生防细菌的鉴定及抗菌能力测定_第1页
生防细菌的鉴定及抗菌能力测定_第2页
生防细菌的鉴定及抗菌能力测定_第3页
生防细菌的鉴定及抗菌能力测定_第4页
生防细菌的鉴定及抗菌能力测定_第5页
已阅读5页，还剩4页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验十生防细菌

的鉴定及抗菌能力测定2010.05.11

实验目的生防细菌的纯化培养生防细菌的分子鉴定生防细菌的抗菌谱及抗菌能力测定实验原理和步骤生防细菌的纯化培养抗菌谱的测定准备

粗筛分离得到的生防细菌需要在平板上划线分离，直至分纯出单菌落。每组包扎培养皿1包（每包不少于6个）将单菌落生防菌按照图示，在培养基一侧接种成为一条直线，置于30℃培养备用。Day2生防细菌的液体摇瓶培养抗菌谱的测定挑取划线分离得到的一个生防菌的单菌落，接种于10mL培养基三角瓶，置于30℃摇床培养备用。将待测菌按照图示，在垂直于生防菌培养物一侧分别接种大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌，置于30℃培养箱备用。每组准备小包装1.5mL离心管、蓝色白色黄色枪头若干生防细菌的分子鉴定

16SrDNA是编码原核生物核糖体RNA小亚基16SrRNA的基因，与细菌整个基因组的变化相比，它具有高度的保守性，其变化的概率与细菌的变异和进化程度是一致的，所以有助于细菌的鉴定和分类。结合完善的数据库，16SrDNA序列分析可以快速准确的对细菌进行种属鉴定，确定细菌在进化中的位置。16SrDNA序列包含10个可变区和与之相间的11个恒定区。根据恒定区的保守性可以设计出细菌的通用引物，并且扩增出所有细菌的16SrDNA片段。可变区因细菌而异，能够揭示生物物种特征核酸序列，是种属鉴定的分子基础。（二）细菌的16SrRNA分子鉴定反应体系：在一个PCR管中用微量移液枪依次加入：

Taqbuffer（10×）

5ulMgCl21uldNTP

2.5ulPrimerK1+K2

2ulddH2O

39ul用灭菌小枪头挑取单菌落于PCR管中，使菌体悬浮于反应体系中。rTaq（2U/ul）

0.5ulPCR反应条件：95℃预变性5min后，95℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共25个循环，72℃延伸10min。

抗菌谱结果观察生防菌抗菌能力测定

观察抗菌谱平板。评价生防菌对三种待测菌的拮抗性能。每组制3块敏感菌的混菌牛膏蛋胨培养基平板。0.1mL的敏感菌菌液；倒入融化好的牛膏蛋胨培养基（不烫手）并轻轻摇晃混匀，冷却为平板。用记号笔将平板划分为4个区域取1mL生防菌菌液，于1.5mL离心管中。8000rpm离心5分钟用灭菌小滤纸片均匀地吸足上清放在敏感菌混菌平板上。将平板置于30℃培养箱培养24-48h

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论