刺参细菌性腐皮综合征调查技术规范_第1页
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1GB17378.7海洋监测规范第7部分：近海污NY5052无公害食品海水养殖NY5070无公害食品水产品中渔药残DB37/T442无公害食品刺刺参细菌性腐皮综合征bacterialskinulcersynd25.1调查人员接到报告后应立即到达疾病发生地对疾病进行核实。通过观察刺参身体是否出6.2诊断确定刺参细菌性腐皮综合征病原存在，遵循“早发现、早隔离、早治疗”6.3专业调查人员应根据调查、诊断、治疗情况，提出处理措施和技术方案，协助7.1现场调查判定为刺参细菌性腐皮综合征后，上一级渔业技术服务机构应组7.3上一级渔业技术服务机构应组织有关专家确定可能受到威胁的区域，提出3b)应涉及监测地点现场调查、追踪调查、溯源调 水质条件：(温度、盐度、酸碱度、溶氧、氨氮、浮游动典型征状：□急性发病死亡□体色正常(棕色/淡红色/绿色)或发白□体表溃烂 6置28℃培养1d～2d后挑取优势菌落，重复培养3次以获得纯化菌株。记录纯化菌株的形状、大小、颜B.2.1.2挑取单菌落，用2%戊二醛电镜固定液固定数分钟，取一滴固定好的菌液置于铜网上，以3%对纯培养细菌菌株进行16SrDNA分析。首先提取纯培养细菌菌株DNA，测定其浓度，保证在60-100ng/μL。以此为模板、利用16S通用引物(27f:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，1492r:5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR扩增。50μL的PCR反应体系中含有：PreMix混合物25μL，浓度20μmol/L引物各1μL，DNA模板1μL，加蒸馏水至50μL体积。PCR反应条件为：94℃预得序列结果，将结果上传NCBIGenBank数据库进行Blast比对，选择同源性较高7征征 ：（疾病发生地养殖水质条件：(温度、盐度、酸碱度、溶氧、氨氮、浮游动 设施条件：(育苗池、养殖池、饵料池、供水系统、供热系统、供电系统，包括进排水发病情况□急性发病死亡□体色正常(棕色/淡红色/发病情况发病后的处理措施近三年疾病发生 疾病发生监测区疾病发生监控区周围河流、湖泊：□有□无发病动物来源情况发病动物去向情况 水质条件：(温度、盐度、酸碱度、溶氧、氨氮、浮游动设施条件：(育苗池、养殖池、饵料池、供水系统、供热系统、供电系统，包括进排水疾病发生地天气 感染源及感染途径 针对疾病的防治疾病发生后期的 近三年疾病发生监测技术方案情况E.2.1.2取样前应准备一份样品收集程序文件，包括样品收集前完成工作的核查表、收集样E.2.4.4若发现问题，应及时将严重溃烂的个体拣出后掩埋或无害化处理，未发病和病轻的个体可用E.2.6.6每月或发现刺参异常时要通过DGGE或高通量测序技术进行水质和刺参肠道内微生物a)一般煮沸法：普通锅内煮沸1.0h。适用对象包括c)焚烧法：在焚化炉中烧毁碳化。适用最初调查情况 现场调查情况 现场调查情况 追踪调查情况

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