。远距离传播：主要是感病寄主繁殖材料，包括种苗、接穗、砧木、水果、被污染的运输工具、留鸟等。梨火疫病的远距离传播发生条件：受伤的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵染。经冰雹袭击，病害蔓延更加迅速。较高气温〔18～24℃〕和较高的湿度〔70％以上〕有利于病菌侵染。检验方法：1.产地检验：2.病症观察：梨火疫病的病症很典型，是鉴定的重要方法，但必须与其他病症相似的梨梢枯病区分开。梨梢枯病仅限于危害花器、叶片和嫩梢，不危害枝条和茎干，病部无细菌溢脓，叶片上最初为深褐色斑点，周围有红色晕圈，枯死的病叶不会长期挂在树上3.别离培养可采用选择性培养基和鉴别性培养基进行。MS培养基菌落为红橙色，背景为兰绿色。配方：琼脂20g，甘露醇10g，L-天门冬酰胺3g，牛胆酸钠2.5g，磷酸氢二钾2.0g，烟酸0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，次氮基三乙酸0.2g，硫酸十七烷基钠0.1ml，0.5%溴麝香草酚兰水溶液9ml，0.5%中性红2.5ml，蒸馏水970ml，pH7.3灭菌后加1%放线菌酮5ml，1%硝酸铯水溶液1.75ml。CG培养基在29℃培养48小时后形成典型的火山口状菌落。配方：水380ml，蔗糖160g，营养琼脂12g，结晶紫0.8ml〔1%乙醇溶液〕，0.1%放线菌酮20ml。4.致病性实验梨火疫病菌致病性试验可用梨片或梨嫩枝测定，亦可用烟草过敏反映检查。NA上培养48小时的细菌配成108cells/ml的悬液，注入烟草叶片或接种于1cm厚梨片、或针刺接种于１丈长的巴黎枝条，28℃下培养，一般10~12小时后，烟草注射区出现白色坏死斑。1~3天后，梨片或枝条上出现白色菌脓，那么可确诊。5.血清学检验：免疫荧光、ELISA、ODD和凝集实验6.分子生物学方法：核酸探针和PCR技术检疫和防治1.严格检疫，禁止从疫区引入蔷薇科仁果类果树树苗。2.剪除病梢病枝。3.药剂防治：120mg/kg链霉素喷雾，或花期用波尔多液喷雾防治，效果很好。4.种植抗病品种：5.防止在低洼易涝地定植。芽前刮除发病树皮，在生长季节每隔7天检查1次各种发病新梢和组织，发现后及时剪除。对因各种农事操作造成的伤口都要进行涂药保护等。玉米细菌性枯萎病

Stewart’sbacterialwiltofcorn分布：1889年纽约首先报道，现已20多个国家。分布于美国、加拿大、墨西哥、越南、泰国、马来西亚、前苏联、波兰、瑞士、意大利、前南斯拉夫、罗马尼亚、希腊、、哥斯达黎加、波多黎各、圭亚那、秘鲁、巴西。寄主植物主要是甜玉米，也侵染马齿玉米、粉质玉米、硬粒玉米和爆裂玉米。危害：维管束病害、消灭性病害。病症：整个生育期都可危害，以开花期病症最明显。早期病症表现为植株矮化，萎蔫，雄穗退色早枯，叶片边缘产生波纹状不规那么病斑，初期水浸状，黄色，与叶脉平行，贯穿全叶，宽1～10mm，严重时病叶萎蔫死亡。生长后期，叶片产生许多小病斑，结合成大块，火烧状枯槁死亡。髓部有空腔，导管被黄色黏液阻塞，萎蔫植株的下部切口有黄色细菌溢脓。果穗的菌脓可通过内层包叶的气孔渗出，籽粒外表沾满细菌菌脓，病籽粒变形、皱缩和变色。Necroticlesionsonmatureleaves;secondphaseofStewart'swiltdisease.病原菌：玉米细菌性枯萎病菌学名

Pantoeastewartii(Smith)Mertaertetal.

异名

Erwiniastewartii(Smith)Dye；PseudomonasstewartiiSmith;Apalnobacterstewartii(Smith)McCulloch;Bacillusstewartii(Smith)Holland;Bacteriumstewartii(Smith)Smith;Phytomonasstewartii(Smith)Bergyeetal;Pseudobacteriumstewartii(Smith)Hrasil’nikov,1949;Xanthomomasstewartii(Smith)Dowson

英文名

Stewart’sbacterialwiltofcorn

分类地位

原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌门(Gracilicutes)，肠杆菌科(Enterobacteri-aceae)，泛菌属(Pantoea)形态特征：好气性短杆菌，两端钝圆，无鞭毛，有荚膜，G－，单生或双生，0.4~0.8×0.9~2.2㎛。在牛肉膏培养基上形成黄色圆形菌落，全缘，外表扁平光滑，能利用葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、木糖、甘油鹤甘露糖、醇等产酸，但不产生气体。在肉汤培养液中生长微弱，形成灰色环和黄色沉淀物。

细菌生长温度最低温度8～9℃，最适温度30℃，最高温度39℃，致死温度53℃10min，适宜PH4.5～8.5，最适6.0～8.0。发病规律：初侵染来源——带菌的种子和昆虫。土壤和病原残体不能越冬，昆虫是病原细菌的传播介体和重要的越冬场所。最重要的传病昆虫是玉米叶甲，它以成虫带菌越冬，细菌存在于消化道中。越冬后现在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并产卵发育成新一代成虫，继续向其它植株传病。Cornfleabeetle(Chatocnemapulicaria)vectoroftheStewart'swiltbacterium(Pantoeastewartii).流行条件：发病与流行主要决定于冬季气温〔12、1、2月〕的上下，假设平均气温总和在37℃以上，有利虫媒越冬，带菌昆虫成活率高，有可能引起发病。低于32℃那么很少流行。此外有利于发病的条件包括土壤氮肥水平偏高，钾肥水平偏低，高温高湿等。检验方法：产地检验：种植检验：种子长出的植株有明显的病症。别离培养基：采用伊凡诺夫选择培养基，其成分如下：甘油30ml柠檬酸铁铵10g磷酸氢二钾2.5g,氯化钠15g硫酸镁0.1g,琼脂17g氯化钙0.1g,蒸馏水1000ml,PH7.0为了抑制杂菌的污染,还可采用选择性黑色素培养基,其成分如下:酵母浸膏1g甘油30ml制霉菌素200mg/ml牛胆酸钠3g氯化钠15g1%水溶性黑色素20ml琼脂17g蒸馏水1000mlPH6.730℃下培养7d，对光观察，菌落中心呈黑色，边缘透明，菌落圆形，外表光滑，呈粘状。将别离的细菌接种在玉米苗上，验证是否发病。4.噬菌体检验法：用专化性噬菌体，如ZP6、ZP82等检验。5.血清学检验：用酶联免疫法等检验。检疫和防治1.禁止从国外疫区进口玉米种子2.种子处理：〔1〕微波炉70℃处理10min，效果很好。〔2〕环氧乙烷熏蒸：〔3〕恒温处理：50℃下处理4d，消灭种子内部细菌效果显著，不影响发芽。〔4〕抗菌素温浸法：3.防治传播媒介昆虫：4.种植抗病品种：柑橘黄龙病

CitrusYellowshoot分布：1939年在中国广东发现该病，现已扩展到亚洲和非洲37个国家和地区，中国主要发生在广东、广西、福建、台湾、海南、云南、贵州、四川、浙江、湖南、江西等省。寄主：主要是柑橘属、金柑属和枳属。草本植物有长春花。危害：是柑橘的消灭性病害，感病的柑桔品种得病后可在3－5年内丧失结果能力，甚至枯死。病症：典型病症是在浓绿的树冠中出现1－2条或多条的发黄枝梢，有两种类型：一种是整张叶片均匀黄化，另一种是叶片呈黄绿相间的斑驳状。共同特点是叶质硬化、无光泽，但在黄梢下部的老叶仍呈正常绿色。病果小，果皮光滑，畸形，无光泽，味酸，果皮着色时黄绿不均匀或在果蒂附近变橙红色，而其余部份仍为青绿色的青果

病原Liberobacterasiaticum〔亚洲〕、Liberobacterafricanum〔非洲〕分类地位：原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌门(Gracilicutes)，韧皮部杆菌属Liberobacter英文名称：CitrusHuanglongbing；CitrusYellowshoot；Citrusgreening未能在人工培养基上别离获得纯培养，在电镜下为椭圆形或短杆状的细菌，大小为30－600×500－1400m，细胞壁厚度为25－30m。革兰氏染色阴性，对四环素及青霉素敏感。根据其对热的反响和传病木虱的不同，分为两个株系：在亚洲，其发病的最适温度为27－32℃，传播介体为亚洲木虱〔Diaphorinacitri〕，病原为柑桔黄龙病原亚洲株系〔L.asiaticum〕；在非洲，其发病的最适温度为20－24℃,传播介体为非洲木虱〔Triozaaryteae〕病原为柑橘黄龙病非洲株系〔L.africanum〕。可以通过嫁接及菟丝子传播，但不能通过汁液和土壤传播。传播：远距离传播主要是来自病区调运的苗木、接穗；大田主要依靠柑橘木虱进行传播，在亚洲是亚洲木虱，在非洲是非洲木虱。发生条件：亚洲多发生在热带亚热带地区，喜高温；在非洲多在冷凉气候下发生，30℃以上高温病害受抑制。检验与检测：1.产地检验：每年10～12月病症表现最明显2.生物学诊断：鉴别寄主法3.电镜检查：4.荧光显微镜检查：黄色荧光5.化学诊断：染色法6.血清学检测：检疫与防治：1、实行检疫

禁止病区苗木及一切带病材料进入新区和无病区，新开辟的果园要种植无病苗。2、建立无病苗圃，培育无病苗木要切实做到①对优良单株进行脱毒〔茎尖嫁接脱毒或热力脱毒〕并经鉴定证明不带菌；②在网室内建立种质圃；③在隔离地方或在网室内建立无病母本园；④在隔离地方或在网室内建立无病苗圃。3、挖除病株

发现病株或可疑病株，应立即挖除，用无病苗进行补植。4、防治柑桔木虱

通过水肥管理控梢以减少木虱繁殖和传播。新梢期喷布1－2次杀虫剂。果园四周栽种防护林带，对木虱的迁飞也有阻碍作用。椰子致死黄化病

CoconutLethalYellowing分布

椰子致死黄化病的名称来源于NutmanandRoberts(1955)。他们首次用致死黄化〔lethalyellowing〕命名在加勒比海、牙买加西部地区发生的一种椰子